g*******f
发帖数: 427 | 1 我想用一个蛋白的抗体来免疫沉淀这个蛋白，目的是要从组织中富集这个蛋白用来做质
谱看它的在体内的修饰情况。
我用抗体沉淀蛋白后，加dynabeads protein G,洗脱后跑western blot 看蛋白有没有
被沉淀下来。western blot用做IP的抗体检测，发现在55KDa有非常强的带，但是我的
目的蛋白是40KDa, 这个带应该不是protein G，因为protein G 只有17 kDa。 我想请
问这个带会是什么呢？用什么抗体做western blot 来检测这个ip 后的产物比较好？
多谢了 |
d**p
发帖数: 149 | 2 your IP Ab heavy chain?
【在 g*******f 的大作中提到】
: 我想用一个蛋白的抗体来免疫沉淀这个蛋白，目的是要从组织中富集这个蛋白用来做质
: 谱看它的在体内的修饰情况。
: 我用抗体沉淀蛋白后，加dynabeads protein G,洗脱后跑western blot 看蛋白有没有
: 被沉淀下来。western blot用做IP的抗体检测，发现在55KDa有非常强的带，但是我的
: 目的蛋白是40KDa, 这个带应该不是protein G，因为protein G 只有17 kDa。 我想请
: 问这个带会是什么呢？用什么抗体做western blot 来检测这个ip 后的产物比较好？
: 多谢了
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i**********a
发帖数: 1402 | 3 55应该是heavy chain，如果你有另外一个物种的抗体就用那个看。 |
g*******f
发帖数: 427 | 4 多谢两位的回复，可是一个抗体如何跟自己的heavy chain 结合呢？
我没有另外物种的抗体，那么还有什么别的办法检测我要的蛋白是否被IP下来了呢？ |
i**********a
发帖数: 1402 | 5
是二抗可以检测heavy chain，因为二抗是检测所有那个物种的Igg的。
【在 g*******f 的大作中提到】
: 多谢两位的回复，可是一个抗体如何跟自己的heavy chain 结合呢？
: 我没有另外物种的抗体，那么还有什么别的办法检测我要的蛋白是否被IP下来了呢？
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