s**********e
发帖数: 2888 | 1 一直用VEGF作angiogenesis assay，每次我拿到厂家寄来的pwder,用PBS配成 20ng/uL
的solution，aliquote, 冻在-20冰箱。
每次最开始的动物或者细胞实验都很好，几个星期后用很多时候就没有效果。最近刚刚
因为这损失大批老鼠。
问朋友，朋友说是因为我配的溶液太稀，蛋白都负在了eppendorf tube的壁上面。问大
家谁做过的怎么解决的？ |
m*********D
发帖数: 1727 | 2 类似的情况下，我们会加BSA（Roche的比较好，也比较贵）。另外，stock solution总
是高浓度一些，要用的时候再dilute。有些protein,还用silanized tube来长齐-70度
保存的。 |
D***s
发帖数: 5613 | 3 要配成stock solution，最好存储在-80度，能加glycerol会更好，使用时再稀释
低浓度的蛋白质很容易变性
uL
【在 s**********e 的大作中提到】
: 一直用VEGF作angiogenesis assay，每次我拿到厂家寄来的pwder,用PBS配成 20ng/uL
: 的solution，aliquote, 冻在-20冰箱。
: 每次最开始的动物或者细胞实验都很好，几个星期后用很多时候就没有效果。最近刚刚
: 因为这损失大批老鼠。
: 问朋友，朋友说是因为我配的溶液太稀，蛋白都负在了eppendorf tube的壁上面。问大
: 家谁做过的怎么解决的？
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s**********e
发帖数: 2888 | |
s******y
发帖数: 28562 | 5 对，应该配在0.2% BSA/PBS里。
而且楼主配的stock solution浓度也太低了，我们一般至少也要搞个5ug/ul stock.
20ng/ul 太过分的低了
【在 m*********D 的大作中提到】
: 类似的情况下，我们会加BSA（Roche的比较好，也比较贵）。另外，stock solution总
: 是高浓度一些，要用的时候再dilute。有些protein,还用silanized tube来长齐-70度
: 保存的。
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s**********e
发帖数: 2888 | 6 买的蛋白每次只有5 ug，250美元左右
【在 s******y 的大作中提到】
: 对，应该配在0.2% BSA/PBS里。
: 而且楼主配的stock solution浓度也太低了，我们一般至少也要搞个5ug/ul stock.
: 20ng/ul 太过分的低了
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s******y
发帖数: 28562 | 7 哦，这么贵。。。
相比之下我们用的HGF太便宜了。
【在 s**********e 的大作中提到】
: 买的蛋白每次只有5 ug，250美元左右
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s**********e
发帖数: 2888 | 8 别的公司有便宜的，用过一次，动物实验完全没有效果，就一直在用R&D的。
做薄厚的时候，动物实验砸了，就当没有发生过，反正实验室很大；自己独立半年到现
在，动物实验砸一次，会压力很大，不仅是science也是money的大问题。
【在 s******y 的大作中提到】
: 哦，这么贵。。。
: 相比之下我们用的HGF太便宜了。
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