c*********r 发帖数: 181 | 1 正在做土壤古细菌鉴定,DNA已经提取出来了,现在用了一个文献的方法用巢式PCR扩增
16SDNA,但是一直不成功。用别的文献方法,别的引物能够扩增出来条带,说明里面应
该是有古细菌DNA的。
我用的文献方法是:cindy H. Nakatsu (2000): soil community analysis using
DGGE of 16S rDNA Polymerase Chain reaction products.
请教各位大仙,能否给我一点指导?
谢谢! |
p****n 发帖数: 9263 | 2 古细菌这种狗东西皮尔厚馅儿小,你有没有用爆米花方法破裂细胞壁?
【在 c*********r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 正在做土壤古细菌鉴定,DNA已经提取出来了,现在用了一个文献的方法用巢式PCR扩增 : 16SDNA,但是一直不成功。用别的文献方法,别的引物能够扩增出来条带,说明里面应 : 该是有古细菌DNA的。 : 我用的文献方法是:cindy H. Nakatsu (2000): soil community analysis using : DGGE of 16S rDNA Polymerase Chain reaction products. : 请教各位大仙,能否给我一点指导? : 谢谢!
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c*********r 发帖数: 181 | 3 我用别的引物发现能P出来,现在的问题是为什么这个特异的引物对做不出来?好几篇
文献都用这个P出来了。加BSA,ACETAMIDE,各种方法我都试过了。 |
c*********r 发帖数: 181 | |
p****n 发帖数: 9263 | 5 铁罐子里加高压,然后“砰”...
【在 c*********r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 顺便问一下,什么是爆米花方法?
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C*******e 发帖数: 4348 | 6 你用通用引物p过么
出不出条带?
【在 c*********r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 正在做土壤古细菌鉴定,DNA已经提取出来了,现在用了一个文献的方法用巢式PCR扩增 : 16SDNA,但是一直不成功。用别的文献方法,别的引物能够扩增出来条带,说明里面应 : 该是有古细菌DNA的。 : 我用的文献方法是:cindy H. Nakatsu (2000): soil community analysis using : DGGE of 16S rDNA Polymerase Chain reaction products. : 请教各位大仙,能否给我一点指导? : 谢谢!
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c*********r 发帖数: 181 | |
h**********r 发帖数: 671 | 8 用nanodrop看一下DNA浓度和质量,然后严格的控制加入的模板量。好像太多也不容易
出来,默认你是用kit提的DNA
仅供参考。 |
c*********r 发帖数: 181 | |
A*******e 发帖数: 284 | 10 别的引物是啥引物? 要不是古细菌特异引物, 十有八九扩出来的是真细菌。 |
g***j 发帖数: 40861 | |