请教大家一个关于pulldown之后MS的问题 - Biology版

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Biology版 - 请教大家一个关于pulldown之后MS的问题

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l***g
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想先做GST-pulldown，然后用pulldown产物电泳银染切胶回收去做MS。问题是，如果我
现在想用细菌中纯化的GST融合蛋白，应该bind多少蛋白到多少的beads上（100ul？）
，然后用HeLa细胞的裂解液来亲和吸附，应该大概用多少HeLa细胞裂解液？我感觉细胞
裂解液少了的话可能结合在GST融合蛋白上的蛋白太少了，在之后洗脱的过程中可能又
损失点，然后在银染的话可能看不出来。如果不用裂解液用动物组织，譬如rat或者
sheep的脑子，大概需要裂解多少克的脑子？多谢！

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