s*******y
发帖数: 8 | 1 需要纯化的蛋白做酶学实验
感觉上游的克隆，基因合成基本取代PCR了
但是下游的表达纯化，大家是自己做还是让公司做？有什么优缺点 |
m*********D
发帖数: 1727 | 2 纯化现在简单很多了，这么多flag-tag...自己作容易，小心点，生物活性还可能高一
些。commercially available往往会每次纯化的生活活性不一样呢。
我们大多是baculovirus是让人家用发酵罐来作的。干冰寄过来自己纯化。bacteria表
达，往往自己就上几个4 litter的flask. |
s******y
发帖数: 28562 | 3 自己做的话耗时长，需要摸索几次条件才能做出来。公司作的一般比较快，纯度也比较
高，但是比较贵，而且提出的东西有没有活性他们不像你那么关心。
如果你们自己从来没有做过，而且以后也不太可能再做的话，给公司做是最简单的。
大部分酶没有那么娇气，公司做出来的还是可以用的。
但是如果是一些条件比较特殊的酶，或者自己以后将来需要反复做的话，那就自己做。
【在 s*******y 的大作中提到】
: 需要纯化的蛋白做酶学实验
: 感觉上游的克隆，基因合成基本取代PCR了
: 但是下游的表达纯化，大家是自己做还是让公司做？有什么优缺点
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s*******y
发帖数: 8 | |
X******n
发帖数: 914 | |
s*******e
发帖数: 1010 | |
a*******a
发帖数: 4233 | 7 自己表达带flag或者his的，然后用beads拉下来。穷的话用柱子，有钱的话用磁珠
多大的蛋白？
【在 s*******y 的大作中提到】
: 需要纯化的蛋白做酶学实验
: 感觉上游的克隆，基因合成基本取代PCR了
: 但是下游的表达纯化，大家是自己做还是让公司做？有什么优缺点
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D*a
发帖数: 6830 | |
s*******y
发帖数: 8 | 9 蛋白中等大小，90 kD
【在 a*******a 的大作中提到】
: 自己表达带flag或者his的，然后用beads拉下来。穷的话用柱子，有钱的话用磁珠
: 多大的蛋白？
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g*********5
发帖数: 2533 | 10 Frame shift
【在 D*a 的大作中提到】
: 克隆多了一个y呀
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