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m******t
发帖数: 4077 | 3 真的key吗？我是要用在BOYC的work PC上。 |
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n******h
发帖数: 2544 | 4 这东西有个问题想问，淘宝上的key激活以后能够做system update吗？ |
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r*********n
发帖数: 4553 | 6 几快钱的东西，能用多久算多久，只要你不重装，可以一直用。 |
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l****z
发帖数: 29846 | 10 那个win8的速度很慢阿, 简直连不上.
改一下,速度还可以,大概200k/s吧. |
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l****z
发帖数: 29846 | 12 你这个office 2013是retail版本还是vol版本? |
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b******m
发帖数: 488 | 17 哦哦哦，难怪。。现在我做WT，本来是在去年的file上改，然后被senior说不能用
Noted，必须改。我就不明白了，一个noted到底碍着pcaob神马事了啊？？？！！！！
还说神马要特别注意confirmed, verified 这些词的用法。我也不知道该怎么用，结果
交上去的WT被上面写了160个comment回来让我改。天天早上6点多出门晚上12点左右到
家，每天往返106迈，觉得自己快被折腾死了。
问题是这不还没到忙季么？？？！！！！！。。。。。。。。。 |
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x******h
发帖数: 838 | 18 专业潜水员，特地注个 id 问个问题。
教授算中小牛吧，十多年的 hhmi，比较年轻，不过当了老板后的文章大多是 mcb 水平
，没有 cns，而且最近两年没有文章了。当老板前倒是 cns 都有。中等牛学校。实验
室的博士后出路很好。
我找 博士后，水平不怎样，文章普普通通，简历里文章写起来倒不算少，不过三分之
一还在写。和他联系十天后没有回音，追了一封 email，很快收到一封热情洋溢的
email，先抱歉最近忙，然后夸了我一番。还给快递来一篇基本完稿的文章和手写亲笔
信，我那个感动啊。要了推荐信。问那个方向有兴趣，还有准备怎么做。
给他送去了三封推荐信，并且递上个研究计划－－我说得比较具体，因为他问准备怎么
做嘛，好像没有个具体方向没什么办法说。
他回信说推荐信评价高，想和我电话里聊，不过没有提研究计划的事。定了周末聊。上
个周末聊了有 75 分钟吧，一上来就问本科做什么研究，简直晕了，记得的不多吧？不
过我还有些印象。然后就是 rotations 干了啥，再晕，查家谱呢。他一直问我的经历
，一个小时都没有什么机会说他自己的研究。最后我只问了几个问题，包括我的研究计
划感觉怎样，不... 阅读全帖 |
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a****e
发帖数: 128 | 19 想知道这种方法到底可不可靠，fresh section。我想在wt 和 mt之间 比较一种蛋白的
表达量，但貌似每次的结果都不一样，有时是wt高，有时是mt高，表达量差别又不大，
所以很难有一个确定的结论。
请问高手有没有什么建议没有，怎样才能处理这种情况? 另外，显微镜的放大倍数会对
结果又怎样的影响？目前做wester-blot confirm 不是太现实. |
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a******s
发帖数: 37 | 20 用flox/wt;cre好 还是flox/flox好? 需要再加一组WT congenic吗？ |
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h********n
发帖数: 4079 | 21 我昨天在想这个Cre的问题。 我想， 能不能用这个transgene头围的序列设计primer测
序， 测出transgene前后的序列， 然后设计primer根据区分homo hetero and wt.
homo和wt都是一条带， hetero两条带。
cre/
pay
you
the
cre,
different |
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w***j
发帖数: 88 | 22 Dua说的是最简洁的一种，最后的就是A flox/flox;Cre和A flox/flox，后者是对照组
，但这种做法完全不考虑Cre的影响。
htscorpion的方法比较复杂，还要同A wt/wt;Cre作对照，可能更为严格一些，但也更
为复杂。 |
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h********n
发帖数: 4079 | 23 A-flox/wt X A-flox/wt Cre/Cre 就可以得到三种.
我觉得, 选什么样的对照, 要看你的目的是什么. |
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D*a
发帖数: 6830 | 24 还有要看你们当时是怎么决定的KO的strategy吧
像我们的老鼠敲掉的是跨膜蛋白的ligand结合位点的exon，然后敲掉之后在下一个exon
中造成移码突变，然后造成几个stop，这样就确保蛋白质没有作用。
还有我们的引物设计是这样的
引物a －－loxp－exon－－引物b－－loxp－－反向引物c
这样wt和lox是靠bc来区别，ac相比之下太长扩增效率很低，ko之后就是ac扩增，这样
wt lox excised都可以用这三个引物来区分。我觉得这种pcr比你的好些，要不你自己
重新设计引物试试吧。 |
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s*******e
发帖数: 1010 | 26 Se-Met和WT几乎就是两个蛋白，十几个突变在那里，性质不一样很正常，应该重新
screen生长条件，不能抱住WT的条件不放手。
DDM都出沉淀的话确实不是好兆头，你如果在室温下长晶体的话应该试试4C |
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p*****m
发帖数: 7030 | 27 首先，有n多的病不知道靶点，要是真知道了就好了
第二，可以用外因在WT animal induce病，不一定就是在WT fish上直接搞 |
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A***i
发帖数: 50 | 28 Sorry that I did not say clearly.
If I transfect the mutant alone, see no current in electrophysiology. But if
I transfect the mutant with wt, see no diffence than wt alone. So it is not
dominant negative. But causing atrial fibrillation in human.
is
story |
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b**********8
发帖数: 349 | 29
不明白，什么是multiple shRNA?
我们以前用shRNA的时候一般这样分组：wt，shcontrol，shRNA1，shRNA2
现在用siRNA，只分三组，wt，scramble，siRNA |
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Z**********g
发帖数: 222 | 30 感觉是你KO的基因在C57 strain上产生了一些问题啊.关于crossing,female能用wt尽可
能用wt啊,毕竟female还涉及到pregnancy,lactation等后续问题. |
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c****l
发帖数: 1086 | 31 你如果实在讨论在体外的transformation的话，那就是和体内的概念完全不同了。
只有一个oncogene而且还是wt，（也就是还不能称oncogene只是proto-oncogene，），
即使是真正的所谓oncogene（mutated one）经典的象myc,ras，E1A on its own也无法
transform cellline，原因很明显，scott lowe，John Cleveland十多年前就发现了，
单独的oncogene acitvation会induce cell death。 必须要结合inactivation of P53
or Arf ...才可能transform cell。你所指的cellline往往都是immortalized，而
immortalized celllines 30% has p53 mutation, 30% has Arf mutation, another
30% has mdm2 amplification。
你要是真要找一符合你的标准的wt的“oncogene”，那我就告诉你一个吧。
SV40， 哈哈哈哈哈哈哈... 阅读全帖 |
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J*****i
发帖数: 55 | 32 用WESTERN BLOT检测蛋白A， 使用两个公司的不同A抗体， 在两套WT和A KO 细胞
lysate中看到的条带一模一样， 没有一条band在KO中消失。两套WT和A KO老鼠来自不
同的实验室， in vitro实验都有和A KO 相关的phenotype。
这到底是怎么回事？ |
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s******y
发帖数: 220 | 33 本人老鼠新手，菜鸟上路就要cross三个转基因。
起始条件是：三个蛋白，蛋白C KO，蛋白S overexpression, 蛋白R point mutation
Knock in.
我杂交了 male （C het，S overexpression） 和female （R homo）。
现在第二代开始得到我想要的 Cnull, S overexprssion, R homo.
但是我的这些老鼠的genetic background很不一样，我拿到的 breeder male就是很
mixed 的背景，据说主要是FVB/N, 那个breeder female好点，是C57BL/6, 所以这后代
也杂得很厉害。back cross回去，耗时间太久，请教老鼠达人们我不back cross 老鼠
，OK不？
如果是OK的，那我的control就要很严格的match了，现在需要的control 至少是wt，
Cnull S overexpression。 如果我从cross的后代里， 比如说第二代， 得到了这些
control （wt， Cnull S）， 我能不能单独把他们设定为contro... 阅读全帖 |
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D*a
发帖数: 6830 | 34 这个很难笼统的说，我在你另一个帖子里回了，你本来就有background的问题，如果
control还不是一个爹妈出来的，很难比较，不光以后发表文章，你自己都有可能半路
上怀疑是不是实验设计的问题。你看看能不能拿a ＋＋ ，b＋＋，c＋＋，和a ＋＋ ，
b＋＋，c＋-配？这样一半是control一半是mutant。你三个基因，可以看看你想什么和
什么对照？不知道你跟你老板讨论过将来发表到什么杂志之类的了么？
还有发表文章档次的问题。我看见有的paper上三个control的，比如他们是交配一个
disease模型和一个基因的KO，就是有病的wt，没病的wt，有病的heterozygote，和没
病的heterozygote，其中有病的heterozygote是他们要证明的某基因对某病的作用。
我们现在做的一个疾病模型也是杂交很麻烦，我老板嫌太浪费钱，就让得病作为对照组
，得病加一个基因KO作为mutant组，打算这样来发表。但是我们还是留了一些KO没病的
老鼠，其实是想看看能不能做别的，所以我也不能肯定的说我老板不会中间改主意加一
组对照
啰嗦了一堆，也没给个答案，希望能有点用 |
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m*****u
发帖数: 15526 | 35 我们似乎注重的方面不一样。半固体培养更着重看群体情况而不是单一细胞集落。比较
wt和mu各lineage分化情况，如果是我的话会把相同浓度的wt和mu cell做倍比稀释，每
个浓度都接种到methylcellulose,观察计数集落数量，大小，种类。然后按这些指标分
别统计比较，观察有否差异。如果集落本身就有重大区别，再看集落本身的情况。如果
你能得到一个高纯的细胞群体，colony forming cell的比例很高，随机看孔也不是不
可以。不过这种纯化富集本身就可能导致bias。 |
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o**i
发帖数: 1165 | 36 I am not an expert of cancer biology.
To my knowledge, wt p53 could exist in immortal cell lines, such as large T
transformed cells.
And I was taught, n years ago, that p53 could be induced by several factors,
such as DNA damage, viral infection and stress blablabla.
Your antibody probably cannot discriminate mutate from wt.
What assure you that p53 got mutated anyway? Am I missing something here.
说英文真XX累啊 老夫有待提高啊
normal |
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L******e
发帖数: 679 | 37 Using TaqMan SNP genotyping assay to detect a SNP. The problem is that all
samples (blood genomic DNA) always showed the same "heterozygous" patten:
signals for WT and SNP are the same.
Does that mean the probes bind unspecifically? i tried different annealing
tep. at 60, 62 and 64 C degree, looks no much change.
The Tm of the primers: 55 C (forward) and 59 C (reverse)
The Tm of probes: 51 C (WT), 49 C (SNP)
PCR product: 90 bps
The primers and probes are designed by the ABI.
What can i do nex... 阅读全帖 |
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e****s
发帖数: 1125 | 38 没太看明白。
你想研究这个X是不是直接和催化相关？
底物不能结合是WT还是mutants? 确定你的酶是活的吗，有测过WT的酶活吗？特别如果
底物不能结合的话。 |
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f********s
发帖数: 115 | 39 做CHIP的同时，要保留一定体积的input,我们一般保留10%的input.比如说，用150ul的
DNA做CHIP,保留15ul作为input.CHIP-DNA和input-DNA用同样的方式purify到同样的体
积里。做QPCR的时候，先将input做梯度稀释，做出一个标准曲线。比如说稀释五倍。
第一个点是10% input, 第二个点2%input，第三个点0.4%input....PCR仪会根据你的标
准曲线，计算CHIP-DNA相当于x% input.这就是你的normalize 过后的值。
对于不同的细胞要用不同的标准曲线，比如说WT，要有WT的标准曲线；Mut,要有Mut的
标准曲线。这个时候IgG作为negetive control，比如说相当于0.03%input；那你的
postive signal 就可能是相当于0.3% input（相对于IgG 有10倍enrichement）。 |
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w******y
发帖数: 2504 | 40 我先用1WAY ANOVA，然后用的是TURKEY'S MULTIPLE COMPARISON，它只告诉我是不是
SIGNIFICANT (p < 0.05)。难道是我选的分析的PROGRAM错了？我有4组：WT, WT +
TREATMENT, TRANSGENIC, TRANSGENIC +TREATMENT。
还请PEOPLEM指点一下。 |
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w******y
发帖数: 2504 | 41 KO和WT在正常情况下没有差别，WT小鼠在HFD5个月后心功能变差，但是KO在HFD 5个月
后心功能正常。
测了5个月，每组都有10几只。
我觉得这个样本量还是够的，而且小鼠的进食量很稳定。 |
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a***y
发帖数: 19743 | 42 一个是Jackson Lab的
129S1/SvImJ
一个是Charles River的
129S2/SvPasCrl
我们从合作者哪里要一个homozygous KO
他们自己breed说是129/Sv的WT，但是鉴于自己breeding我们这里可能买贵，所以在考
虑直接购买WT。
以上两个supplier两个129/Sv不知道有什么区别？
谢谢！ |
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s****h
发帖数: 184 | 43 http://retractionwatch.wordpress.com/2011/09/28/you-can-do-that
You can do that? A massive correction in Nature, but no retraction
This past April, Amparo Acker-Palmer and colleagues published a study in
Nature, “Ephrin Bs are essential components of the Reelin pathway to
regulate neuronal migration.” Within a day of its publication, Nature
readers were raising questions about many of its figures. They started like
this:
Andy Gu said:
Looks like Fig 1a, the two middle figures are actuall... 阅读全帖 |
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y**u
发帖数: 7459 | 44 谢谢！B6, 所以这个是正常的，我糊涂了很久。不知道wt到底怎么了，它们在一起的。
mut比这个厉害很多，感觉都有点秃了，vLDL很高，老鼠很瘦，脂肪肝程度还不如wt,
但是结构完全破坏了，都和其他diet很一致。当时感觉phenotype其实不错，比很多
paper里的程度强，但是我另有个主要的live imaging的project, 一个人实在搞不定，
很多东西有tech可以做但是细节顾不过来了。现在想想还是觉得很可惜的。 |
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t****b
发帖数: 47 | 45 2012年11月13日，新的生物学刊物eLife发表论文：中国科学家攻克了一个长期困扰国
际科学界的难题，而这一基础科学问题也与人类、特别是中国人民的健康相关。
过去，世界和中国忽略了1980年代我国科学家在条件艰苦时代做出重要贡献，我们现在
应该赞广西肿瘤防治研究所的严瑞琪和苏建家等、北京第二传染病院的余昌晏等和中国
医学科学院的庞其方等建立乙肝动物模型；
现在，我国已经有条件和能力改革科学管理体制机制、提供适当环境，让一些科研机构
年富力强的科学家心无旁骛，如北京生命科学研究所的李文辉带领学生和同事发现乙肝
病毒受体；
将来，希望全国科研机构能推广适合各个学科和机构自身规律的体制机制改革，使大批
年轻人集中精力在专业上充分发挥作用，他们大有作为才能使中国的科学大有希望。
肝炎和肝炎病毒
肝炎在全世界有广泛的危害，中国人群肝炎患病率尤其高。多种病毒导致病毒性肝炎：
甲、乙、丙、丁、戊（A、B、C、D、E）等。
全球二十亿人曾感染乙型肝炎病毒（HBV），慢性乙肝感染超过3.5亿人。即使在乙肝疫
苗已经研制成功多年以后，我国还有逾九千万人感染过乙肝病毒，上千万乙肝患者，每
年感染超过百万... 阅读全帖 |
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l***y
发帖数: 4671 | 46 试试这个？
http://www.kinativ.com/technology.html
就是当年的 ActivX 那个系统。大意就是把所有磷酸位点都用 tagged ATP or ADP 来
不可逆地 label 上，然后做 MS 看都有哪些 protein 被 ATP/ADP tag 给标定了。如
果你有很好的 antibody 来把想要的 protein 给抓下来，而不是拿所有的 protein 来
做 MS，同时用 wt 做 control，那就一目了然了。前年打过电话，公司说这个系统可
以做 live。
要想看 mutant 对下游的影响，做个标准的 functional proteomics 甚至 mRNA
microarray 就好了 -- 跟 wt 对照。
IP |
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S******9
发帖数: 2837 | 47 如果原来的primer可以区分cre band， flox，wt 条带的话，可以用原来的primer做，
出现一个flox+Wt band就行。如果不能区分的话， 就要自己设计新的primer了。 |
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b*****g
发帖数: 119 | 48 WT male?? 那个是测试交配吧?
如果正式实验中也那么用, 那岂不是都要有一个 WT allele了? 怎么delete呢? 不懂了
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