S******e
发帖数: 393 | 1 在考虑做两个基因在同一个质粒的construct,所以想起来这个问题。
若把一个ORF后面的 SV40 PolyA 去掉（后面紧跟另一个CMV promoter + another ORF
），还会表达么，还是说有弱的表达？ |
m******5
发帖数: 1383 | 2 会减弱表达，参考NMD
most importantly , why do you have to do that?
【在 S******e 的大作中提到】
: 在考虑做两个基因在同一个质粒的construct,所以想起来这个问题。
: 若把一个ORF后面的 SV40 PolyA 去掉（后面紧跟另一个CMV promoter + another ORF
: ），还会表达么，还是说有弱的表达？
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S******e
发帖数: 393 | 3 两个质粒共转染效率比较低，我希望大多数细胞同时表达两个基因，
其实还有个试验是需要三个基因同时在一个细胞里表达，
不知道有什么好的转染方法么，
我用lip2000，总达不到希望的效果
【在 m******5 的大作中提到】
: 会减弱表达，参考NMD
: most importantly , why do you have to do that?
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V*f
发帖数: 171 | 4 中间加个 IRES就可以表达两个基因了, 不需要去 stop codon |
j****x
发帖数: 1704 | 5 事实上有不少商业载体都是这么干的，2个不同的Promoter+ORF串联，最后加上公用的
polyA signal，产生3' overlapping transcripts，比如invitrogen著名的pLenti
gateway系列。这种转录结构其实也不是人类原创了，而是从病毒那里学来的，最典型
的就是HBV，所有5个转录本，7个编码蛋白，共用唯一一个polyA site。
至于说表达水平，决定的因素有很多，但是最基本的一个原则是，两个串联应该使用不
用的promoter，否则很可能出现竞争性抑制。
ORF
【在 S******e 的大作中提到】
: 在考虑做两个基因在同一个质粒的construct,所以想起来这个问题。
: 若把一个ORF后面的 SV40 PolyA 去掉（后面紧跟另一个CMV promoter + another ORF
: ），还会表达么，还是说有弱的表达？
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