求精解做first strand cDNA的原理 - Biology版

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Biology版 - 求精解做first strand cDNA的原理

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c******t
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今天被lab mate 问到合成first strand cDNA的原理，发现自己以前确实没想太多。
请教大家呀：
我们用的是M-MLV，
1. 一开始的65度5分钟到底是为了打开mRNA的二级结构，还是为了打开二级结构加配对
oligo dT? 2. 65度后立马冰浴的时间要多长？目的是让打开二级结构后的mRNA保持状
态，还是使oligo dT引物与RNA配对？
3. 最后的80度5分钟是只为了灭活酶活性，还是还有别的意义？
4. 看到有些protocol说要加DTT，意义在何处？
5. 在哪个权威网站或database比较容易找到一些实验的原理精解？
多谢啊！

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