b*********8
发帖数: 44 | 1 最近想做亚细胞定位，但我的蛋白有点大， 1300AA，N或C端连上GFP后都没有表达，只
有连上HA或FLAg小的Tag才表达。我用的是pGWB系列的 binary vector，按理说换别的
小的载体是不是也不管用吧？ 请问这种情况下如何做定位?谢谢！ |
R*9
发帖数: 15 | 2 先用烟草或者洋葱表皮做瞬时看看，要么直接用免疫荧光 |
c********b
发帖数: 363 | 3 你刚才问HA抗体没带，怎么确定是HA或FLAG才有表达？
pGWB的载体需要测序的，在我手上假阳性很高。我一般喜欢用pearleygate系列的。
另外你说GFP连上去不表达，是瞬时表达还是转基因？我最近发现即使是
agroinfiltration也是很多讲究的，除非是GFP或者GUS，其他蛋白都需要摸条件。
【在 b*********8 的大作中提到】
: 最近想做亚细胞定位，但我的蛋白有点大， 1300AA，N或C端连上GFP后都没有表达，只
: 有连上HA或FLAg小的Tag才表达。我用的是pGWB系列的 binary vector，按理说换别的
: 小的载体是不是也不管用吧？ 请问这种情况下如何做定位?谢谢！
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q*******8
发帖数: 768 | |
q*******8
发帖数: 768 | 5 哦。。。我看了TRANSPORTER帖再看这个。。。脑子里都是膜蛋白了。。。不好意思~~
你的蛋白是膜蛋白咩？ |
q*******8
发帖数: 768 | |
b*********8
发帖数: 44 | 7 我做的是烟草瞬时表达，因为出现表型了'所以我判断已经表达了。还有其他小点的tag
可以做定位吗？免疫荧光怎么做？另外不知道分离出核、质做western可以吗？ |
c********b
发帖数: 363 | 8 你这出现表型了来判断不怎么可靠。一般烟草瞬时表达是没有表型的，除了necrosis之
类。而且如果表型是co－suppressor呢？
tag
【在 b*********8 的大作中提到】
: 我做的是烟草瞬时表达，因为出现表型了'所以我判断已经表达了。还有其他小点的tag
: 可以做定位吗？免疫荧光怎么做？另外不知道分离出核、质做western可以吗？
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b*********8
发帖数: 44 | 9 我的表型就是类似于necrosis的细胞死亡，还是挺可靠的 |
c********b
发帖数: 363 | 10 我给你发信了，你试试看这个protocol如何。
【在 b*********8 的大作中提到】
: 我的表型就是类似于necrosis的细胞死亡，还是挺可靠的
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