c********u
发帖数: 250 | 1 transgenic mouse southern blot, 做了几个星期了还没出来,首要的问题如图，坑爹
的genomic DNA 用HindIII切了24个小时，60v 跑了6个小时，就给我跑成这副鬼样子，
大家提DNA， 溶DNA，切，跑胶有什么trick没？ 还有一个问题是，我的目标条带有
10kb，DIG probe, 我老板说10kb太大了，2-5kb最好，那我这种情况有可能成不？
真心求教，酌情发包子，谢谢。 |
s********r
发帖数: 312 | 2 southern这种实验耗时长，步骤多，加上DIG本身信号就比同位素弱，真心坑爹。新手
的话能搞的死去活来，我前段时间自己也是试了两次都没成功，实在不想伺候了，最后
以一顿buffet的代价请lab里一老手postdoc做的。。 |
a******8
发帖数: 56 | 3 You can see your wells has strong signal. DNA digestion is not complete.
HindIII is NOT a good enzyme for southern. try other enzyme and then trouble
shoot other conditions. Good luck.
Your marker is good, I guess that you also labeled a small amount of marker,
which is good. |
d****h
发帖数: 4291 | 4 DNA提的不纯，酶切的不完全，你图中都有明显带痕了
你如果样品个数少，建议你跑大孔胶，过夜跑，放低电压，跑出来的片子好看
用同位素做，不要用地高辛，那个和同位素做的片子没法比
以我的经验看的话，跑成这样，同位素都足够做出漂亮片子了。 |
g*********9
发帖数: 3528 | 5 1. change to P38.
2. wash it a little bit longer.
This result seems to be promising.
good luck.
【在 c********u 的大作中提到】
: transgenic mouse southern blot, 做了几个星期了还没出来,首要的问题如图，坑爹
: 的genomic DNA 用HindIII切了24个小时，60v 跑了6个小时，就给我跑成这副鬼样子，
: 大家提DNA， 溶DNA，切，跑胶有什么trick没？ 还有一个问题是，我的目标条带有
: 10kb，DIG probe, 我老板说10kb太大了，2-5kb最好，那我这种情况有可能成不？
: 真心求教，酌情发包子，谢谢。
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a**m
发帖数: 184 | 6 本科的时候做的。。。
HindIII怎么还用24小时？全都切得稀巴烂了吧。。。
【在 c********u 的大作中提到】
: transgenic mouse southern blot, 做了几个星期了还没出来,首要的问题如图，坑爹
: 的genomic DNA 用HindIII切了24个小时，60v 跑了6个小时，就给我跑成这副鬼样子，
: 大家提DNA， 溶DNA，切，跑胶有什么trick没？ 还有一个问题是，我的目标条带有
: 10kb，DIG probe, 我老板说10kb太大了，2-5kb最好，那我这种情况有可能成不？
: 真心求教，酌情发包子，谢谢。
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f*******d
发帖数: 92 | 7 这个是明显的酶切没有切开阿。DNA不干净应该是根本问题。 southern blot不是什么
很复杂的试验，一般只要DNA是好的，都能出结果。 |
