s*******y 发帖数: 8 | 1 需要纯化的蛋白做酶学实验
感觉上游的克隆,基因合成基本取代PCR了
但是下游的表达纯化,大家是自己做还是让公司做?有什么优缺点 |
m*********D 发帖数: 1727 | 2 纯化现在简单很多了,这么多flag-tag...自己作容易,小心点,生物活性还可能高一
些。commercially available往往会每次纯化的生活活性不一样呢。
我们大多是baculovirus是让人家用发酵罐来作的。干冰寄过来自己纯化。bacteria表
达,往往自己就上几个4 litter的flask. |
s******y 发帖数: 28562 | 3 自己做的话耗时长,需要摸索几次条件才能做出来。公司作的一般比较快,纯度也比较
高,但是比较贵,而且提出的东西有没有活性他们不像你那么关心。
如果你们自己从来没有做过,而且以后也不太可能再做的话,给公司做是最简单的。
大部分酶没有那么娇气,公司做出来的还是可以用的。
但是如果是一些条件比较特殊的酶,或者自己以后将来需要反复做的话,那就自己做。
【在 s*******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 需要纯化的蛋白做酶学实验 : 感觉上游的克隆,基因合成基本取代PCR了 : 但是下游的表达纯化,大家是自己做还是让公司做?有什么优缺点
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s*******y 发帖数: 8 | |
X******n 发帖数: 914 | |
s*******e 发帖数: 1010 | |
a*******a 发帖数: 4233 | 7 自己表达带flag或者his的,然后用beads拉下来。穷的话用柱子,有钱的话用磁珠
多大的蛋白?
【在 s*******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 需要纯化的蛋白做酶学实验 : 感觉上游的克隆,基因合成基本取代PCR了 : 但是下游的表达纯化,大家是自己做还是让公司做?有什么优缺点
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D*a 发帖数: 6830 | |
s*******y 发帖数: 8 | 9 蛋白中等大小,90 kD
【在 a*******a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 自己表达带flag或者his的,然后用beads拉下来。穷的话用柱子,有钱的话用磁珠 : 多大的蛋白?
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g*********5 发帖数: 2533 | 10 Frame shift
【在 D*a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 克隆多了一个y呀
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