g*********5
发帖数: 2533 | 1 想用talen技术deletion一个基因内含子的一段序列，50-100bp,
是不是要用两对talen质粒？如何设计？online的网站好像都是对外显子的？
我市菜鸟，请问addgene那个kit比较好？
如果找公司做，那家好些？费用呢？有人有经验吗?谢谢 |
l***y
发帖数: 638 | 2 现在都用crispr了，你这个size上个nickase用一对gRNA正好
【在 g*********5 的大作中提到】
: 想用talen技术deletion一个基因内含子的一段序列，50-100bp,
: 是不是要用两对talen质粒？如何设计？online的网站好像都是对外显子的？
: 我市菜鸟，请问addgene那个kit比较好？
: 如果找公司做，那家好些？费用呢？有人有经验吗?谢谢
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J****n
发帖数: 156 | 3 正解
【在 l***y 的大作中提到】
: 现在都用crispr了，你这个size上个nickase用一对gRNA正好
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g*********5
发帖数: 2533 | 4 请问crispr的offtarget 如何？
如果一对能小些吗？谢谢。
【在 l***y 的大作中提到】
: 现在都用crispr了，你这个size上个nickase用一对gRNA正好
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g*********5
发帖数: 2533 | 5 还有一个问题，正常人这个片段是50bp左右，病人的就要1500-3000bp了。
一对crispr能把1500bp敲掉吗？
谢谢。
【在 l***y 的大作中提到】
: 现在都用crispr了，你这个size上个nickase用一对gRNA正好
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T****u
发帖数: 424 | 6 两对，四个gRNA
没有一点问题，我们老鼠都做出来了。
【在 g*********5 的大作中提到】
: 还有一个问题，正常人这个片段是50bp左右，病人的就要1500-3000bp了。
: 一对crispr能把1500bp敲掉吗？
: 谢谢。
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g*********5
发帖数: 2533 | 7 niu@!
成对应该用的是nickase减少脱靶效应吧。
请问载体是找公司作的吗？
还是自己设计？
我要用在病人细胞上，要把质粒转进去，四个质粒不知道好转不。
【在 T****u 的大作中提到】
: 两对，四个gRNA
: 没有一点问题，我们老鼠都做出来了。
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T****u
发帖数: 424 | 8 自己做的。两天做好载体。一般一个半月拿到细胞。
挑单克隆 10%-20%的complete KO.
【在 g*********5 的大作中提到】
: niu@!
: 成对应该用的是nickase减少脱靶效应吧。
: 请问载体是找公司作的吗？
: 还是自己设计？
: 我要用在病人细胞上，要把质粒转进去，四个质粒不知道好转不。
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g*********5
发帖数: 2533 | 9 牛啊。羡慕中。请问您用的那个载体？
又没有一下子能装几个RNA的载体？
要么就用一个hCas9 D10A, 和4个gRNA_Cloning Vectors？
【在 T****u 的大作中提到】
: 自己做的。两天做好载体。一般一个半月拿到细胞。
: 挑单克隆 10%-20%的complete KO.
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