i*********0
发帖数: 915 | 1 这个骨架蛋白，文献上都说的是神经元细胞特异的表达，会不会在其他地方也表达？
最近做的ES 细胞的IF， 发现OCT4+ 的细胞也表达β-Tubulin III +。但是一旦ES细胞
分化了，这个表达就没有了。 |
s******y
发帖数: 28562 | 2 这是有可能的。
也许你们的那个ES cell 有neuron stem cell 的特征。
【在 i*********0 的大作中提到】
: 这个骨架蛋白，文献上都说的是神经元细胞特异的表达，会不会在其他地方也表达？
: 最近做的ES 细胞的IF， 发现OCT4+ 的细胞也表达β-Tubulin III +。但是一旦ES细胞
: 分化了，这个表达就没有了。
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a*****x
发帖数: 901 | 3 neuron stem cell 应该没有Tuj1吧。真正的ES应该没有信号的 |
s******y
发帖数: 28562 | 4 我以前隐约听另外做干细胞的人说的，他说现在很多人说的干细胞其实就
是多功能的可诱导转化的细胞，并不一定就真的是纯粹意义的上干细胞。
很多这种细胞即使已经开始开始分化了，但是还是能够扳到其他方向去的。
【在 a*****x 的大作中提到】
: neuron stem cell 应该没有Tuj1吧。真正的ES应该没有信号的
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a*****x
发帖数: 901 | 5 其实我还是有疑问。我虽然不是专家，但是也培养过iPS，并derive成neuron.Tuj1的信
号在iPS里是根本看不见的。到neuro progenitor stage 有一些，大概10%左右。sort
NCAM以后继续分化，绝大多数才有Tuj1。 |
i*********0
发帖数: 915 | 6 我也觉得奇怪，在我的那个line 的“es” cell中，有Tuj1的表达，但是，一分化，
tuj1就不表达了，但是在分化以后，tuj1在neuron中又开始出现了。 |
u**********d
发帖数: 573 | 7 是否确定是tuj1的信号？可以做做western看能不能在ES的WCE里检测到条带，及大小是
否合适；
是否其它的ES细胞系也是这样？
如果你确实检测到的是tuj1的信号，我怀疑你的ES疯掉了，比如REST没了，可以看看其
它的neural lineage marker信号。
另外，确实有报道说oct4能在NSC中残留的。
【在 i*********0 的大作中提到】
: 这个骨架蛋白，文献上都说的是神经元细胞特异的表达，会不会在其他地方也表达？
: 最近做的ES 细胞的IF， 发现OCT4+ 的细胞也表达β-Tubulin III +。但是一旦ES细胞
: 分化了，这个表达就没有了。
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i*********0
发帖数: 915 | 8 这个line确实是比较奇怪，但是可以确定的是这些OCT4+ cell，不表达nestin。
【在 u**********d 的大作中提到】
: 是否确定是tuj1的信号？可以做做western看能不能在ES的WCE里检测到条带，及大小是
: 否合适；
: 是否其它的ES细胞系也是这样？
: 如果你确实检测到的是tuj1的信号，我怀疑你的ES疯掉了，比如REST没了，可以看看其
: 它的neural lineage marker信号。
: 另外，确实有报道说oct4能在NSC中残留的。
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l*******i
发帖数: 153 | 9 RNA-seq结果显示，TUBB3在人的ES细胞（H1）里是高表达的。这可能与ES细胞和神经干
细胞培养都需要bFGF有关，高浓度的bFGF很可能使ES bias nueroectoderm的分化方向
。 |
a*****x
发帖数: 901 | 10 it says "hpNSC derived neurons express TUBB3", 没有说hpSC或者hpNSC express
TUBB3啊 |
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a*****x
发帖数: 901 | |
l**********1
发帖数: 5204 | 12 同召唤N 院士回答。。
【在 a*****x 的大作中提到】
: 到底怎么回事弄明白了吗？召唤N院士回答。。。
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n********k
发帖数: 2818 | 13 同召唤，他是谁呀，那年评的，怎么找不到这个人的说。
前一阵子本来想回的，不过我不做ES细胞，不是很确定，所以想想算了。我说说我的对
这个简单问题的富杂想法哈，ES是个COMPETENT的状态，所以很多基因在ES都有本地表
达，尤其是NUERAL的，有不少表达量还挺高，但可能是完全不相关的功能，比如说NR1
（？），表达量就很高；TUBB3 是一直作为神经元分化的标记，但是其实在干细胞是有
表达的，而且mRNA是不低的，很多神经基因在干细胞比前体细胞表达更高，文献中有，
我自己也看到。还有，我目前用的TUJ1抗体都是有背景，而且不低，也可能是本底表达
，分化的话， 染色会增强很多很多，所以我不看片子，我不相信任何人的照片，太容
易造假了，不过形态可以帮忙确定。简单的说，就是我不知道ES的情况，但是表达不表
达很多时候是相对的。
【在 a*****x 的大作中提到】
: 到底怎么回事弄明白了吗？召唤N院士回答。。。
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i*********0
发帖数: 915 | 14 请问一下这个是那一片文献。
我在slide上看到的确实是Tuj1在ES中表达比分化的弱很多，但是相对与其他的一下已
经分化的细胞来说大一点。
NR1
【在 n********k 的大作中提到】
: 同召唤，他是谁呀，那年评的，怎么找不到这个人的说。
: 前一阵子本来想回的，不过我不做ES细胞，不是很确定，所以想想算了。我说说我的对
: 这个简单问题的富杂想法哈，ES是个COMPETENT的状态，所以很多基因在ES都有本地表
: 达，尤其是NUERAL的，有不少表达量还挺高，但可能是完全不相关的功能，比如说NR1
: （？），表达量就很高；TUBB3 是一直作为神经元分化的标记，但是其实在干细胞是有
: 表达的，而且mRNA是不低的，很多神经基因在干细胞比前体细胞表达更高，文献中有，
: 我自己也看到。还有，我目前用的TUJ1抗体都是有背景，而且不低，也可能是本底表达
: ，分化的话， 染色会增强很多很多，所以我不看片子，我不相信任何人的照片，太容
: 易造假了，不过形态可以帮忙确定。简单的说，就是我不知道ES的情况，但是表达不表
: 达很多时候是相对的。
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n********k
发帖数: 2818 | 15 没有那篇文献，是很多，是在一个领域久得积累，当然也有文献，但是好像都不是直接
说的。另外，不是很明白你的后半句。
【在 i*********0 的大作中提到】
: 请问一下这个是那一片文献。
: 我在slide上看到的确实是Tuj1在ES中表达比分化的弱很多，但是相对与其他的一下已
: 经分化的细胞来说大一点。
:
: NR1
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l**********1
发帖数: 5204 | 16 If olfactory epithelium (OE) ES cell,
pls refer one paper:
Wang YZ. et al. (2011)
Canonical Wnt signaling promotes the proliferation and neurogenesis of
peripheral olfactory stem cells during postnatal development and adult
regeneration.
J Cell Sci. 124: 1553-63
Pubmed link:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21486944
citation:
Tuj1+ (anti-neuron-specific class III beta-tubulin) neurons
were also located toward the periphery of the flattened sphere (Fig.
5E), and their neurites or axons passed among the BLBP+ cells
(Fig. 5F).
【在 i*********0 的大作中提到】
: 这个骨架蛋白，文献上都说的是神经元细胞特异的表达，会不会在其他地方也表达？
: 最近做的ES 细胞的IF， 发现OCT4+ 的细胞也表达β-Tubulin III +。但是一旦ES细胞
: 分化了，这个表达就没有了。
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i*********0
发帖数: 915 | 17 我做的EB formation assay，实验的目的是想看看EB 有没有neuronal
differentiation，用Tuj1的抗体来检测。同时，我用oct4的状态（也用是免疫荧光）
来判断细胞的状态（stem cell or differentiated cell）。oct4+ 的细胞，在核周围
可以看到Tuj1的信号，但是oct4-的细胞基本没有Tuj1的信号。
我用的是sigma T2200的Tuj1的抗体，1：200 dilution， cryosection 染色。
oct4用的是santa cruz的。
【在 n********k 的大作中提到】
: 没有那篇文献，是很多，是在一个领域久得积累，当然也有文献，但是好像都不是直接
: 说的。另外，不是很明白你的后半句。
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n********k
发帖数: 2818 | 18 还是不太明白你所有的话，不过那有可能不稀奇，很多干细胞低表达不同方向的基因，
没有永久关闭，但是一旦终端分化，不相关的就会关闭掉。所依如果你看到neural,
high, Oct4+, basal and Oct-but non-neural, very low...it would make sense...
顺便说一句，很赞你的仔细和用心；
【在 i*********0 的大作中提到】
: 我做的EB formation assay，实验的目的是想看看EB 有没有neuronal
: differentiation，用Tuj1的抗体来检测。同时，我用oct4的状态（也用是免疫荧光）
: 来判断细胞的状态（stem cell or differentiated cell）。oct4+ 的细胞，在核周围
: 可以看到Tuj1的信号，但是oct4-的细胞基本没有Tuj1的信号。
: 我用的是sigma T2200的Tuj1的抗体，1：200 dilution， cryosection 染色。
: oct4用的是santa cruz的。
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l**********1
发帖数: 5204 | 19 LZ 的细胞培养过程中 有stress 的话
it might happened. (NB: here stress likes oxgen concentration value)
please refer
Fernandes TG et al. (2010)
Different stages of pluripotency determine distinct patterns of
proliferation, metabolism, and lineage commitment of embryonic stem cells
under hypoxia.
Stem Cell Res. 5: 76-89.
citation:
>beta-tubulin (Tuj1) revealed a slightly higher percentage of
neuronal cells at low oxygen tension that
link:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20537975
【在 i*********0 的大作中提到】
: 我做的EB formation assay，实验的目的是想看看EB 有没有neuronal
: differentiation，用Tuj1的抗体来检测。同时，我用oct4的状态（也用是免疫荧光）
: 来判断细胞的状态（stem cell or differentiated cell）。oct4+ 的细胞，在核周围
: 可以看到Tuj1的信号，但是oct4-的细胞基本没有Tuj1的信号。
: 我用的是sigma T2200的Tuj1的抗体，1：200 dilution， cryosection 染色。
: oct4用的是santa cruz的。
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i*********0
发帖数: 915 | 20 Thanks for the comments!
【在 l**********1 的大作中提到】
: LZ 的细胞培养过程中 有stress 的话
: it might happened. (NB: here stress likes oxgen concentration value)
: please refer
: Fernandes TG et al. (2010)
: Different stages of pluripotency determine distinct patterns of
: proliferation, metabolism, and lineage commitment of embryonic stem cells
: under hypoxia.
: Stem Cell Res. 5: 76-89.
: citation:
: >beta-tubulin (Tuj1) revealed a slightly higher percentage of
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