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- 求精解做first strand cDNA的原理
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c******t
发帖数: 108
1
今天被lab mate 问到合成first strand cDNA的原理,发现自己以前确实没想太多。
请教大家呀:
我们用的是M-MLV,
1. 一开始的65度5分钟到底是为了打开mRNA的二级结构,还是为了打开二级结构加配对
oligo dT? 2. 65度后立马冰浴的时间要多长?目的是让打开二级结构后的mRNA保持状
态,还是使oligo dT引物与RNA配对?
3. 最后的80度5分钟是只为了灭活酶活性,还是还有别的意义?
4. 看到有些protocol说要加DTT,意义在何处?
5. 在哪个权威网站或database比较容易找到一些实验的原理精解?
多谢啊!
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