g*********3
发帖数: 177 | 1 最近在做蛋白纯化，用的zymogen his6 column，elution完后，用SDS-LB煮了5分分钟
，发现western有若干条带。
实验室的人说是imidazole会降解蛋白。在网上查也有不少人说imidazole会降解蛋白。
请问各位是否遇到这样的问题。
谢谢。 |
s******9
发帖数: 283 | 2 没见过imidazole降解蛋白。要排除在细胞内就降解了（或者修饰变大了），或者抗体
有问题。 |
g*********3
发帖数: 177 | 3 谢谢。网上说的倒不是imidazole会降解蛋白，而是imidazole在高温和SDS-LB煮的时候
会降解蛋白。问了周围的人，他们一般都dialysis。不知道synbio79有没有啥好推荐的
dialysis kit。
谢谢。
【在 s******9 的大作中提到】
: 没见过imidazole降解蛋白。要排除在细胞内就降解了（或者修饰变大了），或者抗体
: 有问题。
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s******9
发帖数: 283 | |
c********b
发帖数: 363 | 5 一般都会有些污染吧，没可能是非常纯的。只要目标蛋白足够富集就好了
【在 g*********3 的大作中提到】
: 最近在做蛋白纯化，用的zymogen his6 column，elution完后，用SDS-LB煮了5分分钟
: ，发现western有若干条带。
: 实验室的人说是imidazole会降解蛋白。在网上查也有不少人说imidazole会降解蛋白。
: 请问各位是否遇到这样的问题。
: 谢谢。
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g*********5
发帖数: 2533 | 6 do you use the miniprep one?
【在 g*********3 的大作中提到】
: 最近在做蛋白纯化，用的zymogen his6 column，elution完后，用SDS-LB煮了5分分钟
: ，发现western有若干条带。
: 实验室的人说是imidazole会降解蛋白。在网上查也有不少人说imidazole会降解蛋白。
: 请问各位是否遇到这样的问题。
: 谢谢。
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i***l
发帖数: 1656 | 7 in your case,
1. target protein is degraded before chromatography
or
2. 6his affinity chromatography can not purify it well
dialysis does not help in both
to determine if #1==TRUE, western blot using target specific antibody
to improve #2, add one more chromatography (ion exchange, size exclusion,
etc)
【在 g*********3 的大作中提到】
: 谢谢。网上说的倒不是imidazole会降解蛋白，而是imidazole在高温和SDS-LB煮的时候
: 会降解蛋白。问了周围的人，他们一般都dialysis。不知道synbio79有没有啥好推荐的
: dialysis kit。
: 谢谢。
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g*********3
发帖数: 177 | 8 yes. Any problem with this kit?
【在 g*********5 的大作中提到】
: do you use the miniprep one?
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g*********3
发帖数: 177 | 9 Thanks a lot.The problem is we don't have antibody for the protein.I am
using the second tag to tandem purify it and will see.
【在 i***l 的大作中提到】
: in your case,
: 1. target protein is degraded before chromatography
: or
: 2. 6his affinity chromatography can not purify it well
: dialysis does not help in both
: to determine if #1==TRUE, western blot using target specific antibody
: to improve #2, add one more chromatography (ion exchange, size exclusion,
: etc)
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