s*******n
发帖数: 763 | 1 我来个芦荟海藻胶面膜(1L)，人在弯曲，可pickup |
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s*****x
发帖数: 593 | 2 tracy mm辛苦了~
非常喜欢这个胶，新宠大爱
湾区的MM自提，我在95054，谢谢！ |
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t*****c
发帖数: 201 | 3 谢谢MM支持，想了半天才记起是参过团的MM：）
我也觉得不错，就指着这个胶过夏天呢，嘿嘿 |
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L****A
发帖数: 12692 | 4 昨晚终于很下心来，所有的育苗盆都留在了外面没动。今早起来煮上咖啡就跑出去查看
。惊喜啊！辣胶终于发芽了，出来了２棵苗。回去查了１下日历，种下去整３周啊！！
！所以要有耐心，等吧！ |
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s*****w
发帖数: 185 | 5 【 以下文字转载自 TopArticle 讨论区 】
发信人: SpringIsGone (DogFish), 信区: Biology
标 题: 大家老板有多少要求把western结果定量做统计分析的？
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jul 8 13:04:43 2011, 美东)
刚完成一个项目，数据已经弄好了，文章也写得差不多了。结果老板说要把每个
western band定量，然后再把重复的2遍结果也定量，计算平均值，做统计分析。看看p
value
我简直是要吐血。快50个western结果，我都重复了3次，只挑了最好的扫描。
现在要把他们都重新扫描，定量，做统计分析，简直是有病。
你跟他说大部分文章都不定量的，即使定量也没有必要算平均值。他就说有的文章就这
样干了。
让他这么一搞，工作量不知道增加多少，关键是没有意义，纯粹浪费时间。
我们是个定量实验室，什么结果都要定量，免疫荧光看看位置的也要定量。
大家老板有这么固执的吗？根本不听劝，实验室的人都认为没必要，就他一个人坚持。
你在别的实验室做3个项目的时间，在这实验室只能做1个。
还有一个有意思的事。
他说我很多... 阅读全帖 |
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b**y
发帖数: 70 | 6 只是验证别人的那就按照别人的方法提取蛋白跑胶就是了。
我说的抽提就是指从组织或者细胞提到蛋白 |
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a********k
发帖数: 2273 | 7 最简单的办法，跑完胶把band切下来包在parafilm里面，直接用手把水挤出来。那些
TAE/TBE就可以直接用来做ligation了。效率不高，但是doable |
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u**s
发帖数: 384 | 8 12%，15%的resolving都试了,200V,100V也都试了，但是好像胶还是集中在上二分之一
，而且都很模糊，不知道是什么问题？ |
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p**********t
发帖数: 2636 | 9 如果是buffer的原因ladder也会模糊。应该很容易看出来是样品的问题还是胶的问题。 |
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l***y
发帖数: 638 | 10 running buffer很少有问题的，查配胶的两个buffer，尤其是ph8.8那个，加上样
buffer也
就那几样东西，统统换新的，有钱的直接把acrylamide也扔了
如果跑的marker是premix的，上样buffer可以排除了
adjust |
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T**********t
发帖数: 1604 | 11 10%的胶跑11kD的蛋白不太合适吧。用Bis-Tris或者Tris-Glycine的梯度胶应该也能分
得很好的。 |
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W****7
发帖数: 426 | 12 这个shift实验基本上取决于你的蛋白大小和磷酸化位点的多少，如果蛋白比较大位点
比较少，想用胶迁移率来做太难了。如果非要做的话，就是低点浓度的胶，跑的时间久
一点吧。
你为什么不直接IP出来打质谱呢？或者是用pS pY pT的antibody试试。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 13 分2.2kb和2kb比分3.2kb和3kb要容易些。
前者size相差10%，后者size相差6.7%。
用窄的梳齿，降低上样体积和浓度，2%的胶低电压多跑一会应该分得开。 |
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m******5
发帖数: 1383 | 14 实验室之前没人认真提过ＲＮＡ
请问如果在平常跑ＤＮＡ的胶上直接跑ＲＮＡ一般带型是什么样的？
据说会跑出一大堆弥散带，并且找不到明显的２８ １８ｓ 带？
有人能贴个图么？ |
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A******d
发帖数: 571 | 15 做胶跑胶半天，1抗过夜，就2天了。那你怎么弄？ |
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s*********t
发帖数: 600 | 16 是跑好的胶还是做好待用的？
前者，泡在水里能放一两个月，温度无所谓。最好做成干胶，可以保存数年。
后者，用湿润的纸巾和保鲜膜包好放在4度，可以保存一个月。时间久了会看到一些SDS
析出。不影响使用。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 17 现在都是小胶，没啥可惜的。以前大胶一次1L+的，可以考虑留着 |
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q*******8
发帖数: 768 | 19 RE 2楼的：
跑胶，染色；
制干胶；
放到暗盒里自显影。
一般用考马斯就好了，浓度低的用银染。我没做过银染，考马斯我就小染染~~~不过最
后几步一定要做全了，特别是带甘油的那个。
暗盒可以扔-80，据说比较好~~~ |
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g***j
发帖数: 40861 | 20 试了一次，是挺快的，但是对小片段效果好，大片段（>500)差。
对这个胶，谁有啥经验？ |
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z*****3
发帖数: 65 | 21 Qiagen Kit 回收100bP PcR产物，纯化后跑胶验证，发现200bp，300bp处，以及更大的
地方出现杂带，到底怎么回事？ |
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e**r
发帖数: 1144 | 22 用Bio-rad mini PROTEAN那么大的胶，跑50bp左右的片段，能分辨1-2bp的差异么？
能的话要用多大浓度的胶？ |
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r******g
发帖数: 600 | 23 直接切下来在dialysis tubing里面跑个人胶就行了
我一直用的原始办法 很好用的 |
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l***y
发帖数: 638 | 24 80%达不到，能有50%差不多了，简单点就开始多弄点dna去跑胶
达到 |
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x********e
发帖数: 35261 | 25 汇报一下进展~
PCR胶回收目标条带, 同样的sample跑了两个lane, 用两种kit分别回收。除了buffer加
的量有区别,其他步骤都一样。
zymo的效率挺高的, thermo fisher的kit我用着有点问题。可能乙醇没洗干净,上样的
时候全飘了。 |
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r******g
发帖数: 600 | 26 直接切下来在dialysis tubing里面跑个人胶就行了
我一直用的原始办法 很好用的 |
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l***y
发帖数: 638 | 27 80%达不到，能有50%差不多了，简单点就开始多弄点dna去跑胶
达到 |
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x********e
发帖数: 35261 | 28 汇报一下进展~
PCR胶回收目标条带, 同样的sample跑了两个lane, 用两种kit分别回收。除了buffer加
的量有区别,其他步骤都一样。
zymo的效率挺高的, thermo fisher的kit我用着有点问题。可能乙醇没洗干净,上样的
时候全飘了。 |
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S******e
发帖数: 393 | 29 多谢！下次就用低压转。已经跑了一次胶，高电压转的膜，检测的信号的确非常弱。
除了低压外，如果用0.1um的膜会不会效果好很多？ |
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h*******o
发帖数: 4884 | 31 原来在学校的时候我带过很多高中生， 几乎每年都是1-2个
质量参差不齐，好的能帮着干很多事， 差的你就希望他什么都不干最好。
但是带高中生是一个挺有意思的事情，可能会耽误一点时间，但是能互相学不少东西，
我带的学生现在都保持联系。
我个人的经验是
安静的学生更靠谱。
一般我会大概讲一下实验的原理，不用很深。从最简单的配胶跑胶开始，写好protocol
让学生拿着 第一遍你做他/她看，让他/她自己在protocol上做personal的notes，第二
遍让学生跟着打下手， 第三遍学生按照自己记录的protocol做，你跟着看，有错漏的
地方你纠正，然后后面就可以放手让学生自己做了，有问题来问你。
这样一个礼拜就知道学生能不能帮着做实验。 如果可以的话就带着做，慢慢的发展到
养细胞等其他实验。不行的话就只能随便给点简单的dry lab的看看。
另外可以让学生准备slides。
绝对绝对绝对不要让他们自己算溶液浓度， 你算好了 写好recipe给他们， 不管是华
裔还是一般美国学生， 都不行，好点的要算半天，差点的算来算去都是错的。 |
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m*******3
发帖数: 25 | 32
效果如何，扫胶不用特殊仪器吧？国内很多实验室用goldview，听说这玩意儿也不靠谱
，主要成分是丫啶橙。 |
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S**********e
发帖数: 620 | 33 那么多实验室都那么呆跟着重复不出来的protocol做啊？
各种条件都识得差不多了，摸了一百个条件的不占少数，一块胶跑到十个样，石块胶对
千老家常便饭 |
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h******i
发帖数: 21077 | 34 没看内容。
光看题目了，不知道你跑啥，跑胶的可能性大些。 |
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g******t
发帖数: 11249 | 36 再好的小姐妹也跑去陪自己家人了
想约谁，平时把人据的那么绝，谁还会有好心情搭理
只能去lab继续杀鼠跑胶已解寂寞
心气不好使必然的 |
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发帖数: 1 | 37 说我training她跑胶跑柱子跑流式细胞仪很helpful。
其实我还有很多东西想training她的。
可惜她不愿意学。 |
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T*I
发帖数: 765 | 38 他们的贪二代小崽子们在马路上跑超跑
谁他妈的对社会贡献大，这不是明摆着的么
凭啥小刘贪二代开豪车，曝光他们老爹！ 让他们把牢底坐穿！ |
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发帖数: 1 | 39 凡是有以下技能的人都无所谓，
1。杀耗子
2。跑胶
3。开电镜
4。算账
6。码码
7。解机米多围棋
其他自己看着办。 |
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D*****i
发帖数: 1486 | 40 眼睛亮与否是跟光线入射角度有关吧
这张可能是跑焦了，或者马动导致糊了一点，图太小，无法确定
BTW，输入paojiao，谷歌拼音里排第一位的是跑胶，跑焦排第四......唉 |
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m****m
发帖数: 395 | 41 最近提纯一个HIS-TAG的蛋白，试了很久就是不是一条带，一直以为是杂带没有清除，
后来感觉不对劲，好像就是它本身。但是很奇怪，如果是这个蛋白的二聚体、三聚体等
，应该是跑在整数倍的线上啊，但是不是，可这些条带又是线性有规则地排开的。还有
，有时候同一条带上的一条蛋白会分裂，就是靠得非常近，但是仔细看是分裂的。有谁
能帮我解释一下为什么会跑出这种胶的结果来吗？同一个蛋白构象不同，条带也会不在
一个地方吗？ |
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m******5
发帖数: 1383 | 42 我在普通 Agar胶上跑带型很不好看
而且下面有大量smear
但在agilent的nano chip上跑得到的结果死quality极好，28,18s信号很sharp |
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C*******e
发帖数: 4348 | 43 意思是酸性条件下跑Agarose胶？
为什么一定要酸性条件呢？
如果是因为电泳方向相反或者不确定
把加样孔放中间，随便往哪里跑，不好么 |
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f********y
发帖数: 394 | 44 不是跑Agarose胶，是跑蛋白-DNA复合物，因为该蛋白只在酸性条件下有结合DNA的能力
。。。 |
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c******l
发帖数: 3972 | 48 好像是高级一点的操场有塑胶跑道，在塑胶跑道上跑比煤渣跑道舒服多了。 |
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