q********0
发帖数: 92 | 1 某刺激都会促使A蛋白表达增加，在刺激后，我用普通免疫荧光观察A蛋白，和GFP-A蛋
白转基因小鼠比，是不是GFP-A蛋白转基因鼠更容易观察到A蛋白的表达？ |
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l**d
发帖数: 472 | 2 这段话
“可是实际转基因的植物和野生植物普通植物的区别不仅是基因和蛋白层次，也包括受
到它们直接间接影响的小分子代谢途径等等。现在的科技能发现的区别是很有限的，长
期食用的危害就更难发现。从某种意义说，第一个吃转基因大米的人需要和第一个吃螃
蟹的人一样勇敢。”
完全适用于任何一种育种方式，例如杂交育种、辐射育种等，产生的新品种（包括动物
和植物）。按这种逻辑，吃袁隆平的杂交大米也要一样的勇气。
其实，只要繁殖过程中有受精过程，雌雄个体不是完全纯合的话，产生的子代多少有些
新的性状，按上段话的逻辑，吃这样子代食品也要一样的勇气。
就算基因型完全一样的品种，生长环境不一样也能导致基因表达的变化，不同个体之间
“不仅是基因和蛋白层次，也包括受到它们直接间接影响的小分子代谢途径等等。现在
的科技能发现的区别是很有限的，长期食用的危害就更难发现。”
各种食用动植物，有各类病毒、细菌在个体间转移，个体内部还有转座子在移动，这些
都能导致“基因和蛋白层次[的变化]，也包括受到它们直接间接影响的小分子代谢途径
等等。现在的科技能发现的区别是很有限的，长期食用的危害就更难发现。”
以前没有接触过的品种呢... 阅读全帖 |
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q***7
发帖数: 144 | 3 如果你是做蛋白表达纯化出身的，你就知道做融合蛋白时，一般都会把后面那个基因
ATG去掉。你可以不叫他错误，但是有时候你回得到多个表达蛋白。
关于Stop codon，你可以在GOOGLE里搜索一下，真核生物（例如人）和原核生物（如E.
coli)的密码子使用频率表，你会发现他们对终止密码子，不是只用一个，而是机率不
同。只放一个终止密码子有时会造成通读，你蛋白表达纯化是有时看到比你预测的大的
蛋白有时就是通读造成的。
有什么问题欢迎提问，谢谢 |
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e****s
发帖数: 1125 | 4 1. overexpress 和endogenous 蛋白分布可能会有差异；
2. 很可能是你的目标蛋白或者目标蛋白的Binding partner(s)的病人细胞中产生突变
了。
我会先看看文献有没有对这个蛋白distribution有重要作用的结合蛋白；
完全没idea的话，IP然后打质谱比较吧。 |
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e********r
发帖数: 147 | 5 大家都知道，现在的genomic annotation对细胞内蛋白的翻译起始位点是“猜”的。对
于细菌基因组来说，ATG, GTG, CTG和TTG都有可能是起始位点。一般的分析倒也没必要
把这个事搞得很清楚。
但现在我们的项目需要先确定一个具体蛋白究竟是从哪儿开始翻译的。目前我们利用的
方法是用抗体去拽这个蛋白，希望富集到足够的量以后，通过N-terminal测序来确定。
然而这个蛋白的表达量很低，搞了多次还是拿不到足够的蛋白用于测序。那么现在问题
来了：大家还有更好的策略不？谢谢！ |
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s*********y
发帖数: 292 | 6 我在做一个蛋白，目前只有一个能用的蛋白抗体，能做western，无法IP或者IF。在老
板的建议下，我用CRISPR在我做的那个基因的后面加了3XFLAG tag。拿到这个内源
3XFLAG的细胞之后，用sigma m2抗体做western，可以杂到非常弱的条带（跟蛋白的抗
体差10倍左右）；m2的beads可以做IP。qPCR的话，跟actin比，大概差了七八个循环。
我感觉就是我这个蛋白表达量太低了。而且FLAG抗体也没想象中的那么好，只不过大家
一直用它做过表达，所检测的蛋白浓度高所以感觉很好而已。
现在的问题是，用FLAG抗体去做immunofluorescence，基本没有信号。抗体加浓了，
control的细胞（无任何内源的FLAG）也能染上。请问这种情况应该怎么处理？ |
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M*****2
发帖数: 379 | 7 如果蛋白保存不当，或者－80存放时间较长，会降解
是否高分子量的蛋白更易降解呢？ 还是和不同蛋白有关？
发现130Kd的2个蛋白都测不出，很多杂带，但是65kd 和20kd的都还可以测到
抗体肯定是work的很好，之前这2个大分子的蛋白也测到过的
谢谢 |
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f**u
发帖数: 346 | 8 还是有区别的。
楼主的目的是拿到promoter上结合的其他蛋白，这些蛋白跟他的蛋白A未必直接结合，
如果没有DNA在，这样的蛋白就会丢掉。
另外，有时候两个蛋白只有结合在DNA上的时候才有相互作用。
target
白/ |
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K******S
发帖数: 10109 | 9 ：（
我取这个名字的时候还不知道质谱是什么东西呢，巧合而已
dynamic range， 蛋白的氨基酸序列和离子化的效率是proteomics里永恒的主题，
不过一般来说MALDI需要50-100 fmole左右，LCMSMS 5-10 fmole左右应该可以比较精确
的签订蛋白了，而且现在的仪器都是high resolution的，蛋白鉴定不需要很多的肽段
，有几个高质量的就可以了
我们和生物实验室合作最大的问题是其实生物实验室里由于做和抗体有关的试验，比如
WB比较多，所以平时不太注意样品的洁净度，90%的时候样品里都有很多的角蛋白污染
。很不幸的是质谱非常灵敏而角蛋白离子化很好 |
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f**u
发帖数: 346 | 10 样品不纯这个问题在我这个生物出身的人看来太正常了。
因为IP一类的技术本身就很脏，能拉下来太多乱七八糟东西了，这个没办法。
无论你使用DNA，蛋白还是小分子作probe，
都会拉下几百上千个蛋白，大部分都是非特异的。
我见过几篇做得漂亮的功能类文章，
一般是已知一个东西在某个信号或者生物现象里面很重要，
然后用它作为probe去做IP，在IP下来的东西里面用质谱鉴定发现一个蛋白，
然后用一系列功能试验证明这个新蛋白也在同一个信号或生物现象里有重要作用。
这样的研究几乎无一例外都是IP玩了以后跑SDS-PAGE然后切胶用MALDI，
我猜可能的原因是这样做一般只拿到20个左右的主要hit，
后期功能验证就可行了。
我只在一个大会上听说过有一个人用了LCMSMS，
虽然样品量小了很多，但是拿到两百个以上的hit，
这里面大部分都是垃圾，所以功能验证很是问题。
我猜这个可能是为什么寻找新功能性蛋白的人还是喜欢MALDI，
虽然拿到那么多样品有时候很头疼。 |
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n******e
发帖数: 110 | 11 研究一个蛋白在正常组织和癌症组织的表达量。找公司买的病人匹配的样品。问题来了
，总的上样蛋白量根据公司的浓度是一样的，考马斯染显示两个样品不同条带的浓度都
不一样，但总量估计是差不多，符合公司的标量。但是用actin做，正常样品估计只有
肿瘤样品actin的十分之一。问题来了，怎么比较这个蛋白的含量？
很多文献里都用一个house keeping基因的蛋白做loading control。我可以用蛋白总量
做control吗？被接受程度都差不多？
谢谢！ |
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n******e
发帖数: 110 | 12 研究一个蛋白在正常组织和癌症组织的表达量。找公司买的病人匹配的样品。问题来了
，总的上样蛋白量根据公司的浓度是一样的，考马斯染显示两个样品不同条带的浓度都
不一样，但总量估计是差不多，符合公司的标量。但是用actin做，正常样品估计只有
肿瘤样品actin的十分之一。问题来了，怎么比较这个蛋白的含量？
很多文献里都用一个house keeping基因的蛋白做loading control。我可以用蛋白总量
做control吗？被接受程度都差不多？
谢谢！ |
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v********e
发帖数: 1597 | 13 首先蛋白表达纯化是个体力活，结晶有时候需要数十毫克级别的高纯度蛋白，运气好能
表达量高，下面就是纯化，纯化无非各种层析，各种柱子尝试一遍，然后非native状态
纯化的蛋白还需要折叠复性，最后结晶，更是规律性比较低，要优化各种条件长结晶，
以至于有了优化条件的机器人，说明本身就是机械简单重复劳动。每次的成功对下一次
目标蛋白指导意义十分有限。
其次，更苦逼的是做结晶的几乎都是跟屁虫，为什么要做什么蛋白，主动权根本不在做
结晶的人手里，都是跟在别人后面，别人比如陈志坚发现cGAS更功能和重要性，做结晶
的就一窝蜂扑上去，这时候老板的地位和消息就显得特别重要，如果能跟陈志坚这样的
牛人搭上关系，就能先人一步。但是大部分组都是盯着CNS，准备大干快上，在这种情
况下，拼的就是资源和运气
最后，解析方法，几乎都是国外的设计的算法，自己利用别人发展的软件把衍射信息构
建成3D结构，这种工作对方法和算法毫无贡献，好比别人造把刀，有人拿去切菜砍骨头
一样，牛的还是打造好刀的人
这也是为什么，许多做生物的人多结构CNS的文章不太觉得有份量的原因，这些结晶除
了回答了一些先前的疑惑，对未来的研究指导价值... 阅读全帖 |
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e****s
发帖数: 1125 | 14 你要真了解化工、仪分，就知道，将这些技术应用在蛋白上，是巨大的挑战。
你要不在蛋白领域做上若干年，搞上N个蛋白，还是不要随便想当然了。
了解蛋白结构和功能是目标，并不如分析之类的，以开发新方法为主。要说新方法，这
些年，做蛋白的新方法也多了去了。表达、纯化、固定化等等就不说了。很多检测，蛋
白都不能直接用的，需要修饰、标记、增加相互作用，等等。 |
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E*********4
发帖数: 16 | 15 知道本版的牛人非常多，全部大隐隐于市。希望各位大神能帮忙指出mammalian Hela
lentivirus expression的问题。我们试图把一个蛋白从pCMV2-N terminal-Flag
vector上面subclone到另一个lentivirus vector上，然后在Hela里面建立over-
expression stable cell line。用的是psPAX2 and pMD2G在293T里面包装病毒（在
293T里面可以检测到蛋白表达）。问题是empty vector很顺利，但是我们的蛋白没有办
法产生病毒，或者说产生的病毒没有办法感染Hela细胞。我尝试过三种不同的
lentivirus expression vectors，同样的结果。后来怀疑是不是我的蛋白对细胞有毒
性，于是又尝试了另外一个安全无害的蛋白，还是同样的结果。现在我怀疑是不是在做
subcloning的时候，缺了或者多了什么部件？插入的位点是在multiple cloning sites
. 我的insert只包括N Flag-Protein of interest，没有polyA ta... 阅读全帖 |
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m****m
发帖数: 395 | 16 求审稿机会，膜蛋白、不可溶性蛋白、可溶性蛋白，X射线晶体衍射、核磁共振，结构
生物学、蛋白结构与功能、蛋白表达和纯化技术
站内联系，多谢！！
邮箱： [email protected]/* */ |
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a********e
发帖数: 3771 | 17 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: andyzzdlee (麦地之一看二慢三通过), 信区: Biology
标 题: western提蛋白的困惑：多次离心vortex会不会降解蛋白
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jan 20 23:38:17 2010, 美东)
最近一次做western，用NEPER kit提取胞浆里的ERK和p38蛋白。因为用划伤组织做刺激
，脱落不少细胞，我就把medium离心得到这些脱落的细胞。同时在培养皿里加冰PBS，
在冰PBS里刮下剩余的细胞放进脱落的细胞里再次离心。然后用kit里CER lysis buffer
裂解（已加入inhibitor cocktail）。
裂解的时候我vortex两次，每次15sec。NEPER protocol要求vortext一次，15sec即可。
结果照片洗出来什么都没有，连EGF刺激的positive control都没出来。
以前只用过一次NEPER，erk出来band，而且结果可信。不同点在于没有收集脱落的细胞。
所以我考虑是不是多次离心、vortex是蛋白降解，也可能是收集脱落细 |
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m****g
发帖数: 530 | 18 10纳米能产生什么差异？当这个问题出现在蛋白质功能研究上，这种细微的差别意味着
科学家能否分辨蛋白质中各个原子
以及了解这些原子是如何相互作用。
最近美国能源部Brookhaven国家实验室的研究人员通过提高分辨率的方法成功破译了锌
转运体蛋白(zinc transporter
protein)的结构。这项新发现发表在9月13日《Nature Structural & Molecular
Biology》杂志网络版上。该发现不但意味
着发现了锌元素调节药物的作用靶点，或许还能加深对植物叶绿体中类似于锌调节酶的
其他酶类的了解。
研究人员在Brookhaven实验室的国家同步加速器光源(National Synchrotron Light
Source, NSLS)利用x-射线晶体学不
但看到了该蛋白质的结构，还观察到该蛋白质结合并转运锌离子的过程。
此外，研究人员还利用荧光探针研究了该蛋白与锌离子结合时相应的形状改变，并测试
了锌转运体蛋白形状改变对锌离子
转运能力产生的影响。试验发现，锌离子转运有一种自动调节机制：锌离子结合到细胞
后，引发细胞内部的锌转运体蛋白
的两个电性相斥的蛋白 |
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发帖数: 1 | 19 尼玛，最后还得中科院上，对不对？
2月15日下午，国务院联防联控机制于北京召开新闻发布会，介绍药物研发和科研攻关
最新进展情况。会议上介绍称，在疫苗研发方面，我国已经开展了灭活疫苗、核酸疫苗
、重组疫苗等多条技术路线的研发。
科技部生物中心主任张新民指出，党中央高度重视新冠肺炎疫苗的研发工作，科研攻关
组成立伊始，就将疫苗的研发作为重中之重的主攻方向，组织了全国优势单位进行联合
攻关，加速推进疫苗研发。由于新冠病毒是一个新病原体，疫苗研发难度比较大、周期
比较长。为确保尽早研发成功，在科研攻关应急项目中我们并行安排了多条技术路线，
包括灭活疫苗、mRNA疫苗、重组蛋白疫苗、病毒载体疫苗、DNA疫苗等并行推进，切实
保障成功率。同时在联防联控机制下，积极协调多个部门给予疫苗研发团队全方位的保
障和支持，使研发工作进度更加紧凑、更加高效。
中科院微生物所研究员严景华在会上介绍，疫苗研发有很多策略，各种疫苗有各自的特
点、优点和缺点，它们都是相辅相成的。我们单位是科学院团队，我们承担的工作是重
组的蛋白疫苗。重组蛋白疫苗是把一个病原体最有效的抗原成份基因拿出来，进行体外
重组，表达蛋白，然后... 阅读全帖 |
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l******e
发帖数: 2893 | 20 好多人问自己的戚风为什么不发，俺觉得就是蛋白没打好。制作戚风一般蛋白要打到9
分发，即所谓的“干性发泡”，就是提起打蛋器出现图一那样的尖峰，倒扣盆蛋白不落
下（如图2）。
还有一条就是搅拌的时候一定要切拌，动作要轻，以免消泡。
俺今天给ld做生日蛋糕特意拍下蛋白打发的图，给各位xdjm参考一下，祝大家试验成功
哈。 |
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l******e
发帖数: 2893 | 21
我每次都是鸡蛋放室温，然后蛋白蛋黄分离，蛋白中加入几滴白醋，然后上6档高速直
接打，出现大泡加
1/3糖，均匀之后再1/3，再均匀之后再1/3。记得打蛋器头要尽量接触蛋白，这样空气
才能进入蛋白。
还有不要把打蛋头立在那，要不停的画圈。这个方法从没失败过。给你我打好的干性发
泡的图。出现短
尖峰，倒扣盆不滑落。还有我打到这种程度最多5分钟。 |
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j*****i
发帖数: 1292 | 22 做了蛋塔，剩下很多蛋白。我朋友建议我做轻乳酪蛋糕。
但我搜了个方子人家还是有蛋黄的。
求只用蛋白做的甜点。或者有什么菜可以只使用蛋白？
炒蛋白什么的就不要建议了。 |
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s********8
发帖数: 18 | 23 蛋白表达服务/蛋白质工程项目经理
岗位职责：
1.从事蛋白表达服务和蛋白质工程相关业务，负责蛋白业务的销售和市场开发，开拓.
发展和维护海外客户；
2.为客户提供产品. 技术. 咨询等服务；
3.负责项目跟踪和技术支持。
职位要求：
1. 本科以上学历，熟悉蛋白质表达纯化. 蛋白发酵工艺流程及技术；
2. 具备扎实的理论基础；思路清晰，有一定的开拓创新能力；能够独立设计与开展相
关研究项目；
3. 工作认真负责，有敬业精神和团队协作精神，具有一定的抗压能力；
4. 熟悉行业海外市场状况，有海外市场开拓或海外市场销售经验优先；
5. 英语六级水平以上，能够熟练进行英语交流和报告写作，能以英语作为工作语言与
国外客户进行无障碍交流；
6. 具备较强的客户开发能力，具有出色的谈判能力. 说服力，亲和力强，善于与不同
国家与地域的客户沟通，有工作责任心和服务意识。
安必奇生物科技有限公司是一家新兴的生物产品研发服务的公司，成立于2005年，总部
Creative Dynamics 位于美国纽约州，是一家创新型企业。公司依托深厚的国际
资源背景、经验丰富的留美科研人员致力于生物产品和化... 阅读全帖 |
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e*********0
发帖数: 79 | 24 蛋白表达服务/蛋白质工程项目负责人员
岗位职责：
1.从事蛋白表达服务和蛋白质工程相关业务，负责蛋白业务的销售和市场开发，开拓.
发展和维护海外客户；
2.为客户提供产品. 技术. 咨询等服务；
3.负责项目跟踪和技术支持。
职位要求：
1. 本科以上学历，熟悉蛋白质表达纯化. 蛋白发酵工艺流程及技术；
2. 具备扎实的理论基础；思路清晰，有一定的开拓创新能力；能够独立设计与开展相
关研究项目；
3. 工作认真负责，有敬业精神和团队协作精神，具有一定的抗压能力；
4. 熟悉行业海外市场状况，有海外市场开拓或海外市场销售经验优先；
5. 英语六级水平以上，能够熟练进行英语交流和报告写作，能以英语作为工作语言与
国外客户进行无障碍交流；
6. 具备较强的客户开发能力，具有出色的谈判能力. 说服力，亲和力强，善于与不同
国家与地域的客户沟通，有工作责任心和服务意识。
北京安必奇生物科技有限公司是由一批资深留学归国人员创办的抗体研发服务公司。公
司依托深厚的国际资源背景、经验丰富的留美科研人员致力于优质抗体研发服务。公司
现有服务内容主要包括应用杂交瘤技术生产单克隆抗体、利用噬菌体展示技术筛选... 阅读全帖 |
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c******s
发帖数: 48 | 25 爸爸因为腿肿去医院检查，排除了肾，静脉血栓，检查了小便，照了腿部血管。 同时
也查出血液蛋白量过低，但是不认为是腿肿的原因，后来认为是心脏的问题，吃了利尿
剂以后消肿了。
我爸爸几年前做过胃淋巴癌胃部分切除手术，放疗过，手术之前就有血液蛋白量过低的
问题。手术后有吃东西很困难，所以营养跟不上，体重减了一半。 之后又装了心脏起
搏器，有心颤和心衰。
这次查出血液蛋白量过低，医生只说回家吃好点，但是我觉得可能情况更严重，请懂行
的jm帮忙看看蛋白比例是不是只是缺乏营养造成的。 静脉血检查结果和血清 |
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b******j
发帖数: 174 | 26 我觉得血压一直还好，孕前没有高血压的，不过我爸爸有高血压，怀孕期间一直保持
120多，70多，这个我觉得当初OB要是提醒我注意血压就好了，我不知道高血压会这么
严重能影响怀孕，32周我发现羊水少，一直在家猛喝水，B超说孩子size小，我就在家
猛喝荤汤，36周去产检血压高，应该高到140以上了，低压在90多，这是第二次量的，
第一次量护士不告诉我，估计更高，OB很紧张让我直接入院测尿蛋白了，入院当天宫缩
频繁，都开指了，直接让我上产房待着了。估计那会身体handle不了了，不过后来入院
休息后，血压正常了，主要是尿蛋白高，不知道是什么单位的，700，应该比较危险的
，是子痫前期，OB让我催产顺产，但是催产素刚上，孩子心跳就下降了，医生吓得紧急
剖了，我很后悔当初没有直接要求一定剖，否则孩子就不会在子宫里窘迫了，唉。MM不
用太担心，单纯血压高还不是很危险，你多卧床，主要是不能有尿蛋白。对了，我住院
期间一直没有用药物控制的，就是休息，不断地监测我和孩子。你平时在家一定要休息
好，如果感觉头疼，晕，一定要打电话给ob，我在常规产检前几天就觉得头晕，躺在床
上看天花板都在转的感觉，后来说这... 阅读全帖 |
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Y*****1
发帖数: 11 | 27 18岁，2014年2月2日发现面部浮肿入院，入院时体。重87公斤，（正常体重75左右）尿
蛋白3加，白蛋白19,肝功、肾功基本正常，肌酐正常值。肾穿结果：肾小球轻微病变（
轻度系膜增生）。重医住院一月，每天静脉用铀旋糖酐和速尿，水肿消失，体重降至73
公斤， 甲强龙80毫克，尿蛋白始终未降下来。3月11日出院回家服药治疗，口服甲强龙
（美卓乐）14颗，3月28日复诊因水肿再次入院，体重78.5公斤，尿蛋白4加，白蛋白17
。服甲强龙（美卓乐）12颗，加服他克莫司早晚各3颗。
主要是尿蛋白降来不下，白蛋白升不起来。
有没有知道这方面情况的 不胜感激！ |
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s*8
发帖数: 1933 | 28 胶原蛋白难道不是最没有营养价值的蛋白质么？买了有什么用处，如果你真想吃那玩意
，买块猪皮吃，大部分就是胶原蛋白。
如果你是想美容，那绝对是没有任何用处的。就好象吃猪胰脏不可能治疗糖尿病一样，
吃胶原蛋白或者敷胶原蛋白不可能改变你的皮肤。 |
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n**e
发帖数: 2026 | 29 既然你能平心静气讨论具体问题我们可谈。
首先我没有比较两者消化吸收蛋白的能力。第二段说能够满足动物需要（包括日常和竞
技需要），第三段说按照nile自己的经历蛋白够用了，（当然有奶和蛋）。而且我说明
了是健身运动非竞技运动。
第二，不管是人是马都不能完全吸收食物中的蛋白。两者相差多少需要去查证定量研究
的文献。同意你说的动物比人厉害。
第三，吸收蛋白的部位是肠道，而非胃。这点我们也没有分歧。 |
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n**e
发帖数: 2026 | 30 先纠正你的提法，人不吃草，所以马与人比应该比从植物性食物蛋白消化吸收率,不是
比马吃草与人吃草。nile查了一下数据。人与马从植物性食品中吸收蛋白比率是相近的
。人对整粒大豆的蛋白消化吸收率為60%，做成豆腐、豆漿後可提高到90%;米飯為82%。
马能消化玉米蛋白质的76% 。
补充一点，刚刚知道的，马不能吃很多豆子，但吃玉米没问题所以用玉米计算是比较实
际而且科学的。
nile的结论是：你多次表示动物从植物中吸收蛋白的能力远远高于人，这不是事实。因
此你建立在这一虚假论据上的所有观点都自动失效。
这就是nile所说的什么是理性辩论。
草食动物从草里面获得蛋白质的能力是人不能比拟的
以草食动物获取蛋白质的方式来类比人类不太合适，消化功能不一样... 马吃草就能获
得足够的蛋白质，不等于人吃草也能获得足够的蛋白质。 |
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n**e
发帖数: 2026 | 31 我没有说合成蛋白的问题，更没有提牛羊兔子。文章中说的是马。这里辩论的是人与马
对植物蛋白吸收是可比还是不可比。
这里谈论的是素食中的蛋白是否够用。引申论题是人与马对植物蛋白吸收是否可比。如
果你有能力出示证据就拿出来。没有就请不要东拉西扯。 |
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a**********r
发帖数: 264 | 32 要补充胶原蛋白就买纯的胶原蛋白，
美国药店都有卖，GNC的就很好，costco也有卖很大一瓶20刀不到。
fancl这个是口服液，不是纯胶原蛋白，加了很多添加剂的，据说有雌激素。
很多人喝了得乳腺增生（网上看看就知道了，很多案例）。
因为胶原蛋白本身没这些副作用，只是蛋白质而已，
说fancl效果特别好，还不是因为其他的未知的添加物的作用。 |
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s**********8
发帖数: 1721 | 33 3.胶原蛋白的生产技术水平属于尖端科技吗？国内国外有多少差距？
胶原蛋白的生产加工，有一定的技术含量，但不是像许多厂家比如某小日本
品牌，宣传的那么神乎其神。从技术角度，他就是蛋白质的酶解反应，而这个科目，是
生物专业的在校本科生都要掌握的基础内容。即他不是特别尖端的生物科技。
但是大家也别误会了，认为随便一个工厂就可以加工了，甚至在家里的厨房
里也可以鼓捣出小分子胶原，这就走极端了。
小分子胶原的生产加工，对工厂卫生条件、酶解反应控制、过滤纯化、喷雾
干燥等各个环节都有很严格的要求，只是国内目前的技术水平可以喝国外抗衡了。
因此，您大可不必多话冤枉钱，非国外品牌不用，说不定他们的原料及工艺
环节还不如国内呢~~
4.胶原蛋白产品价格多少合适呢?是不是越贵的代表品质越高级呢？
我可以很负责人的说，作为最终消费者的您，所购产品无论是口服液还是粉
体或是片剂、胶囊，按照产品标签上所注胶原蛋白的有效含量做分母，购买价格做分子
，相除后的结果如果大于1元/克，您购买的是暴利产品，您被精明的厂家忽悠了。
也许有的网友说，您是不是有点过于绝对了啊，厂家要投入广告成本，有宣
传费用，那我充分考虑之，... 阅读全帖 |
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s**********8
发帖数: 1721 | 34 11.请问外用胶原蛋白的化妆品有没有效果啊？
皮肤外部涂抹小分子的胶原蛋白，对护肤是有效的。
<1>当初我们用分子量小于1000D的胶原原液，委托卫生部化妆品技术委员
会专家、空军总医院皮肤科主任刘伟教授做外用胶原与护肤效果方面关系的实验，得出
的结论是：小分子的胶原蛋白对促进皮肤成纤维细胞生长有显著效果。
<2>小分子胶原添加量在8%~10%配成的化妆品，委托北京工商大学化妆品
功能评测实验室所做检测，结论：祛皱效果明显。
<3>我们自己的胶原做成的护肤品，感觉在嫩肤美白等方面都有不错的效
果。一些朋友用过胶原的面膜后感觉皮肤水嫩了、弹性增强了等等
总之，外敷小分子胶原蛋白，在护肤方面是有一定效果的，甚至比较明显
，比如用胶原原液或面膜。 |
|
r*********n
发帖数: 13992 | 35 ☆─────────────────────────────────────☆
Cynric (噢侧那) 于 (Sun Sep 23 23:38:43 2012, 美东) 提到:
国内有个亲戚说要胶原蛋白
20出头的小姑娘 保养皮肤用
买哪个 求推荐
只有3包子
☆─────────────────────────────────────☆
anoia (high estrogen man) 于 (Sun Sep 23 23:39:29 2012, 美东) 提到:
告诉她人体没有能代谢消化胶原蛋白的酶，只能有助于制造胶原蛋白shit
☆─────────────────────────────────────☆
takumar (Takumar) 于 (Sun Sep 23 23:41:37 2012, 美东) 提到:
不许人天赋异秉？
☆─────────────────────────────────────☆
Cynric (噢侧那) 于 (Sun Sep 23 23:42:59 2012, 美东) 提到:
那小姑娘要保养皮肤给买点什么好
... 阅读全帖 |
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T***i
发帖数: 1354 | 36 【 以下文字转载自 Fashion 讨论区 】
发信人: Tippi (Tippi), 信区: Fashion
标 题: 做了个Keretin treatment巴西角蛋白直发
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jul 3 23:16:18 2011, 美东)
趁着这几天放假，去理了理头发。在YELP上找了个好评如潮，离家又近的沙龙。
和stylist说修个刘海好了，再做个简单的regular perm,没想到这个理发师她人很好，
十分热心，和偶说，传统的负离子拉直太假不推荐，我所说的简单拉直RELAXIN是化学
药剂，价格虽然便宜，也可以拉直但是不滑不亮，而且蛮伤头发的。最后她建议我做角
蛋白拉直，原理就是把头发表面裹层膜，再STRAINGHT,那样看起来很自然，且持续三四
个月，也是目前最不伤头发的拉直。
后来我就做了她所说的那个Keretin拉直，没想到做完以后效果很好，整体发量看上去
没有减少，不会像负离子那样贴着脸，有些呆。Keretin做完后发丝是根根分明的，有
一种很飘逸的效果。
和传统拉直一样，做完这个两天不要洗头，不要绑发带。
在网上看到一些关于巴西角蛋白直... 阅读全帖 |
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I*****a
发帖数: 5425 | 37 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: coinbycoin (eagles), 信区: Biology
标 题: 谈谈和蛋白打交道的日子 （四）小保方晴子的难题 – Being A Star
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Mar 18 19:45:57 2014, 美东)
谈谈和蛋白打交道的日子 （四）
第四篇 小保方晴子的难题 – Being A Star
“Who’s the star?”
那个晚上，问这个问题的是教这门课程的1st Year Assistant Professor,年轻气盛。
我们几个TA一边狼吞虎咽他给我们提供的泰国店外卖，一边grade生物化学课程的期末
考卷。
“So who’s the star？”见我们没有回答，他又问了一遍，“Is it (so-and-so)?”
确实是（so-and-so）。当时我有些震动，Star是我的一个好朋友，而我相当于是评委
，突然切身感应到了“Star”的分量。
“Star”在天上的时候，是人人仰望的。Star带来的名利的诱惑不可小视。名利面前，
人人平等， 而平等的下面就是底线了， 那就是... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 38 你的方法没有问题，大部分实验室都这么做的。但是我不建议你和老板顶牛，你最好是
要分清矛盾的主次，不要为了这种小事情和他翻脸。
用RIPA buffer 并不能保证所有蛋白都溶解，而且里面的detergent 会干扰
Bradford protein assay,这个在大部分bradford assay的技术说明书里会提到。
你可以拿一个已知浓度的蛋白(such as BSA)，一半溶在PBS, 一般溶在RIPA buffer,
然后做这个Bradford assay, 体会一下，
你会发现溶在RIPA buffer 里的蛋白的数值和PBS里的不一样，而且仪器上
读出来的数值不稳定，每次重复测量读出来的数值都大大的不同。
注意先不要告诉老板！先自己偷偷做一个，心里有数，然后再跟老板讨论，装作
谦虚的说你听说RIPA buffer 有这个问题，然后建议你们作这个实验，然后
再当面重新作一次给他看. 注意这个顺序不能颠倒！一定要自己先做一次，知道
结果了，然后才装着和他讨论装着你是第一次做这个实验。
千万千万不要直接第一次就作给他看！否则万一你们的蛋白有问题，
或者你们的UV spec 有问 |
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m****m
发帖数: 395 | 39 最近提纯一个HIS-TAG的蛋白，试了很久就是不是一条带，一直以为是杂带没有清除，
后来感觉不对劲，好像就是它本身。但是很奇怪，如果是这个蛋白的二聚体、三聚体等
，应该是跑在整数倍的线上啊，但是不是，可这些条带又是线性有规则地排开的。还有
，有时候同一条带上的一条蛋白会分裂，就是靠得非常近，但是仔细看是分裂的。有谁
能帮我解释一下为什么会跑出这种胶的结果来吗？同一个蛋白构象不同，条带也会不在
一个地方吗？ |
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m****m
发帖数: 395 | 40 想看看提纯后的蛋白里有没有杂蛋白，请问10孔12%的SDSPAGE胶，每孔应该上样多少ug
呢？
（我知道一个孔最多上20ul，这样的话我是把蛋白稀释一点成20ul后上样好呢？还是不
要太稀释上5-10ul就好了？）先告诉我上多少 UG 蛋白吧，目的是看纯度，是不是该多
上点，但是又不希望太多，难看又影响分辨率还不容易分开。谢谢指教！ |
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m****m
发帖数: 395 | 41 提纯蛋白后老发现14KD附近有条杂带，是不是lysozyme啊？我的蛋白有HISTAG的，难道lysozyme没被洗掉吗？按理lysozyme不应该结合Ni柱啊，难道lysozyme粘住我要的蛋白
了？大家说说有没有这种情况？
而我要的蛋白又恰恰在15KD上面一点，结果这两条带离得很近，很奇怪 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 42 要跑非变性蛋白电泳
我的蛋白比较bt，pI很高
不知道有没有人试过在pH值大于10 （pH>pI）的条件下跑蛋白PAGE胶啊
比如用CAPS做缓冲溶液之类的
如果有配方就更加感谢了！
（或者有没有可能在pH |
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m****m
发帖数: 395 | 43 用饱和硫酸铵沉淀了蛋白，完全去除上清液后，PELLET用BUFFER溶解，先用PIPET轻轻
把PELLET打碎成小碎片，然后在37C超声水槽里超声，最后还是有微小的蛋白碎片怎么
都不溶解，测了OD280=2左右，也不算很浓啊，这个浓度的时候这个蛋白一般都是溶解
的，测了PH也没有问题。请问该如何让蛋白完全溶解阿？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 44 这几种方法你都可以试一下。没有哪一个是肯定保险的。
至于说用concentrator会损失蛋白？这个可能是因为你没有选对大小合适
的滤膜。一般来说，滤膜的孔的标定尺寸应该比你的蛋白的真正尺寸小
三倍。比方说30K 的蛋白必须用小于10K MWCO的膜，否则蛋白有可能漏过去。
另外，在dialysis 的时候，你可以在外面的溶液里也放上detergent 啊，
我不明白这个为什么会是问题。而且，一般来说，detergent 在溶液里
会形成微团，所以不会容易的透过滤膜
dialysis,
later
which |
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a****k
发帖数: 1130 | 45 偶来补充自己的看法吧：透析不是必须的，只要imidazole不影响activity就好。一般
不用再加protease inhibitor，因为细胞裂解的时候不是已经加过了吗。不建议加EDTA
，不知道lz是要做什么activity assay，很有可能这个蛋白本身自己就是需要镁离子的。
glycerol，对于一般的蛋白我们都是加10%，然后分装后用液氮冻完存在－80度。但是
碰到很不好保存的蛋白，比如冻了一两个月就没有activity的，把glycerol加到20％会
有帮助。
DTT或者beta mecapitalmethanol,保持溶液的还原状态，视情况而定。
存也会失活，那就需要找到合适的buffer，或者每次都用fresh made的蛋白 |
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h**********d
发帖数: 30 | 46 funtional,但是当然是比WT还原氧气的活性要低，每次得到蛋白，我会从光谱看SORET+
ALPHA
BAND，用PAGE看4个亚基，用HPLC测醌和HEME的比例，最后ICP-OES表征一遍蛋白的铜和
铁含量，
应该都是正常FOLDING的蛋白，CW-EPR,RAMAN光谱的数据也都会告诉我蛋白是否正常。
烦请前辈能告知一下PET质粒的浓度在MINI PREP后多少为宜呢？比如5ML的OVERNITE
CULTURE，按
照我的经历，这个双质粒体系两个在一起如果用50微升洗脱，质粒总浓度在50到100ng/
uL之间，
而且每次PET都比PAC的条带看起来更亮一些。
多谢了
luck |
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T**********t
发帖数: 1604 | 47 Superdex 200应该可以用来分离这个蛋白和它的aggregate。但是你光有柱子不够啊，
还得有FPLC系统，你还得会用FPLC。
收集蛋白峰不是看颜色的，是看它的紫外吸收。这么大的蛋白肯定有280nm的吸收峰的
，所以不用担心错过它。 |
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m*********s
发帖数: 1188 | 48 谢谢先.. 包子随后, 每人都有...
继续发问求答啊.
(1) 用什么池子来装溶液测吸收啊? 260nm, 只能用石英池子吧? 太贵了.
(2) Sephedex G-100 and Sephedex G-150. 这个是蛋白先下来还是蛋白聚合物先下来
啊? 如果柱子大概10cm才长的话, 蛋白band大概得有多宽啊? ~0.3cm?
100
column |
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s******s
发帖数: 13035 | 49 有比我更加作坊的么？三年前为了纯化一蛋白，我label上了
S35, 然后搞了几根1ml的针筒拉掉推杆，装的柱子成本大概一
刀一根。size selection放射性蛋白mix, 室温手动收集fraction，
跑胶，压膜一个礼拜找蛋白。 |
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c****y
发帖数: 14 | 50 请教各位大侠：
我想构建一个稳定细胞系，将质粒转染细胞并用抗生素筛选得到抗性12个细胞系，
但是Western blot检测不到蛋白表达。所以我又采用另一种策略构建，先将基因克隆到
Lentivirus vector上，用CMV promoter 启动目标基因表达，这个vector同时有EF1
promoter表达GFP, 重组质粒转染293T 细胞后制备lentivirus, 然后用Lentivirus感染
H1299细胞，再用GFP进行cell sorting得到稳定细胞系，在荧光显微镜下可以看到GFP
信号，所以这些细胞系应该是整合得有我的目标基因，但是，Western blot还是检测不
到蛋白表达。请问这是什么原因？另外，我瞬时转染这些质粒可以检测得到蛋白表达，
说明质粒正确。但为什么稳定细胞系检测不到蛋白表达呢？请问有什么可能的机制？谢
谢帮助！ |
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