r******k
发帖数: 446 | 1 做IP的时候 经常一下做4-5个不同的sample，用一个抗体去pull down。但是最后pull
down下来的total蛋白总是量不一致，很难看。 大家都会在pre-clean了以后先去
quantification一下蛋白量 再加抗体做IP吗？ 还是run 两次western，用第一次的去
调平？？谢谢 |
e****s
发帖数: 1125 | 2 IP后，总蛋白应该非常低吧。测得准吗？
pull
【在 r******k 的大作中提到】
: 做IP的时候 经常一下做4-5个不同的sample，用一个抗体去pull down。但是最后pull
: down下来的total蛋白总是量不一致，很难看。 大家都会在pre-clean了以后先去
: quantification一下蛋白量 再加抗体做IP吗？ 还是run 两次western，用第一次的去
: 调平？？谢谢
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y*********u
发帖数: 183 | 3 理论上IP后洗过后总蛋白量的区别都是系统误差级别的。
如果真的差别很大要考虑是不是某一步protocol有问题。
pull
【在 r******k 的大作中提到】
: 做IP的时候 经常一下做4-5个不同的sample，用一个抗体去pull down。但是最后pull
: down下来的total蛋白总是量不一致，很难看。 大家都会在pre-clean了以后先去
: quantification一下蛋白量 再加抗体做IP吗？ 还是run 两次western，用第一次的去
: 调平？？谢谢
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r******k
发帖数: 446 | 4 主要是我用虽然都是一种cell line 但是每个cell line都有不同的mutation。 可能是
我grow细胞的时候就没grow好。 四种细胞细胞数不一样导致总蛋白量不同~ =（
【在 y*********u 的大作中提到】
: 理论上IP后洗过后总蛋白量的区别都是系统误差级别的。
: 如果真的差别很大要考虑是不是某一步protocol有问题。
:
: pull
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r******k
发帖数: 446 | 5 主要是我用虽然都是一种cell line 但是每个cell line都有不同的mutation。 可能是
我grow细胞的时候就没grow好。 四种细胞细胞数不一样导致总蛋白量不同~ =（
【在 y*********u 的大作中提到】
: 理论上IP后洗过后总蛋白量的区别都是系统误差级别的。
: 如果真的差别很大要考虑是不是某一步protocol有问题。
:
: pull
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r******k
发帖数: 446 | 6 主要是我用虽然都是一种cell line 但是每个cell line都有不同的mutation。 可能是
我grow细胞的时候就没grow好。 四种细胞细胞数不一样导致总蛋白量不同~ =（
【在 y*********u 的大作中提到】
: 理论上IP后洗过后总蛋白量的区别都是系统误差级别的。
: 如果真的差别很大要考虑是不是某一步protocol有问题。
:
: pull
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m***a
发帖数: 7 | 7 我也总是遇到楼主的问题，一些做IP的人跟我说，用第一次WB的结果去调上样量。 |
r******k
发帖数: 446 | 8 好的！ 学习了！ 我总是在关键的地方的total protein 弱掉！！！崩溃！
【在 m***a 的大作中提到】
: 我也总是遇到楼主的问题，一些做IP的人跟我说，用第一次WB的结果去调上样量。
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t**m
发帖数: 158 | 9 难道不是数了细胞，然后用同样量的细胞往下做么？
【在 r******k 的大作中提到】
: 主要是我用虽然都是一种cell line 但是每个cell line都有不同的mutation。 可能是
: 我grow细胞的时候就没grow好。 四种细胞细胞数不一样导致总蛋白量不同~ =（
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r******k
发帖数: 446 | 10 因为我要检测这个蛋白的pan-tyr情况， 而且这个蛋白的磷酸化很容易受到外界的影响
（比如tyrpsinize细胞以后很快就会消失）。 所以我都是直接刮下来，不影响
signaling。
【在 t**m 的大作中提到】
: 难道不是数了细胞，然后用同样量的细胞往下做么？
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