S******e
发帖数: 393 | 1 用tris-glycine也可以吧，准备用10-20%的gel, 0.2um的nitrocellulose membrane,
湿转100V, 1 hour可以吗？
从没用过tris-tricine，有什么好处？
THX! |
s******y
发帖数: 28562 | 2 tris-glycine可以。
但是最好不要用高电压转。不然蛋白很容易直接穿过膜导致可检测的量非常低。
建议用30伏，4度，转过夜。
【在 S******e 的大作中提到】
: 用tris-glycine也可以吧，准备用10-20%的gel, 0.2um的nitrocellulose membrane,
: 湿转100V, 1 hour可以吗？
: 从没用过tris-tricine，有什么好处？
: THX!
|
S******e
发帖数: 393 | 3 多谢！下次就用低压转。已经跑了一次胶，高电压转的膜，检测的信号的确非常弱。
除了低压外，如果用0.1um的膜会不会效果好很多？
【在 s******y 的大作中提到】
: tris-glycine可以。
: 但是最好不要用高电压转。不然蛋白很容易直接穿过膜导致可检测的量非常低。
: 建议用30伏，4度，转过夜。
|
s******y
发帖数: 28562 | 4 0.1um的PDVF膜会更好。
另外，可以把甲醇浓度调高一些。可以调到30~40%。最低也得用20%。 甲醇的功能是：
1。洗脱蛋白上多余的SDS，让蛋白跑得不要太快； 2。让蛋白充分变性，能和膜结合得
更紧。
【在 S******e 的大作中提到】
: 多谢！下次就用低压转。已经跑了一次胶，高电压转的膜，检测的信号的确非常弱。
: 除了低压外，如果用0.1um的膜会不会效果好很多？
|
S******e
发帖数: 393 | 5 多谢，下次转膜将甲醇浓度提高些
【在 s******y 的大作中提到】
: 0.1um的PDVF膜会更好。
: 另外，可以把甲醇浓度调高一些。可以调到30~40%。最低也得用20%。 甲醇的功能是：
: 1。洗脱蛋白上多余的SDS，让蛋白跑得不要太快； 2。让蛋白充分变性，能和膜结合得
: 更紧。
|
t****t
发帖数: 86 | 6 有不有推荐的 0.1um PVDF膜？
【在 s******y 的大作中提到】
: 0.1um的PDVF膜会更好。
: 另外，可以把甲醇浓度调高一些。可以调到30~40%。最低也得用20%。 甲醇的功能是：
: 1。洗脱蛋白上多余的SDS，让蛋白跑得不要太快； 2。让蛋白充分变性，能和膜结合得
: 更紧。
|
d****i
发帖数: 2346 | 7
请教一下30V， 4C，overnight和110V， 1.5h的transfer有什么区别？我从来没做过前
者，觉得时间太长了，western做完要好几天。不知道有什么有点没有？
【在 s******y 的大作中提到】
: tris-glycine可以。
: 但是最好不要用高电压转。不然蛋白很容易直接穿过膜导致可检测的量非常低。
: 建议用30伏，4度，转过夜。
|
s******y
发帖数: 28562 | 8 30V， 4C，overnight对于无论是大蛋白还是小蛋白都比110V 跑几个小时出来的条带明
显的强很多。
对于中等大小的蛋白则差别不是特别大。
时间会长不假，就看你们更注重什么了。我们经常要做一些含量很低的蛋白，我的一个
博士后用他以前实验室的习惯用110V跑，得到的带非常模糊。我让他改成30V， 4C，
overnight，效果立马不一样。
【在 d****i 的大作中提到】
:
: 请教一下30V， 4C，overnight和110V， 1.5h的transfer有什么区别？我从来没做过前
: 者，觉得时间太长了，western做完要好几天。不知道有什么有点没有？
|
s******y
发帖数: 28562 | 9 Bio-rad的不错。不过我们只用过他们的，没有和别人的比较过。
另外，PVDF膜用起来还是相当麻烦的，需要事先用甲醇浸泡。转膜的时候甲醇不能太低
，而且背景还容易偏高。所以没啥特殊原因不推荐。
【在 t****t 的大作中提到】
: 有不有推荐的 0.1um PVDF膜？
|
t****t
发帖数: 86 | 10 我转小蛋白，看你上面建议0.1um PVDF膜。
另外bio-rad没有0.1um的膜啊。只看到whatman有
【 在 tyzhet (开吉普的金田一) 的大作中提到: 】
: 有不有推荐的 0.1um PVDF膜？
【在 s******y 的大作中提到】
: Bio-rad的不错。不过我们只用过他们的，没有和别人的比较过。
: 另外，PVDF膜用起来还是相当麻烦的，需要事先用甲醇浸泡。转膜的时候甲醇不能太低
: ，而且背景还容易偏高。所以没啥特殊原因不推荐。
|
w***a
发帖数: 1053 | 11 这个学习了，多谢多谢
【在 s******y 的大作中提到】
: 30V， 4C，overnight对于无论是大蛋白还是小蛋白都比110V 跑几个小时出来的条带明
: 显的强很多。
: 对于中等大小的蛋白则差别不是特别大。
: 时间会长不假，就看你们更注重什么了。我们经常要做一些含量很低的蛋白，我的一个
: 博士后用他以前实验室的习惯用110V跑，得到的带非常模糊。我让他改成30V， 4C，
: overnight，效果立马不一样。
|
