i********y
发帖数: 23 | 1 当初从别的实验室弄来一个带GFP的lentiviral vector.刚开始的时候还想着这个载体
不错，到时可以通过看GFP来估量感染效率。
结果今天把cDNA终于克完之后，突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
的LncRNA的序列后面，等于最后出来的transcript是：
5'LncRNA---GFP 3'
考！！！！
所以想请问各位大侠，有没有表达LncRNA的经验。
我现在有个想法，就是：
1. 首先确认GFP前面有没有IRES
2. 如果有，我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是：
5' LncRNA---polyA----IRES----GFP 3'
可行否？ |
i********y
发帖数: 23 | 2 Actually, 我想到了一个更好的方法
https://www.systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/
vector-maps-bidirectional
去买bidirectional 或者dual-promoter lentiviral vector? 哪位大侠有用过这两种
vector的经验嘛？ |
W*********1
发帖数: 2 | 3 你个傻逼 lncRNA不编码coding gene, 也就是说不会被翻译 串联GFP有毛线用 |
W*********1
发帖数: 2 | 4 我可以打折卖给你一套lentivirus系统来表达lncRNA |
w******n
发帖数: 767 | 5 老实交代你是怎么混进来的？
【在 i********y 的大作中提到】
: 当初从别的实验室弄来一个带GFP的lentiviral vector.刚开始的时候还想着这个载体
: 不错，到时可以通过看GFP来估量感染效率。
: 结果今天把cDNA终于克完之后，突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
: 的LncRNA的序列后面，等于最后出来的transcript是：
: 5'LncRNA---GFP 3'
: 考！！！！
: 所以想请问各位大侠，有没有表达LncRNA的经验。
: 我现在有个想法，就是：
: 1. 首先确认GFP前面有没有IRES
: 2. 如果有，我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是：
|
j*******u
发帖数: 81 | 6 我看着也纳闷
【在 w******n 的大作中提到】
: 老实交代你是怎么混进来的？
|
w******n
发帖数: 767 | 7 老实交代你是怎么混进来的？
【在 i********y 的大作中提到】
: 当初从别的实验室弄来一个带GFP的lentiviral vector.刚开始的时候还想着这个载体
: 不错，到时可以通过看GFP来估量感染效率。
: 结果今天把cDNA终于克完之后，突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
: 的LncRNA的序列后面，等于最后出来的transcript是：
: 5'LncRNA---GFP 3'
: 考！！！！
: 所以想请问各位大侠，有没有表达LncRNA的经验。
: 我现在有个想法，就是：
: 1. 首先确认GFP前面有没有IRES
: 2. 如果有，我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是：
|
D****n
发帖数: 14 | 8 人家没准是想检测一下这个LncRNA是否表达未知peptide，你们这么激动干啥？ |
x********e
发帖数: 35261 | 9 人说了啊，看GFP表达估计感染效率
【在 W*********1 的大作中提到】
: 你个傻逼 lncRNA不编码coding gene, 也就是说不会被翻译 串联GFP有毛线用
|
x********e
发帖数: 35261 | 10 不了解lncRNA, 不过我会担心lncRNA跟mRNA的结合蛋白不同，带到的地方也不同。所以
最后你的核糖体不一定有机会接触到lncRNA。另外，lncRNA后面挂那么大一坨，肯定会
影响它的功能吧。
【在 i********y 的大作中提到】
: 当初从别的实验室弄来一个带GFP的lentiviral vector.刚开始的时候还想着这个载体
: 不错，到时可以通过看GFP来估量感染效率。
: 结果今天把cDNA终于克完之后，突然意识到一个问题。载体里的GFP序列也会链接到我
: 的LncRNA的序列后面，等于最后出来的transcript是：
: 5'LncRNA---GFP 3'
: 考！！！！
: 所以想请问各位大侠，有没有表达LncRNA的经验。
: 我现在有个想法，就是：
: 1. 首先确认GFP前面有没有IRES
: 2. 如果有，我可否在我的LncRNA后面加一段polyA,所以最后的序列就是：
|
i********y
发帖数: 23 | 11 我是楼主。当时被告知是和链接里的plasmid类似的东西(CD550A-1)
https://www.systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/
vector-maps
结果后来发现是个N-term GFP tag...Anyways, 反正cDNA也还没克完，也不算浪费时间
。 |
i********y
发帖数: 23 | 12 对，所以我准备买这个载体（CD550A-1)
https://www.systembio.com/lentiviral-technology/expression-vectors/cdna/
vector-maps
【在 x********e 的大作中提到】
: 不了解lncRNA, 不过我会担心lncRNA跟mRNA的结合蛋白不同，带到的地方也不同。所以
: 最后你的核糖体不一定有机会接触到lncRNA。另外，lncRNA后面挂那么大一坨，肯定会
: 影响它的功能吧。
|
