d****i
发帖数: 2346 | 1 我的配方是
7mL DMEM+10%FBS+抗生素 (就是常规培养基)
2mL FBS
1mL DMSO
细胞冻存后复苏的时候活细胞太少了。。。。
谢谢！ |
X*******8
发帖数: 3895 | 2 万能冻存液：15％DMSO (或甘油，可到20％）,20％FBS＋70％基本培养基。要不就买吧
。 |
c******r
发帖数: 3778 | 3 也可以90%fbs+10%dmso
【在 X*******8 的大作中提到】
: 万能冻存液：15％DMSO (或甘油，可到20％）,20％FBS＋70％基本培养基。要不就买吧
: 。
|
X*******8
发帖数: 3895 | 4 呵呵，如果FBS不要钱的话。
【在 c******r 的大作中提到】
: 也可以90%fbs+10%dmso
|
c******r
发帖数: 3778 | 5 呵呵
【在 X*******8 的大作中提到】
: 呵呵，如果FBS不要钱的话。
|
d****i
发帖数: 2346 | 6
万能冻存液：15％DMSO (或甘油，可到20％）,20％FBS＋70％基本培养基。要不就买吧。
你这个跟我的差不多啊。基本培养基是什么都没有的吧？
【在 X*******8 的大作中提到】
: 万能冻存液：15％DMSO (或甘油，可到20％）,20％FBS＋70％基本培养基。要不就买吧
: 。
|
M********r
发帖数: 142 | |
X*******8
发帖数: 3895 | 8 嗯，基本培养基是什么都没有的。也可以完全用血清，象前面有人说的。差别不会太大
。不行就从Invitrogen买吧。
吧。
【在 d****i 的大作中提到】
:
: 万能冻存液：15％DMSO (或甘油，可到20％）,20％FBS＋70％基本培养基。要不就买吧。
: 你这个跟我的差不多啊。基本培养基是什么都没有的吧？
|
d****i
发帖数: 2346 | 9
好吧，我就用个贵的。
搜索了一下看有人用85%的 FBS + 15%的DMSO。
【在 M********r 的大作中提到】
: 90% FCS+10% DMSO
|
s******s
发帖数: 13035 | 10 大多数就这个啦, 万能.
【在 c******r 的大作中提到】
: 也可以90%fbs+10%dmso
|
|
|
s******s
发帖数: 13035 | 11 话说50ml FBS也才十来块钱. 我认为每年消耗的试剂至少和工资持平
才行; 很受不了有些实验室省钱但是浪费时间的各种行为
【在 X*******8 的大作中提到】
: 呵呵，如果FBS不要钱的话。
|
M********r
发帖数: 142 | 12 嗯哪, 50ml可以冻60管细胞了, 十几美元。
你冻的细胞都死， 从新开始，耽误时间、 浪费试剂。捡了芝麻掉了西瓜啊。
【在 s******s 的大作中提到】
: 话说50ml FBS也才十来块钱. 我认为每年消耗的试剂至少和工资持平
: 才行; 很受不了有些实验室省钱但是浪费时间的各种行为
|
c******r
发帖数: 3778 | 13 我觉得lz那个配方也不是不可以，一般的cell lines也能recover 90%以上。可能不是
冻存液的问题而是使用保存方法等的问题。
【在 M********r 的大作中提到】
: 嗯哪, 50ml可以冻60管细胞了, 十几美元。
: 你冻的细胞都死， 从新开始，耽误时间、 浪费试剂。捡了芝麻掉了西瓜啊。
|
M********r
发帖数: 142 | 14 用冻存盒没有？
异丙醇要定期更换新鲜的
－70度冻4小时后要尽快移到液氮 不要过好几天才转移到液氮
复苏要迅速，37度水浴，转移到15ml培养基后150g离心5min，用培养基重悬
【在 d****i 的大作中提到】
: 我的配方是
: 7mL DMEM+10%FBS+抗生素 (就是常规培养基)
: 2mL FBS
: 1mL DMSO
: 细胞冻存后复苏的时候活细胞太少了。。。。
: 谢谢！
|
l**********1
发帖数: 5204 | 15 Stem Cell ?
【在 d****i 的大作中提到】
: 我的配方是
: 7mL DMEM+10%FBS+抗生素 (就是常规培养基)
: 2mL FBS
: 1mL DMSO
: 细胞冻存后复苏的时候活细胞太少了。。。。
: 谢谢！
|
s***k
发帖数: 2117 | 16 冻前细胞生长状态？log phase?
【在 c******r 的大作中提到】
: 我觉得lz那个配方也不是不可以，一般的cell lines也能recover 90%以上。可能不是
: 冻存液的问题而是使用保存方法等的问题。
|
c******r
发帖数: 3778 | 17 很多地方可能出问题，包括保存，解冻。这东西说容易其实很容易，但是也不少步骤。
出点儿问题也很正常。慢慢摸索，问问周围的人就好了
【在 s***k 的大作中提到】
: 冻前细胞生长状态？log phase?
|
D**R
发帖数: 371 | 18 Need to consider followings: total cell /live cell before Freeze,起始细胞不
能太少1e6-10e6 /vial，freeze protocol，直接放冰箱还是用machine protocol几分
钟降几度到-70c？ thawing protocol. |
S******9
发帖数: 2837 | 19 95% FBS + 5% DMSO
一年能花几个钱冻细胞啊？ |
T*****u
发帖数: 3257 | 20 不至于那么穷吧不至于吧
【在 X*******8 的大作中提到】
: 呵呵，如果FBS不要钱的话。
|
