p******b
发帖数: 379 | 1 大家好， 我想做一个双荧光reporter老鼠， 打算构建一个全身表达EGFP和mCherry的
reporter老鼠， 其中mCherry受某个miRNA调控， EGFP不受miRNA调控（作为control）
，因为miRNA结合可能导致mRNA降解， 所以我想把EGFP和mCherry分别表达在不同的
mRNA上面， 请问这样设计可行吗？ pUBC-EGFP-PolyA-pCAG-mCherry-miRNA binding
site-PolyA
谢谢了，请多指教 |
m******5
发帖数: 1383 | 2 Looks OK, but you might want to test this system in a cell line model first |
a****l
发帖数: 125 | 3 How big the plasmid will be? Do you need a IRES in between of Cherry and
EGFP? |
w*e
发帖数: 740 | 4 为什么不就造一个pCAG-mCherry-miRNA binding : site-PolyA的小鼠，然后再和全身
都表达gfp的小鼠再杂交呢？这样还简单点，以后你这个简单的小鼠还可以更灵活运用
。。。
【在 p******b 的大作中提到】
: 大家好， 我想做一个双荧光reporter老鼠， 打算构建一个全身表达EGFP和mCherry的
: reporter老鼠， 其中mCherry受某个miRNA调控， EGFP不受miRNA调控（作为control）
: ，因为miRNA结合可能导致mRNA降解， 所以我想把EGFP和mCherry分别表达在不同的
: mRNA上面， 请问这样设计可行吗？ pUBC-EGFP-PolyA-pCAG-mCherry-miRNA binding
: site-PolyA
: 谢谢了，请多指教
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m******5
发帖数: 1383 | 5 我倒觉得楼主这种设计方法对照严谨，都整合在一个位点上，比较清楚是不是miRNA在
起作用
【在 w*e 的大作中提到】
: 为什么不就造一个pCAG-mCherry-miRNA binding : site-PolyA的小鼠，然后再和全身
: 都表达gfp的小鼠再杂交呢？这样还简单点，以后你这个简单的小鼠还可以更灵活运用
: 。。。
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s******a
发帖数: 472 | 6 IRES是“one RNA, two proteins”
【在 a****l 的大作中提到】
: How big the plasmid will be? Do you need a IRES in between of Cherry and
: EGFP?
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p******b
发帖数: 379 | 7 谢谢大家了， 这么热情的帮忙，
关于promoter， 大家认为是用同一种promoter， 还是两个不同的promoter好呢？
我目前倾向于两个不同的promoter （UBC 和CAG）分别表达GFP和mCHERRY, 但是如果用
同一种promoter的话，GFP和mCHERRY的表达水平会更接近，更利于比较，不过听说用同
一种promoter的话，质粒本身会有重组， 所以很纠结是用同一promoter还是两个
promoter
还有关于polyA的，也是相同的问题， 是不是得用两个不同的polyA会好一些呢？
真心感谢! |
s********x
发帖数: 472 | 8 Use the same promoter will be much better.
I don't think the recombination will be a big problem for you. The rate is
very low and once happened you can tell from loss of control GFP. |
