g*******f 发帖数: 427 | 1 我想用一个蛋白的抗体来免疫沉淀这个蛋白,目的是要从组织中富集这个蛋白用来做质
谱看它的在体内的修饰情况。
我用抗体沉淀蛋白后,加dynabeads protein G,洗脱后跑western blot 看蛋白有没有
被沉淀下来。western blot用做IP的抗体检测,发现在55KDa有非常强的带,但是我的
目的蛋白是40KDa, 这个带应该不是protein G,因为protein G 只有17 kDa。 我想请
问这个带会是什么呢?用什么抗体做western blot 来检测这个ip 后的产物比较好?
多谢了 |
d**p 发帖数: 149 | 2 your IP Ab heavy chain?
【在 g*******f 的大作中提到】 : 我想用一个蛋白的抗体来免疫沉淀这个蛋白,目的是要从组织中富集这个蛋白用来做质 : 谱看它的在体内的修饰情况。 : 我用抗体沉淀蛋白后,加dynabeads protein G,洗脱后跑western blot 看蛋白有没有 : 被沉淀下来。western blot用做IP的抗体检测,发现在55KDa有非常强的带,但是我的 : 目的蛋白是40KDa, 这个带应该不是protein G,因为protein G 只有17 kDa。 我想请 : 问这个带会是什么呢?用什么抗体做western blot 来检测这个ip 后的产物比较好? : 多谢了
|
i**********a 发帖数: 1402 | 3 55应该是heavy chain,如果你有另外一个物种的抗体就用那个看。 |
g*******f 发帖数: 427 | 4 多谢两位的回复,可是一个抗体如何跟自己的heavy chain 结合呢?
我没有另外物种的抗体,那么还有什么别的办法检测我要的蛋白是否被IP下来了呢? |
i**********a 发帖数: 1402 | 5
是二抗可以检测heavy chain,因为二抗是检测所有那个物种的Igg的。
【在 g*******f 的大作中提到】 : 多谢两位的回复,可是一个抗体如何跟自己的heavy chain 结合呢? : 我没有另外物种的抗体,那么还有什么别的办法检测我要的蛋白是否被IP下来了呢?
|