b*****n 发帖数: 1841 | 1 上网查了一些内容,发现相当一部分人推荐用DNase处理样品。
我想能否在Trizol抽提中加chloroform离心后的水相中加DNase,然后再加0.5ml
Trizol杀灭和去除DNase。
不确定水相中的成分,DNase的活性如何,再用少量Trizol抽提是否能把DNase去除干净。
或者用isopropanol沉淀后再加Dnase处理,再用Trizol去除DNase?这样沉淀的步骤对
RNA的损失比较大。
请大家发表一下意见。 |
x*****e 发帖数: 309 | 2 其实更应该担心是DNAase能否起作用,如何检测DNase起作用。有时候问半
天还不如自己做一下,生命短暂,用kit吧,尤其是你的样品是用来做RNA-seq。
净。
【在 b*****n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 上网查了一些内容,发现相当一部分人推荐用DNase处理样品。 : 我想能否在Trizol抽提中加chloroform离心后的水相中加DNase,然后再加0.5ml : Trizol杀灭和去除DNase。 : 不确定水相中的成分,DNase的活性如何,再用少量Trizol抽提是否能把DNase去除干净。 : 或者用isopropanol沉淀后再加Dnase处理,再用Trizol去除DNase?这样沉淀的步骤对 : RNA的损失比较大。 : 请大家发表一下意见。
|
s******s 发帖数: 13035 | 3 你trizol, chloroform污染过的水相,DNase不太可能有活性。
反正我都是用kit的。。。
净。
【在 b*****n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 上网查了一些内容,发现相当一部分人推荐用DNase处理样品。 : 我想能否在Trizol抽提中加chloroform离心后的水相中加DNase,然后再加0.5ml : Trizol杀灭和去除DNase。 : 不确定水相中的成分,DNase的活性如何,再用少量Trizol抽提是否能把DNase去除干净。 : 或者用isopropanol沉淀后再加Dnase处理,再用Trizol去除DNase?这样沉淀的步骤对 : RNA的损失比较大。 : 请大家发表一下意见。
|
b*****n 发帖数: 1841 | 4 今天试了一下,这样处理genome DNA全部去除干净,除了RNA量有点损失外,其它一切
都好。
【在 s******s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 你trizol, chloroform污染过的水相,DNase不太可能有活性。 : 反正我都是用kit的。。。 : : 净。
|