I***a
发帖数: 13467 | 1 没什么经验，
细胞是 OKF6／TERT2，表皮细胞系
试了很多条件，
先是用GFP在96孔板上筛选了几个条件，比如不同，细胞密度，感染时间，DNA:
reagent的比率，
找到一个比较合适的条件，
但是再到12孔板上做，然后做q-PCR验证，发现靶基因表达没有变化，
还有什么办法没有？
另外，对qPCR验证的引物，有特别注意的地方吗？ |
c*****u
发帖数: 357 | 2 引物能p出东西就行，验证的时候尽量加positive和negative control
关于knockdown， 你有没有比较forward 和reverse 两种方法，有的时候在效率上会差
很多（如果你用的脂质体的话），GFP那个其实也不能很好的决定你target gene的
knockdown效率，还是在oligo的选择和oligo和转染试剂比例上找条件，可以买
validated siRNA，成功率更高些 |
I***a
发帖数: 13467 | 3 多谢，
我没有讲清楚，转的是质粒，p siRNA，
方法就是，前一天把细包转到12 ／96 孔板上，第二天混合 DNA脂质体加到细胞里一段
时间，24-48小时检测
没有比较过，还不太清楚这两种方法。
【在 c*****u 的大作中提到】
: 引物能p出东西就行，验证的时候尽量加positive和negative control
: 关于knockdown， 你有没有比较forward 和reverse 两种方法，有的时候在效率上会差
: 很多（如果你用的脂质体的话），GFP那个其实也不能很好的决定你target gene的
: knockdown效率，还是在oligo的选择和oligo和转染试剂比例上找条件，可以买
: validated siRNA，成功率更高些
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n*******9
发帖数: 234 | |
c*****u
发帖数: 357 | 5
转质粒啊, 如果确定了target没问题的话, 强烈建议你试一下第二种
【在 I***a 的大作中提到】
: 多谢，
: 我没有讲清楚，转的是质粒，p siRNA，
: 方法就是，前一天把细包转到12 ／96 孔板上，第二天混合 DNA脂质体加到细胞里一段
: 时间，24-48小时检测
: 没有比较过，还不太清楚这两种方法。
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