g*********5 发帖数: 2533 | 1 想用talen技术deletion一个基因内含子的一段序列,50-100bp,
是不是要用两对talen质粒?如何设计?online的网站好像都是对外显子的?
我市菜鸟,请问addgene那个kit比较好?
如果找公司做,那家好些?费用呢?有人有经验吗?谢谢 |
l***y 发帖数: 638 | 2 现在都用crispr了,你这个size上个nickase用一对gRNA正好
【在 g*********5 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 想用talen技术deletion一个基因内含子的一段序列,50-100bp, : 是不是要用两对talen质粒?如何设计?online的网站好像都是对外显子的? : 我市菜鸟,请问addgene那个kit比较好? : 如果找公司做,那家好些?费用呢?有人有经验吗?谢谢
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J****n 发帖数: 156 | 3 正解
【在 l***y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 现在都用crispr了,你这个size上个nickase用一对gRNA正好
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g*********5 发帖数: 2533 | 4 请问crispr的offtarget 如何?
如果一对能小些吗?谢谢。
【在 l***y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 现在都用crispr了,你这个size上个nickase用一对gRNA正好
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g*********5 发帖数: 2533 | 5 还有一个问题,正常人这个片段是50bp左右,病人的就要1500-3000bp了。
一对crispr能把1500bp敲掉吗?
谢谢。
【在 l***y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 现在都用crispr了,你这个size上个nickase用一对gRNA正好
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T****u 发帖数: 424 | 6 两对,四个gRNA
没有一点问题,我们老鼠都做出来了。
【在 g*********5 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 还有一个问题,正常人这个片段是50bp左右,病人的就要1500-3000bp了。 : 一对crispr能把1500bp敲掉吗? : 谢谢。
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g*********5 发帖数: 2533 | 7 niu@!
成对应该用的是nickase减少脱靶效应吧。
请问载体是找公司作的吗?
还是自己设计?
我要用在病人细胞上,要把质粒转进去,四个质粒不知道好转不。
【在 T****u 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 两对,四个gRNA : 没有一点问题,我们老鼠都做出来了。
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T****u 发帖数: 424 | 8 自己做的。两天做好载体。一般一个半月拿到细胞。
挑单克隆 10%-20%的complete KO.
【在 g*********5 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : niu@! : 成对应该用的是nickase减少脱靶效应吧。 : 请问载体是找公司作的吗? : 还是自己设计? : 我要用在病人细胞上,要把质粒转进去,四个质粒不知道好转不。
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g*********5 发帖数: 2533 | 9 牛啊。羡慕中。请问您用的那个载体?
又没有一下子能装几个RNA的载体?
要么就用一个hCas9 D10A, 和4个gRNA_Cloning Vectors?
【在 T****u 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 自己做的。两天做好载体。一般一个半月拿到细胞。 : 挑单克隆 10%-20%的complete KO.
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