l******g
发帖数: 1623 | 1 这东西早就有了, 自动换液, 传代, plate assay plates, 收集培养液, 纯化特定蛋白
, 测蛋白浓度, 都是在机器里面完成. 可以去TAP biosystem看看, 大大小小的还有选
择. 公司里面早就用了; 学校里面估计比较难推广, 用机器肯定比雇人要贵. |
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M*****n
发帖数: 16729 | 2 thanks a lot.
如果是300nM，培养液多久换一次? |
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w******n
发帖数: 371 | 4 你的苦，我知道-----致我的生物同行
岁末盘点，发现自己还欠着几笔账。今年我曾经收到过几封长信，读者向我询问生物博
士后话题，向我倾诉内心苦恼。这些读者有的在美国，有的在国内。有的刚毕业，有的
已是婆婆级的博士后了。无论你在哪里，无论你是否课题顺利，请相信我能理解你。你
的苦，我知道。
其实任何行业要想做到出类拔萃，都不容易，生物领域当然也不例外。做了多年的博士
后，我的感觉是，做生物之苦，不仅在于体累，而在于心累。搞生物科研，大部分时间
或是在黑暗中摸索最佳实验条件，或是在验证假说。和其他行业相比，生物研究成功的
时候少，失败的时候多。有时候你天天忙得昏天黑地，还没什么结果。如果老板逼得太
急，那种苦，就像婆婆催促不孕的媳妇生孩子似的，内心失落之感很难避免。
不容置疑，生物领域肯定有成功人士。但你是否具备成功的素质，这很重要。除了好课
题，好机遇，你是否甘心为科学献身，是你能否成功的关键因素。比如说我自己吧，虽
然我可以搞生物科研，也能出不错的文章，但我骨子里是拒绝苦行僧的科研生活的。尤
其是有了孩子以后，需要我周末或者是节假日加班时，我对科研的抗拒之心可谓是辽阔
高深。当我有机会... 阅读全帖 |
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x****n
发帖数: 1454 | 5 谢谢你。
养细胞可以用培养液吧， 有什么特殊要求吗，我们实验室隔壁是搞分子生物学的，可能有一些设备我们可以借用。望赐教。 |
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x****n
发帖数: 1454 | 6 买个二手的也正在考虑.
但是今天询问了一下几个小时开外的一个大学, 了解到如果想做人细胞, 实验室必须通
过认证, 请问达到认证要求难吗?
我们很想和有经验的实验室合作, 但是我们想用提取物加到细胞培养液里, 而且提取物
不是很稳定, 所以想就近做细胞实验, 如果能通过认证的话, 还是打算试试. |
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j******1
发帖数: 1315 | 7 包Lentivirus，但是如果用来感染Stem cell血清会对Stem Cell 有影响吧？才想到，
各位大侠该怎么办？ |
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m*****z
发帖数: 1451 | 9 concentrate virus and resuspend in PBS |
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z*t
发帖数: 863 | 10 use the serum containing medium is OK, we do MSCV all the time. As long as
your virus containing medium don't exceed 1/3 of final volume, then it's OK |
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m*****z
发帖数: 1451 | 11 depends on the stem cell you want to transduce
as
OK |
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s**a
发帖数: 293 | 12 re
有些stem cell本身的培养基也是有血清的 |
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i****g
发帖数: 426 | 13 学术界的一句名言是“发表或死亡”（publish or perish），意指科学家必须发表论
文，否则就要出局。那些在知名期刊发表大量有影响论文的科学家能获得很高的地位以
及大量基金资助。这种利益驱使已经将学术圈搅得不再纯洁，少数人为了获得竞争优势
不择手段，“学术不端”的案例能经常听到，最常见的就是剽窃他人成果。一些极端情
况下，有科学家甚至会蓄意破坏同事的研究工作。近日，《科学美国人》杂志总结了这
些极端案例。
资助被停，报复同事
不久前，美国西奈山医学中心（位于纽约曼哈顿，是美国最大的医学院附属医院之一）
博士后莫森·霍森卡尼遭到警方逮捕，被控犯有盗窃罪。霍森卡尼今年40岁，伊朗裔，
毕业于哈佛大学医学院，主要研究方向是心脏再生的分子机制。据其他同事介绍，去年
6月霍森卡尼的研究项目不幸被医院方面停掉，理由是研究进展太慢。另外，医院方面
还发现，他提供给院方的关于自身背景的信息“不可靠”。失去基金资助的霍森卡尼非
常恼怒，想到了疯狂报复他的同事，用恶劣手段破坏其实验工作。
受理此案的曼哈顿刑事法庭在法庭文件中说，去年7月1日，霍森卡尼展开了首次报复。
他偷偷溜进实验室，故意将对照... 阅读全帖 |
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o*****l
发帖数: 172 | 14 好像确实在高档杂志上很少见人用这种细胞系
不过在cardiovascular diseases领域比如什么ischemia reperfusion injury,
arrthymia等方向还是有些实验室在用的吧。
这个细胞系好像没有卖的把，然后培养液比较贵，伺候起来又麻烦点，感觉好像就算千
辛万苦作出实验来，reviewer们也不会给很多credit，因为虽说好像这是现在唯一的可
以传代的cardiomyocytes cell line但是有不少人认为这个不是真正的cardiomyocytes
cell line |
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D*a
发帖数: 6830 | 15 直接往培养液里加尼古丁阿，难道吸烟有害健康是因为房子里的烟么。。。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 16 直接往培养液里加尼古丁阿，难道吸烟有害健康是因为房子里的烟么。。。 |
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f*****f
发帖数: 195 | 17 Protein transfection的试剂盒很多公司都有。一些脂质体或类似的东西，pierce,
neb, clonetech, merke应该都有。
另外，可以在纯化的蛋白上加上TAT标签，直接加到细胞培养液后就可以进入细胞了。 |
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T****i
发帖数: 15191 | 18 详细讲讲我讨厌的那个女AP的所作所为。不少内幕也是我才知道的。
我们这嘎达有钱，薄厚前两年往往不用PI出钱。这女AP就招薄厚，到两年就赶走。最近
走的这个，是自己受不了了，呆了三个月，提出走人。还剩一个薄厚，快到两年了，就
等着被赶走了。其实她前三年有start up package，不知道她都花哪了。有一次有人送
货送错了，送到我这里，一大袋B27 salt，大概有70－100瓶，都是她定的。一瓶可以
配500ml 培养液。这些值5000－7000 刀。不知道她要干什么。后来也没看到她作出来
什么。
她找人的时候，总是撒谎，说她有好几个薄厚，另外还有其他candidate。其实她手下
薄厚最多的时候就是前三个月，有两个。她用薄厚做technician 的活，和薄厚的项目
没有任何关系。不干，就威胁人滚蛋。所以她招的人都是亚洲人，听话，又有身份限制。
她手下的学生也一样，呆不了两年就受不了，换实验室。有一次，她以为一个学生做的
项目可能会发CNS ，于是就说那个项目是她想出来的，她要做第一作者和通讯作者。该
学生只有跑路了。
她手下的technician也都呆不长。有一个女实验员要休产... 阅读全帖 |
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a*****x
发帖数: 901 | 19 这篇科普文章忽略了channelrhodopsin对neural circuits研究的极大贡献，不过总体
来说是很不错的介绍文章。
发信人: Areyousure (magic), 信区: Neuroscience
标 题: Re: 请哪位专家谈谈channelrhodopsin--目前最热的技术
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jun 6 13:48:27 2011, 美东)
光控大脑(转载自南方都市报)
斯坦福大学的一群学生通过植入老鼠脑部的光缆和海藻基因控制了它的行动，这个惊人
的实验背后凝聚着许多科学家的研究成果，最终这一技术可以被用于拯救帕金森等脑病
患者，甚至帮助实现人与机器真正结合的梦想。
2007年夏，一队斯坦福大学毕业生将一只老鼠放进了一个塑料盆。老鼠好奇地嗅着
盆底。它似乎不介意自己的头骨被刺穿插入了光缆，也不介意自己的运动皮层已经被改
写。一名学生打开开关，镶嵌入老鼠脑部的光缆发出蓝光。老鼠立刻开始以反时针方向
在塑料盆中绕着圈跑，似乎想要赢得鼠科动物奥运会。蓝光关闭，老鼠立刻停了下来，
用两条后腿站立，看着学生们，似乎在问，“我刚才为什么要... 阅读全帖 |
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n**7
发帖数: 90 | 20 新手问一下关于2-bromopalmitate (2-bp)的一些使用问题：
我用100% DMSO溶解后，用细胞培养液倍比稀释 （DMEM,10%FBS,1% pen/strep）,准备
做cytotoxic assay看不同浓度的2-bp对细胞的影响。但是发现在200uM和100uM 2-bp的
浓度下有很多黄色的絮状沉淀，不知道为何物，也不知道会不会因为这个原因影响细胞
状态，而非药物作用。不知道用过的人有没有这个问题。
所以我有几个问题如下：
用DMSO溶解2-bp正确么？我头天溶解了，室温下避光overnight后，第二天稀释了用，
是否2-bp必须要fresh配呢？
10% FBS会和2-BP作用么？
因为实验室确实没人用过这个问题，想请教各位大侠，不胜感激 |
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s********r
发帖数: 529 | 21 实验室都是做化学的都没有生物基础。但论文是做一个需要培养和测定酸盐还原细菌的
项目。看了些文献还是云里雾里，email不是很熟的committee member和在国内论坛发
贴都试过了，居然没有人睬都要失去信心了。。。毅然转战万能的mitbbs。请各位帮忙
看看又没希望做出来。大部分是基本的微生物问题，有些提的蠢。各位尽管拣会的答,
只求指点毋需详尽。多谢各位大人！
1.营养液和淤泥厌氧培养时需要的培养液浓度。硫酸盐还原细菌是反应的催化剂。怎么
估算一次性加入(总碳)多少才可以维持一段实验时间呢？除去碳，还要特别加入别的元
素么？氮磷等? 或者这个量不特别重要，随便加些就行？（只是需要维持细菌大量存
货并用PCR测量浓度，其他一概不用太了解。。）
２.采样：要从清夜采还是从淤泥采还是都要采了加起来算总量啊啊！多久能有大规模
增值呢？怎么确定增值已经到了平台期?万一错过了到了衰亡期岂不什么都测不到了么？
３.测量：测量打算借用生物系的qPCR.不过提取ＤＮＡ后一定需要先测定浓度么？用什
么仪器呢？之前进行稀释么？怎么确定需要稀释多少倍。。。
４.ＰＣＲ的标准曲线：如何得到标准物质（细菌... 阅读全帖 |
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t****g
发帖数: 120 | 22 在做prostate cancer cells的实验，有一个实验结果发现在10%FBS-medium和serum
free medium条件下的结果很不一样，不由得好奇，到底在serum free medium的情况下
细胞会发生什么样的变化？ 我用的是PC-3细胞，在serum free medium里细胞的
adherence和生长都还好，只是显微镜下看细胞的形状有变化。
欢迎大家讨论一下。 |
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b*******n
发帖数: 8420 | 23 serum free的情况下细胞生长应该会变慢吧？ |
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k****o
发帖数: 589 | 24 看你养什么细胞了。有的会stress，有的会挂掉。serum starvation少于12小时的实验
我多半都不信。 |
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h****n
发帖数: 2552 | 25 serum free会导致很多和细胞运动及形态有关的基因发生变化，比如rho family。所以
看到细胞形态有变化很正常的 |
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w***a
发帖数: 133 | 26 很多抑制肿瘤的，本来不表达的基因开始表达，然后他们的下游基因也开始表达
记得看到过这方面文章 做类似aCGH看细胞serum free以后各个基因上调／下调的 |
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p****e
发帖数: 105 | 27 搭车问一个问题，在小鼠淋巴循环里serum的浓度是血液的多少？有没有书籍文献讲这
个？谢谢！ |
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a******7
发帖数: 7936 | 28 肌纤维生成细胞需要2%马血清饥饿来诱发myotube的fuse
有的转染试剂要求转染前要饥饿细胞几个小时 |
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a*******n
发帖数: 156 | 29 HepG2如果serum free, 3天之内会全部死光 |
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b*******0
发帖数: 125 | 30 比如说 同一种原代细胞，分离自不同的老鼠品系，想看看细胞液中的分泌蛋白会不会
造成细胞差异。 怎么操作合适呢？ |
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s*****g
发帖数: 7857 | 31 口服药是要加辅助剂的.否则那么多中间药厂就要黄了.辅助剂可以是醇类,可以是...
去制剂版问问吧.
至于你的实验.可以采取楼上大侠的建议.
也用DMSO制备高浓度储备液,再用PBS或MEDIUM(处理细胞的培养液)制备第二储备液,把第二储备液放进MEDIUM步或水里达到你的最终浓度.(本人是这么做的) |
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i***0
发帖数: 160 | 32 转染48h后，转到100 mm plate上，加药，每三天换一次液，一至两周后去掉药，等细
胞长满，分到新的100 mm 板上， 一千，500， 200 个细胞/板， 观察单克隆， 用灭
菌滤纸（3mm直径）占trypsin用灭过菌的镊子夹着在单克隆上一抹，然后把滤纸放入新
鲜培养液中（24孔板），immunostain，WB，来确认单克隆的表达量和表达均一性。 |
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o****u
发帖数: 214 | 33 如果你不是来咨询问题的，那我就没什么好说的了。
其实你一开始问这个问题的时候，我就觉得奇怪，为什么要从提取液而不是培养液中提
取多肽
当然我还是很佩服你们能做到3k多肽在胞体中的过表达的。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 36 MEF 非常好养，DMEM +FBS + antibiotics 足够了。
针状晶体？ 这个我还没有见过，是不是你们的培养箱的湿度不够，所以培养液蒸发了？
或者是在瓶子外面的盐沉淀？ |
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j******n
发帖数: 941 | 37 加到孔里后用一毫升的枪到处多吹几下 另外建议培养体积大一些 防止表面张力的影响
要避免计数后先加入一定量体积再补足培养液 最好在孔外混好后一次性加入 |
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f******s
发帖数: 440 | 38 搜搜Celline bioreactor, 高浓度细胞培养
给lab scale用的
如果不够的话，养10L不常养就用shaker flask或者spinner bottle. 买个wavebag
system 就用一次是吃饱了撑的
到了10L要考虑过滤细胞，titer多高，跑多大柱子还是batch, 有没有FPLC...如果能提
高titer会事半功倍，试试不同cell line, 培养液...
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.3 |
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h******y
发帖数: 351 | 39 如果你的MEF是用作feeder的话，不建议用超过6代的细胞。
MEF对ROS很敏感，传代过多，MEF会自发immortalization。
分MEF最简单的办法是把组织挤过18-20G的针头，然后trypsin 3-5 分钟。MEF的培养液
中不需要加b-ME.
了。 |
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a******7
发帖数: 7936 | 40 是啊，培养液中为什么加b-ME啊，这玩意不是做western的时候用来保持蛋白完整性的
么？跟二硫键有关 |
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s******y
发帖数: 28562 | 41 鉴于有不少人来问我这个关于光学成像的问题，这个我作为一个老用户来说两句我的体
验吧:
1. 对于尺寸比较大的东西,比方说有5个微米那么大的,不管你的样品封在什么介质里，
你爱用什么镜头都无所谓, 因为那个由于镜头引入的偏差对于你关心的尺寸根本就无
足道.但是因为生物成像时要考虑到暴光过度会损伤样品,所以应该尽量用比较明亮的系
统,也就是,首选油镜，来减少暴光时间.
对于特别细微的东西,比方说酵母里面一个endocytic site 那么大小的东西,那就要非
常注意,如果你的样品制备在甘油或者那些常见的mounting medium 里那就用油镜,
如果你不小心是制备在PBS 里,那就尽量用水镜. 对于浸泡在培养液里的活细胞,如果必
须看非常细微的东西的话, 同样推荐用水镜.
至于干镜, 没有特别理由就尽量不要用来做精细成像,除非你们要做自动高通量多孔板
成像,镜头要在不同的孔之间反复挪来挪去, 那就只好用干镜.
2., 要注意你们用的盖玻片的厚度,除非你们的显微镜或者镜头的手册明确指明用
其他厚度,否则必须按默认值用1.5号. 这个事情很多人都搞错.我见过好几个物理出身
的人(但不是... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 42 说了这么多,一些不熟悉光学成像的人可能心里嘀咕了,那么我们到底该怎么做才是正确
的? 这个我作为一个老用户来说两句我的体验吧:
1. 对于尺寸比较大的东西,比方说有5个微米那么大的,不管你的样品封在什么介质里，
你爱用什么镜头都无所谓, 因为那个由于镜头引入的偏差对于你关心的尺寸根本就无
足道.但是因为生物成像时要考虑到暴光过度会损伤样品,所以应该尽量用比较明亮的系
统,也就是,首选油镜，来减少暴光时间.
对于特别细微的东西,比方说酵母里面一个endocytic site 那么大小的东西,那就要非
常注意,如果你的样品制备在甘油或者那些常见的mounting medium 里那就用油镜,
如果你不小心是制备在PBS 里,那就尽量用水镜. 对于浸泡在培养液里的活细胞,如果必
须看非常细微的东西的话, 同样推荐用水镜.
至于干镜, 没有特别理由就尽量不要用来做精细成像,除非你们要做自动高通量多孔板
成像,镜头要在不同的孔之间反复挪来挪去, 那就只好用干镜.
2., 要注意你们用的盖玻片的厚度,除非你们的显微镜或者镜头的手册明确指明用
其他厚度,否则必须按默认值用1.5号. 这个事情很多人... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 43 说了这么多,一些不熟悉光学成像的人可能心里嘀咕了,那么我们到底该怎么做才是正确
的? 这个我作为一个老用户来说两句我的体验吧:
1. 对于尺寸比较大的东西,比方说有5个微米那么大的,不管你的样品封在什么介质里，
你爱用什么镜头都无所谓, 因为那个由于镜头引入的偏差对于你关心的尺寸根本就无
足道.但是因为生物成像时要考虑到暴光过度会损伤样品,所以应该尽量用比较明亮的系
统,也就是,首选油镜，来减少暴光时间.
对于特别细微的东西,比方说酵母里面一个endocytic site 那么大小的东西,那就要非
常注意,如果你的样品制备在甘油或者那些常见的mounting medium 里那就用油镜,
如果你不小心是制备在PBS 里,那就尽量用水镜. 对于浸泡在培养液里的活细胞,如果必
须看非常细微的东西的话, 同样推荐用水镜.
至于干镜, 没有特别理由就尽量不要用来做精细成像,除非你们要做自动高通量多孔板
成像,镜头要在不同的孔之间反复挪来挪去, 那就只好用干镜.
2., 要注意你们用的盖玻片的厚度,除非你们的显微镜或者镜头的手册明确指明用
其他厚度,否则必须按默认值用1.5号. 这个事情很多人... 阅读全帖 |
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L*****t
发帖数: 56 | 44 老板负责学校一个生物技术课程的教务，自己也会带几个本科生。这次新进实验室的一
位，女，华裔，长相抱歉不过自我感觉良好。第一天参观实验室的时候居然端着一杯咖
啡一边喝一边打招呼，还没来得及阻止就被实验室主任看到了，一通训斥后此人眼望天
空一言不发，反而是我和老板不停的道歉。
第一个实验是LB平板上挑单克隆，此人称自己会做那我就我让她挑3-4个培养。在旁边
看了几秒就发现不对，用来挑菌的枪头居然不换就继续挑下一个，赶快叫停，花了10分
钟解释什么是无菌操作，确定她听懂了后我有事离开一会儿，回来的时候发现实验台上
一堆垃圾，还有一瓶没上盖子的培养液，人早已不知去向。
第二天做酶切的时候再次犯晕，吸过样品的枪头不换直接去吸酶。我指出问题，答曰“
这几个质粒应该都是一样的，为什么要换”。!@#$%^&* 这支全新的SmaI恐怕以后只有
她自己能用了。
双酶切第一步要求25度水浴培育一小时，重复了好几次都切不开，仔细询问后才明白此
人认为25度=室温，就把EP管在室温放了一个小时。问题是实验室常年缺乏日照，异常
阴冷，墙上的温度计显示室温是18度，当然切不开。最后是昨天把一个装着T4 Ligase... 阅读全帖 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 45 先做个MTT筛一下细胞对G418的敏感性。看多高浓度G418能杀死大部风细胞。
然后转染。
把转染的细胞稀释放入培养皿中，等他们附着后（24和）加G418，这时候大部分细胞
浮起来了，换培养液（含G418），总有单个细胞能附着生长。由单个细胞长成克隆。然
后用小圆柱体收集单细胞克隆。
选8-10个克隆细胞分别放入8-10小培养皿中，继续加入抗生素，阔增细胞数量。。。。 |
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a*****n
发帖数: 2835 | 47 看什么培养基，HEPES buffer的可能不变黄
还要看什么细胞类型 |
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b****r
发帖数: 17995 | 48 培养基蒸发了
细胞死了或者静息了
都不容易变黄
也有可能你的细胞分泌碱性物质？呵呵，理论上也有可能 |
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m*****u
发帖数: 15526 | 49 如果指示剂没问题，培养箱二氧化碳没问题。那就跟细胞代谢有关。糖酵解活跃的细胞
会产生大量乳酸，这是培养基变黄的重要原因。 |
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o**4
发帖数: 35028 | 50 人的hESC跟小鼠ESC差别很大，
ls说的很对，人的ESC跟小鼠EpiSC非常类似，加入特定的基因之后，可以用小鼠的ES
培养液培养hESC，相当于重编程了 |
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