k********n
发帖数: 756 | 1 在组织里转染了CRISPR和GFP, FACS了GFP细胞，提了DNA，如果想看又KO的效率，除开
PCR后送几十个克隆测序的方法， 有什么其他更快更简单的方法没有？多谢了！！ |
b******k
发帖数: 2321 | 2 混在一起测序或者qPCR呗
【在 k********n 的大作中提到】
: 在组织里转染了CRISPR和GFP, FACS了GFP细胞，提了DNA，如果想看又KO的效率，除开
: PCR后送几十个克隆测序的方法， 有什么其他更快更简单的方法没有？多谢了！！
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w***r
发帖数: 709 | 3 Surveyor assay
【在 k********n 的大作中提到】
: 在组织里转染了CRISPR和GFP, FACS了GFP细胞，提了DNA，如果想看又KO的效率，除开
: PCR后送几十个克隆测序的方法， 有什么其他更快更简单的方法没有？多谢了！！
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T****a
发帖数: 409 | 4 我最近刚开始在做这个，强烈推荐这个网站。
http://tide.nki.nl/
我是将gRNAs连接到pSpCas9(BB)-2A-GFP质粒里，然后将连接成功的CRISPRs plasmid转
染到细胞中，再sort GFP positive cells for culture (sort 50,000 cells for 1
well in 12-well plate。等差不多长满了，取genomic DNA，PCR，再用PCR primer
for sequencing。
如果一切顺利，出来的sequence file应该是从gRNA起作用的地方开始有chaos。将
sequence file和guide sequence upload上去，这个网站就会很快计算出来mutation
percentage。 |
l********e
发帖数: 415 | 5 没有。只能看protein
【在 k********n 的大作中提到】
: 在组织里转染了CRISPR和GFP, FACS了GFP细胞，提了DNA，如果想看又KO的效率，除开
: PCR后送几十个克隆测序的方法， 有什么其他更快更简单的方法没有？多谢了！！
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