a****y
发帖数: 1035 | 1 http://news.xinhuanet.com/newscenter/2003-11/28/content_1204671.htm
我国科学家成功解析SARS病毒蛋白酶三维结构
（2003-11-28 00:05:14） 来源：新华网
(来源：新华网)
新华网北京１１月２８日电 据即将于１２月１日出版的第４８期《瞭望》周刊报道
，中国科学家成功解析了ＳＡＲＳ冠状病毒主要蛋白酶的三维结构，这是世界上首次解析
出ＳＡＲＳ冠状病毒蛋白酶的晶体结构。ＳＡＲＳ病毒蛋白酶的解析成功，对于ＳＡＲＳ
的防治具有重要的意义。日前，美国
科学院报（ＰＮＡＳ）发表了这一成果的论文，并向国际媒体公布了这一消息。
今年初夏，ＳＡＲＳ疫情在中国暴发流行，清华大学饶子和研究组立即对ＳＡＲＳ病
毒进行了全力攻关，并在７月２日成功解析。
饶子和研究组在“华大”基因组中心从中国军事医学科学院发现的、编号为ＢＪ０１
的毒株中克隆了ＳＡＲＳ冠状病毒的主要蛋白酶的基因，并通过遗传工程的手段在大肠杆
菌中获得了蛋白酶的高效、稳定表达，经过进一步的分离、纯化和结晶，收集了高分辨率
的衍射数据，测定了 |
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Z******5
发帖数: 435 | 2 Xa因子 丝氨酸蛋白酶 在R之后
肠激酶 丝氨酸蛋白酶 在D-D-D-D-K-肽链中K之后
内肽酶Asp-N 金属蛋白酶 在D和半胱氨酸之前
热溶素 锌金属蛋白酶 在非极性残基之前
这个前后好像和你说的不一样。 |
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W*********n
发帖数: 775 | 3 想在一个无脊椎动物（和果蝇比较近）中研究一个信号通路上的蛋白酶（通过被磷酸化
起作用）的功能。在细胞水平和个体水平上研究。
1）过量表达蛋白，
２）抑制蛋白表达，包括SiRNA干扰，ds-RNA干扰，Mopholino阻断表达，或者negative
-dominant overexpression
由于蛋白酶需要磷酸化后起作用，而在信息传递过程被磷酸化的蛋白总是一小部分，觉
得即使蛋白水平上有一些变化，在磷酸化水平上变化也不大。那么用什么方法，能够更
容易看到变化呢？
请做过的朋友发表一下意见，那种方法比较好？ |
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e********r
发帖数: 147 | 4 我现在手里有1个含有PDZ domain的蛋白酶，参与信号转导，但不知道它的底物。我在
想能否用比较蛋白质组学的方法，用WT做负对照，用蛋白酶点突变失活的重组突变体做
样品，通过CoIP加MS来分析可能的底物。但据说这种方法可能拿到太多的假阳性，对后
面的功能验证挑战性很大，请问各位亲，还有木有更靠谱的筛选－鉴定策略，计将安出
？ |
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m****g
发帖数: 530 | 5 2009年9月1日，清华大学施一公教授团队在美国PNAS杂志发表了题为“Cleavage of
RseA by RseP requires a
carboxyl-terminal hydrophobic amino acid following DegS cleavage”的文
章。
细胞外环境变化会通过一系列的信号转导通路最终影响细胞内部的代谢水平，受控膜内
蛋白水解（Regulated
intramembrane proteolysis,RIP）是近年发现的一种调节膜蛋白内外信号传导的机制
。S2P是一种膜整合金属蛋白酶，其
底物也是膜蛋白。S2P切割膜底物，使之释放被细胞膜束缚住的信号分子，从而将信号
传导至细胞核中。但是令人费解的
是，S2P对底物的水解必须依赖另一种蛋白酶S1P对底物进行第一步切割之后才能发挥作
用，这其中的机理尚不明确。
施一公教授领导的清华团队在9月初的《美国科学院院刊》（PNAS）发表文章，通过生
物化学和结构生物学的手段对这一
问题进行了解答，发现底物被S1P水解后暴露出的C端氨基酸对S2P的活性的调节发挥了
重大的 |
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E**O
发帖数: 62 | 7 蛋白酶的确可以自我降解，这也是为什么trypsin之类的东西浓度不能太高的原因 |
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o****u
发帖数: 214 | 8 一般的商业性特异蛋白酶识别序列都是在酶切位点前方的。
比如Factor Xa是: xxxLEGR/xxxx
有没有人知道有什么酶具有酶切位点后方特异性的？
比如xxxx/LEU(某个序列)xxx |
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l**********1
发帖数: 5204 | 10 LZ can try long hairpin RNAi
Reference:
Tomimoto K et al. (2012)
Construction of a long hairpin RNA expression library using Cre recombinase.
J Biotechnol. 160: 129-39.
PubMed link:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22484114
发信人: Wanshington (Joudon), 信区: Biology
标 题: Re: 讨论：信号通路上的蛋白酶功能研究策略哪种好？
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Sep 28 03:33:37 2012, 美东)
RNAi不是有脱靶的问题吗？ 以前没有做过，所以对这个问题是否严重没有很好的把握
。这个蛋白的磷酸化位点不能突变成模拟磷酸化的蛋白，所以这条道路不通。 |
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O**W
发帖数: 58 | 11 以下无责任转载，请各位将军研判。本人非钱老不保证正确性
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宿主目前可以看到的比较接近的是蝙蝠和穿山甲。
但这两个宿主，其身上携带的病毒，跟这次出现在人类身上的，都有着不一样的地方。
根据SZL课题组于2020年2月3日发表在Nature上的文章（2020年1月23日，该文章发表在
预印本网站BioRxiv）指出，蝙蝠冠状病毒RaTG13 （Bat CoV RaTG13）和新冠病毒在全
基因组层面的序列相同度（sequence identity，也常被称作序列一致性，但不应称作
序列相似性）高达96%。
但在关键的刺突蛋白（图中简称S）上，却又是序列相同度最低的地方，特别是刺突的
受体结合区域（receptor binding domain，简称RBD）。
目前已知的病毒中，蝙蝠冠状病毒RaTG13（上图蓝线）和新冠病毒最近，全基因组层面
的序列相同度达96%。但在关键的刺突蛋白（S）的受体结合区域，序列相同度最低（~
90%）。上图横坐标是新冠病毒基因组核酸位点编号，纵坐标是核酸序列相同度，图片
来自石Zl课题... 阅读全帖 |
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t*****e
发帖数: 15794 | 12 汗！
我还真恍惚了，怀疑自己是不是记错了。
还跑去查了下。
嫩肉粉，又称松肉粉，这是一种能使动物性原料软嫩滑润，同时又不损伤肌纤维弹性的
佐助料，呈白色粉末状，为纯天然制品，它的主要成分是从番木瓜中提取的疏松剂木瓜
蛋白酶，它能将动物类原料结缔组织、肌纤维中的胶原蛋白及弹性蛋白适当分解，使部
分氨基酸之间的连接键发生断裂，从而破坏它们的分子结构，大大提高原料肉的嫩度，
并使其风味得到改善。
嫩肉粉营养分析：
嫩肉粉的功能性成分是蛋白酶，它可将肉中的弹性蛋白和胶原蛋白部分水解，使肉的口
感柔嫩、味道鲜美；同时，还能提高肉中蛋白质的转化及利用率，增加营养价值。
嫩肉粉补充信息：
1. 嫩肉粉中也含有一定的亚硝酸盐，使用嫩肉粉不宜过多，以免引起亚硝酸盐中毒；
2. 嫩肉粉并非适用于所有肉类制品，在肌肉老韧、纤维较粗和含水量较低的肉中添加
，可使肉质变得柔软多汁；但若在含水量较高、肉质细嫩的鱼、虾中使用，则会适得其
反；
3. 嫩肉粉中的蛋白酶制剂，是用木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶或米曲霉蛋白酶制成的。我
们知道，肌肉组织中含有胶原蛋白，胶原蛋白是一种纤维蛋白，这种蛋白质的分子中由
于存在着交联键而... 阅读全帖 |
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m***d
发帖数: 1050 | 13 很懂英文的“清华大学最年轻教授”颜宁(2008-08-22 03:42:29)转载▼标签： 杂谈
分类： 学术打假
2000-2004年间在普林斯顿大学施一公实验室读博士、毕业后留在原实验室做博士后、
2007年跟着施一公“裸奔回国”成了清华大学医学院教授的颜宁为师父保驾，在科学网
博客上贴了一张大字报《方舟子是在哗众取宠，还是无间道？》，谩骂我对施一公的批
评是“无知”、“以讹传讹”、“自以为是”、“诛心”、“不失时机给自己作广告”
、“不懂英文”、“弱智”等等，不论是出于原来的师生关系，还是出于现在的共同利
益关系（颜宁声称在清华从事“重要疾病相关的膜蛋白的结构与功能研究”，那是施一
公担任首席科学家的新立973项目），都不难理解这种举动。最好玩的是要来指导我的
英文：【6. 施一公去年曾给《普林斯顿校友周刊》写信声称中国老百姓是不配享有美
国式的民主和言论自由不懂英文的方舟子（democracy in the U.S. style simply
does not work in China. Singing high praises of freedom of speech a... 阅读全帖 |
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O*******d
发帖数: 20343 | 14 胃里的蛋白酶也是胃制造的。 为什么蛋白酶在制造过程中不会把胃给溶解了？ 这跟制
造炸弹一样。 安全炸药需要触发器才能爆炸。 蛋白酶在制造过程中，一般有一两个化
学键把蛋白酶保持在无活性的构象。 一旦蛋白酶被释放，那一两个化学键就被切断，
相当于触发了活性，蛋白酶自然形成有活性的构象，发挥其强大消化蛋白质的功能。 |
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m****g
发帖数: 530 | 15 旧金山加利福尼亚大学（UCSF）的研究人员已经识别了一个新的潜在的药物靶标（drug
target）来抵抗疱疹病毒。总所
周知，这种病毒会导致卡波西肉瘤（Kaposi's Sarcoma）。这项新发现为使用一种蛋白
质抑制剂类的药物来抵抗疱疹病毒
提供了可能。
据研究人员介绍，这个新的药物靶标，被认为是一种蛋白酶二聚体，可以作为一种模型
来研发治疗从癌症到老年痴呆症这
类疾病的新疗法。这项研究结果发表在《Nature Chemical Biology》的网站上。
目前大部分的抗病毒药物都会攻击病毒的活性部位，那些部位的酶和受体是以锁和钥匙
那样的方式工作的，通过这种方式
或者激活或是抑制一些特殊蛋白质的活性。传统意义上说，药物开发也主要是关注“琐
”和“钥匙”的活性来使酶或受体起效。
一些病毒的酶，比如做所周知的蛋白酶，还包括HIV和疱疹病毒家族，它们最稳定的状
态是以二聚体的形式结合，非常像一
个完全开放的蛤壳。这些蛋白酶在病毒传染方面有重要的作用，但是还需要和蛤的两个
半体结合才会起效。
研究人员解释说，HIV蛋白酶已经可以通过阻碍二聚体的活性位点成功定位，但是疱疹
病毒蛋白酶二聚 |
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发帖数: 1 | 16 2月3日，国家卫健委召开新闻发布会，介绍目前多家医疗机构正在就瑞德西韦（
Remdesivir）组织开展临床试验。根据中国科学报报道，瑞德西韦三期临床试验已经开
始，样本量为270例，样本对象为新型冠状病毒感染肺炎的轻中症患者。由中日友好医
院曹彬教授牵头在武汉进行。
瑞德西韦这款在全球范围内都没有上市的药物，被国内外不少专家学者及研究机构视为
可能抗击新冠病毒的重要武器。这款药物在没有用于临床试验之前，2020年1月27日，
德克萨斯A&M大学化学院刘文设研究团队在chemrxiv上发布了题为“Learning from the
Past: Possible Urgent Prevention and Treatment Options for Severe Acute
Respiratory Infections Caused by 2019-nCoV”（从过去中学习：2019-nCoV引起的
严重急性呼吸道感染的可能紧急预防和治疗选择） 的最新研究论文，该论文提出3种可
用于治疗新型冠状病毒感染患者的候选药物，其中就包含了吉利德（Gilead）公司开发
的瑞德西韦（Remdesi... 阅读全帖 |
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h*****o
发帖数: 342 | 17 tPA是tissue plasminogen activator，是一个蛋白酶，主要功能是把plasminogen转变
成plasmin。Plasmin也是个蛋白酶，主要功能是把降解血栓。
大部分的中风都是缺血性的中风，是一根或者几根主要的脑部血管栓塞引起的。血栓形
成本身涉及了许多蛋白酶，重要的像thrombin，还有血小板上面的一些受体。所以一个
治疗思路就是抑制这些蛋白酶活性，阻断血栓的持续形成。另一个思路就是加入像
plasmin, plasminogen, tPA这些酶，降解已经形成的血栓。大概是三十年前开始就陆
陆续续在动物模型里测这些小分子化合物或者这些酶。常见的一个问题，当你抑制了血
栓形成的过程，一旦你的脑血管受到损伤，这些血管附近很容易有脑溢血以及相关的组
织损伤。所以这本身是很矛盾的。绝大部分的药都是因为有过多的脑溢血症状被淘汰掉。
tPA最早在八十年代中旬开始兔子上测的时候效果很好，在九十年代开始进入临床实验
，到九十年代中正式被FDA批准。它的一开始的有效期是在中风发生后的三个小时内从
静脉注入，病人的康复比例比不用药高了10%左右。但是使用tPA的病患有更高 |
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p*****y
发帖数: 46 | 18 程亦凡，美国加州大学旧金山分校（UCSF）教授、霍华德·休斯医学研究所研究员。早
年学习物理。1996年，在获得物理博士学位5年后，他转行进入结构生物学领域。2013
年，他和合作者第一个用单颗粒冷冻电镜方法，将膜蛋白结构解到了近原子分辨率（3.
4埃）的水平。迄今为止，程亦凡已在生命医学顶尖期刊上发表论文及综述文章达100多
篇，近20篇在Nature、Cell、Science上发表。
然而相比绝大多数成功的科学家来说，程亦凡是人到中年才获得普遍认可。2006年，已
40多岁的程亦凡才刚刚做到助理教授，也许是加州大学旧金山分校年纪最大的助理教授。
近期，赛先生就他的学术经历、研究课题、对结构生物学的贡献以及冷冻电镜(cryo-EM
)发展趋势等问题专访了程亦凡博士。
赛先生：可不可以回顾一下你的研究历程？
程亦凡：我情况和经历可能比较特殊。我本科学的是物理。1987年刚开始在武汉大学物
理系读硕士研究生时，看到当时第一篇关于准晶体发现的文章，非常激动。因为当时电
镜是研究准晶体结构最有效的手段，于是决定加入王仁卉老师课题组学习电子光学理论
和电镜实验技术。博士研究生的研究工作是在中科... 阅读全帖 |
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r*c
发帖数: 484 | 19 蛋白酶，蛋白酶，蛋白酶
这年头产妇食谱中，哪有缺乏蛋白质的
关键是个消化吸收问题
番木瓜中含有大量木瓜蛋白酶，所以会有帮助 |
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s****n
发帖数: 8912 | 20 施一公在发布会现场
今天上午，记者从清华大学获悉，著名结构生物学家、中科院院士、清华大学教授施一
公研究组在世界上首次揭示了阿尔茨海默症（俗称老年痴呆症）发病直接相关的人源γ
分泌酶复合物的精细三维结构，为理解γ分泌酶复合物的工作机制及阿尔茨海默症的发
病机理提供了重要线索。该成果于6月29日在英国《自然》杂志在线发表。
成果发布
"这是我职业生涯上，最重要的突破"
今天上午，在清华大学召开的发布会上，施一公教授展示了阿尔茨海默症发病直接相关
的人源γ分泌酶复合物的精细三维结构。
他在介绍他的研究组成果时表示，此前的研究表明，阿尔茨海默症的发生和大脑中淀粉
样斑块的形成密切相关。淀粉样斑块是由膜整合蛋白酶复合物γ分泌复合酶异常切割"
淀粉样前体蛋白"APP而产生过量易聚集的Aβ42肽所致。
γ分泌酶复合物可以理解成细胞膜上的一个蛋白酶体，或者更通俗地形容为垃圾粉碎机
。它的主要作用是降解细胞膜上的一些废物蛋白，把它降解成小的片段，让人体再吸收
、再利用。
获得γ分泌酶复合物的三维结构是目前世界生命科学领域最热门的研究课题之一，世界
上几十个实验室都在进行科研攻关，但几十年都未有收获。
... 阅读全帖 |
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x********e
发帖数: 35261 | 21 hiv cocktail不仅仅是逆转录酶抑制剂好吗？还有加蛋白酶抑制剂和一个其他途径的抑
制剂。这个药是蛋白酶抑制剂。只要RNA病毒，都需要蛋白酶把前体polypeptide切成功
能性病毒蛋白。 |
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N*******e
发帖数: 580 | 22 好专业。。。膜拜ing
[在 xiaxianyue (下弦月) 的大作中提到：]
:hiv cocktail不仅仅是逆转录酶抑制剂好吗？还有加蛋白酶抑制剂和一个其他途径的
抑制剂。这个药是蛋白酶抑制剂。只要RNA病毒，都需要蛋白酶把前体polypeptide切成
功能性病毒蛋白。 |
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发帖数: 1 | 23 新型冠状病毒2019-CoV是一个和SARS病毒非常接近的冠状病毒，Spike蛋白空间结构和
SARS的Spike蛋白结构相似，现在也已经证明新冠病毒使用和SARS病毒一样的ACE2受体
进入人体细胞。 除此以外，新冠病毒的RNA聚合酶RdRp和SARS病毒的RNA聚合酶RdRp相
似，新冠病毒的蛋白酶也和SARS病毒的蛋白酶相似，新冠病毒的E蛋白和造成SARS病毒
毒性的E蛋白几乎一模一样。
对于所有现在在武汉一线治疗武汉新冠病毒肺炎的医生，你们都需要回答一个问题，
那就是你们为什么没有参考2003年香港医生治疗SARS病毒的临床经验和2015年韩国治疗
MERS冠状病毒的经验？
如果你们中有人参考了2003年香港医生治疗SARS病毒的临床经验和2015年韩国治疗MERS
冠状病毒的经验， 一个月之前就会提出针对新冠病毒的蛋白酶使用克力芝，或者针对
新冠病毒的RNA聚合酶RdRp使用Gilead的新药remdesivir.
一个月以前你们还有理由，因为你们那时候既没有克力芝也没有remdesivir。 现在，
你们的手上有足够上千人使用的克力芝， 五百人使用的remdesivir， ... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 24 新型冠状病毒2019-nCov的爆发引起了人们对于此突发性公共卫生事件的高度关注。冠
状病毒的刺突糖蛋白（Spike glycoprotein, S glycoprotein）是疫苗、治疗性抗体的
研发以及临床诊断的关键靶点。
为了协助对该流行性疾病进行医学防护措施研发，2020年2月15日，美国卫生总署(NIH)
与德克萨斯大学奥斯汀分校Jason S. McLellan研究组（McLellan组在病毒结构方面做
了很多重要的工作，包括MERS等，有着丰富的经验）进行合作在预印版平台bioRxiv发
表文章Cryo-EM Structure of the 2019-nCoV Spike in the Prefusion Conformation
，利用冷冻电镜技术分析了新型冠状病毒表面S蛋白的近原子结构。另外作者们通过生
物物理以及结构方面的证据发现，SARS-CoV-2的S蛋白结合人体ACE2（宿主细胞受体血
管紧张素转化酶2）【1,2】的亲和力要远高于SARS-CoV的S蛋白，解释了新型冠状病毒
传染性之强的主要原因。
新型冠状病毒是会引发发热、严重呼吸道疾病及肺炎的人传人的病原... 阅读全帖 |
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b*****t
发帖数: 9671 | 25 嫩肉粉中的蛋白酶制剂，是用木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶或米曲霉蛋白酶制成的。
有啥可怕的
可怕的是不给你用嫩肉粉，用福尔马林加工过的 |
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x**n
发帖数: 12542 | 26 ☆─────────────────────────────────────☆
mdrealtor (md_realtor) 于 (Wed Apr 25 10:26:56 2012, 美东) 提到:
昨天，看新闻，说美国又发现新的疯牛。
我的问题是，如果把疯牛肉彻底炖烂了，是否还有危险？如果还有危险，为什么呢？我
觉得炖烂了以后，蛋白就没有生物活性了，应该没问题了。
☆─────────────────────────────────────☆
TMR (农业重金属) 于 (Wed Apr 25 10:27:44 2012, 美东) 提到:
I like medium rare.
☆─────────────────────────────────────☆
buckseye (HardHat) 于 (Wed Apr 25 10:36:22 2012, 美东) 提到:
不行，虽然疯牛病病毒是蛋白质病毒，但是此种病毒极耐高温，煮熟也没有。
☆─────────────────────────────────────☆
vn (jmj) 于 (Wed... 阅读全帖 |
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G***a
发帖数: 27294 | 27 首先，豆浆（黄豆）里面有的不是蛋白酶，是蛋白酶抑制剂。确切地说，是胰蛋白酶抑
制剂
即soybean trypsin inhibitors
其次，绝大多数实验证明，soybean trypsin inhibitors对人体胰腺蛋白酶没有任何有
害作用
甚至有人说它将来可以用于胰腺癌症的研究。
最后，即便有害，这个东西，加热就能完全灭活。实在害怕，把豆浆煮开了喝，大分子
都变性解旋了
怎么能刺激肠道壁粘膜呢？
具体参见以下文献
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7036513 |
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f**********r
发帖数: 18251 | 28 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: sautin (老将萨乌丁), 信区: Military
标 题: 震惊世界：海归院士施一公首揭老年痴呆症致病蛋白结构(图)
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jul 4 12:33:21 2014, 美东)
施一公在发布会现场
今天上午，记者从清华大学获悉，著名结构生物学家、中科院院士、清华大学教授施一
公研究组在世界上首次揭示了阿尔茨海默症（俗称老年痴呆症）发病直接相关的人源γ
分泌酶复合物的精细三维结构，为理解γ分泌酶复合物的工作机制及阿尔茨海默症的发
病机理提供了重要线索。该成果于6月29日在英国《自然》杂志在线发表。
成果发布
"这是我职业生涯上，最重要的突破"
今天上午，在清华大学召开的发布会上，施一公教授展示了阿尔茨海默症发病直接相关
的人源γ分泌酶复合物的精细三维结构。
他在介绍他的研究组成果时表示，此前的研究表明，阿尔茨海默症的发生和大脑中淀粉
样斑块的形成密切相关。淀粉样斑块是由膜整合蛋白酶复合物γ分泌复合酶异常切割"
淀粉样前体蛋白"APP而产生过量易聚集的Aβ42肽所致。
γ分泌酶复合物可以理... 阅读全帖 |
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s*********9
发帖数: 9860 | 29 材料：牛仔骨、新鲜菠萝（或罐头菠萝）、青、红椒
腌料：生抽、黑椒、生粉、糖、生油、水各适量
做法:
1、牛仔骨斩成三厘米长段，加入腌料腌入味。
2、菠萝削皮切块（买时可叫卖家帮忙处理好），用淡盐水泡半小时，捞起洗去盐水。
没有新鲜菠萝可用罐头菠萝替代。青红椒去籽，也可准备些洋葱，洗净切片。
3、锅内加适油烧热，加入牛仔骨，两面煎至九成熟，铲起待用。
4、锅内留少许油烧热，爆香青、红椒，加适量盐调味，将剩余的腌料淋入勾芡，加入
菠萝件、牛仔骨，略兜一下，起锅装碟。
小贴士：
1、腌牛肉不可用盐，因盐会令肉中水分渗出，使肉质变粗硬。腌牛肉时除了加入生抽
、糖、生粉、生油之外，还可加入少许水，能令牛肉松软嫩滑。
2、菠萝中含有一种特殊的菠萝蛋白酶，正常人摄入这种蛋白酶并无大碍，一般不会引
起过敏反应。而某些过敏体质的人就很有可能对菠萝蛋白酶敏感，食用菠萝前，将菠萝
去皮后，切片或块状，放置淡盐水中浸泡半小时，然后用凉开水冲洗去咸味既可食用。
3、患有溃疡病、肾脏病、凝血功能障碍的人应禁食菠萝，发烧及患有湿疹疥疮的人也
不宜多吃。 |
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v*********i
发帖数: 40 | 30 是的耶。其实根据原理自己也能判断我的做法应该没问题；而且以前、别人都是这么做
的。
我郁闷的是老板说我这么做不对，还指责我，还说你要是不会做就问问其他人，看看人
家是怎么做的。可是我明明会做，而且做的是对的。
所以想发上来让大家评评理。
我直接加SDS PAGE loading buffer到PBS悬起来的细胞里面煮，老板一听就说怎么能这
么做，你这么做是错的……不能用SDS loading buffer，这个是跑胶的时候上样用的，
你提细胞里的蛋白得用RIPA buffer。
还说，你怎么不加蛋白酶抑制剂。我解释说里面有高浓度的SDS，再煮过，不需要加蛋
白酶抑制剂了，因为蛋白酶已经变性了呀（我的解释对不对??????）
可是老板说做蛋白都得加蛋白酶抑制剂，你不是说自己以前做过很多蛋白质实验吗，你
要是没做过就说没做过，我可以让其他人教你，你要是不知道怎么做，要主动问别人，
看看人家怎么做的，等等。
还说，你怎么不测蛋白浓度；我就解释说我觉得不需要测蛋白浓度，以前我都不测，因
为转染的时候起始细胞数量是一样的，蛋白量应该差不多，加actin内参看一看就应该
知道平不平了；另外加了SD |
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s******y
发帖数: 28562 | 31 Merck公司推出的新药Boceprevir对丙型肝炎Hepatitis C病毒有很好的抑制效果。
这个药最早是由 Schering-Plough开发的，这个公司在２００９年被 Merck 买下.
Boceprevir 属于蛋白酶抑制剂，特异性的抑制hepatitis C virus 的一个蛋白酶NS3
protease ，而导致病毒蛋白不能被完全处理而无法组装和成熟.
由于丙种肝炎病毒的寄主特异性和在体内的感染过程的特殊性。该病毒目前没有有效的
体外细胞培养系统，也缺乏可以大规模筛选的动物模型，所以无法采用小分子筛选方式
。该药的开发几乎是纯粹由蛋白结构研究和binding prediction 推导开的，在对NS3
protease进行结晶之后，研究组在一些已知信息的基础上，对蛋白酶的活性基团serine 的侧链进行了抑制物设计
。在得出了最初的蛋白多肽lead 之后进行了进一步的优化，
最终得出了一个最有效的分子结构。
Federal health officials say a highly-anticipated drug to treat hepatitis C
made ... 阅读全帖 |
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s*******e
发帖数: 1010 | 32 说句玩笑话，这个问题的答案永远是case by case。如果你的蛋白表达量很高（>mg/
Liter）是有可能的，但是一般都需要在亲和洗脱后加一步分子筛或离子交换进一步纯
化一下才能达到90%。如果你在蛋白质和亲和标签之间加了特异性蛋白酶（TEV，
FactorXa之类的）位点的话，可以考虑上柱之后用蛋白酶切下蛋白而非洗脱，这种情况
一般比洗脱得到的蛋白纯度高（因为相当于针对标签和酶切识别序列进行了双重纯化）
，但要小心有的蛋白结合亲和柱后对蛋白酶有抗性的情况。 |
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n******t
发帖数: 1281 | 33 那你指的百克级的是细菌表达系统？真菌达到百克级一点也不奇怪。细菌到这水平这我
还真是第一次听说
LONZA在推销他的芽孢杆菌表达系统的报告上表达水平也只是 7.5 g/L。
如果是这样的话，诺维信和杰能科的酶制剂大罐发酵生产完了还要加一个稀释的步骤啦？
诺维信：
赛威液体蛋白酶---Savinase (酶活在50万u/ml左右)
赛威超强稳定型液体蛋白酶---Savinase Ultra (酶活在50万u/ml左右)
杰能科：
液体蛋白酶---Purafect (酶活在50万u/ml左右) |
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s****n
发帖数: 8912 | 34 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: sautin (老将萨乌丁), 信区: Military
标 题: 震惊世界：海归院士施一公首揭老年痴呆症致病蛋白结构(图)
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jul 4 12:33:21 2014, 美东)
施一公在发布会现场
今天上午，记者从清华大学获悉，著名结构生物学家、中科院院士、清华大学教授施一
公研究组在世界上首次揭示了阿尔茨海默症（俗称老年痴呆症）发病直接相关的人源γ
分泌酶复合物的精细三维结构，为理解γ分泌酶复合物的工作机制及阿尔茨海默症的发
病机理提供了重要线索。该成果于6月29日在英国《自然》杂志在线发表。
成果发布
"这是我职业生涯上，最重要的突破"
今天上午，在清华大学召开的发布会上，施一公教授展示了阿尔茨海默症发病直接相关
的人源γ分泌酶复合物的精细三维结构。
他在介绍他的研究组成果时表示，此前的研究表明，阿尔茨海默症的发生和大脑中淀粉
样斑块的形成密切相关。淀粉样斑块是由膜整合蛋白酶复合物γ分泌复合酶异常切割"
淀粉样前体蛋白"APP而产生过量易聚集的Aβ42肽所致。
γ分泌酶复合物可以理... 阅读全帖 |
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e********r
发帖数: 147 | 35 我们研究一个病原细菌的蛋白酶A，发现它能把一个受体B的信号识别区降解掉。A能够
切割B的生化证据和蛋白互作的证据都是明确的，已经拿到手了。
但遗传分析不知该作如何解释，请大家看一看：
事实一：蛋白酶A突变以后会使细菌致病力下降
事实二：受体B突变以后也会使细菌致病力下降
结果我们在蛋白酶A突变体里过表达受体B，细菌致病力照理说恢复一些是正常的，可这
个菌株的致病力下降得更严重！
做A和B双突的结果还没出来，所以暂时木有更多的提示。
这个我怎么解释，或者用什么样的model，才能把遗传数据和生化数据捏到一起呢？ |
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s********n
发帖数: 26222 | 36 1,转基因玉米更有益健康
2,美国人不直接吃转基因食物吗？
3,方舟子：转基因食品对人无害
4,我为什么选择转基因食品
5，方舟子：转基因食品会引起过敏吗？
6，方舟子：别怕，转基因食品不是要转你的基因
7，方舟子：为什么说吃转基因食品是更加安全的
8, 方舟子：转基因食品要不要标记
9, 方舟子：为什么对这么一个基因就那么担心？
10,方舟子：转基因其实很环保
11,方舟子：杂交水稻可能有毒素，转基因大米才靠谱
12,方舟子：我们时代的转基因恐慌
1, 转基因玉米更有益健康
•方舟子•
提起主粮，许多人想起的是水稻和小麦。其实玉米也是非常重要的主粮。
对美国来说尤其如此，全世界的玉米有近一半产自美国。玉米是美国最重要的
作物，不仅总产量在所有作物中排第一（2009年总产量3.34亿吨），总产值也
是第一（2009年总产值486.6亿美元）。
这么高的产量当然不可能都做食品，大部分玉米被用来做成饲料、酒精等，
剩下的才供人食用：主食有用玉米粉做的各种面食以及早餐吃的玉米碎片，蔬
菜有煮玉米粒、... 阅读全帖 |
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o***s
发帖数: 42149 | 37 就是这种神秘果，可以给酸度极高的水果带来甘甜的口感。 章帝 摄
一颗红色的果实，长得像平常的小西红柿，但这种水果实在神奇：吃一颗这样的水果后再吃柠檬，就像在吃甘甜的蜜橘，完全没有酸涩味道。
近日，记者在长沙县黄花镇就见识了这种神秘水果，它是台商林瑞安从台湾台南县引进的，如今已经种植成功。
林瑞安说，这种水果叫神秘果，号称“果园里的魔术师”。其神秘之处在于将其放入口中，细细咀嚼果肉后，再尝试其他水果如柠檬等，再酸涩的水果都会变得清甜可口，且甜味留存口腔可达30分钟之久。
见记者将信将疑，林瑞安从冰箱里取出一个柠檬，让记者先吃一颗神秘果。随后再吃一瓣柠檬。
果不其然，这时的柠檬吃起来像蜜橘，完全没有酸涩的味道。
神秘果为什么有如此魔力？原来它的果肉里含有一种变味蛋白酶(又称神秘果素)，这种蛋白酶分布到舌头的味蕾上后，能关闭舌部主管酸、涩、苦味的味蕾，开放主管甜味的味蕾。
因此，神秘果能引起人们味觉神经末梢对食物味道的反应发生变化，这就是它“神秘”的道理。 |
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g***j
发帖数: 40861 | 38 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: sunnyday (艳阳天), 信区: Biology
标 题: 转基因：科普的科普
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Jul 14 22:23:52 2011, 美东)
这几天都非常忙。今天偷闲上来一看，发现版上居然又就转基因吵起来了。
我本身对于转基因，持中性偏批评态度，但是实话来说，国内一些反对转基因的
人的无知程度，使得我几乎不愿意在公共场合反对转基因，因为不想被划入他们
那一群人中。但是支持转基因的人好像也没有好到哪里去。国内支持转基因的几个所谓
公共知识分子（特别是方舟子同志，这个我得特别点他的名），其实对于农业和转基因
这个行业，都是一知半解。而且方舟子有个非常坏的毛病，就是喜欢用google和百度来
代替向专家请教，什么东西都是喜欢上网看看，抄抄，在连一些基本概念都不懂的情况
下就大张旗鼓地给全国人民科普。饶毅写的那个短文我大概看了一下，我赞成他的态度
，但是不赞成他的好几个论点。
我其实本身也不是做农业的，但是我认识一些很好的专家，所以向他们请教过有关问题
，这里我把得到的信息贴一下。我想我们生物版的人... 阅读全帖 |
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w**********g
发帖数: 1985 | 39 陆漫：中央电视台请转基因专家和相声演员给中学生洗脑推销转基因
文/陆漫
１０月２６日开始，中央电视台七套科技苑连续播出三期转基因节目《揭开转基因的面
纱》，转基因水稻专家朱桢和相声演员何云伟同台科普转基因，主持人陆梅的循循善诱
，学生们的天真可爱、节目文本的选择性解读，共同完成了这个历时７０分钟转基因科
普。
节目最后，当主持人陆梅问到，如果能够实现转基因，你们想转什么，孩子们有的回答
想变成飞鸟、想将各种食物集中、想变成鱼。这时，台上几位学生跳起舞蹈，背景音乐
是歌手王筝的《我们都是好孩子》。歌里唱着：“我们都是好孩子，最最善良的孩子。
”
中央电视台科技苑栏目的安排真是良苦用心：在节目开始前，同样是以这群学生在“北
方交通大学附属中学”上课为由头，语文课讨论“送你一束转基因花”。有学生问到转
基因是否有害？这时老师说：“同学们，我们有一个到中央电视台参加转基因技术探讨
有关的节目。”同学们欢呼，节目完了，同学们尽兴而归，估计这位同学的疑惑也消除
了，因为整期节目给转基因食物作了“无害”的辩解，而且强调转基因“有营养”。中
央电视台科技苑绑上这群学生为转基因作辩护的目的也达到了，而且... 阅读全帖 |
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R*******N
发帖数: 7494 | 40 机体内大多数细胞不能无限分裂，当一个细胞自我复制超过一定次数(平均50倍左右)，
一个基因开关即关闭细胞分裂程序。“僵尸细胞”就是这种不再分裂的衰老细胞，它们
像僵尸一样不断制造出破坏分子（免疫蛋白），攻击和杀死附近的健康细胞。
尽管长生不老药只是一个传说，但2011年11月初在《自然》杂志发表的一篇论文，却让
许多人看到了一线曙光。
这篇论文的作者是美国梅奥医学中心(Mayo Clinic)的研究人员。他们宣布，通过让转
基因小鼠服用一种特殊药物，能够清除小鼠体内的“僵尸细胞”，从而延缓甚至是预防
它们的衰老。
报告撰写者基兰博士介绍，早在五十年前，科学家们就发现，细胞在停止分裂前会经历
一个衰老期。这段时间它们既不死亡，也不正常分裂繁殖，而是像僵尸一样不断制造出
破坏分子，攻击和杀死附近的健康细胞。学界推测，这种特性是为了防止细胞繁殖失控
和癌症的扩散而存在的。
人体的免疫系统能够清除掉这些衰老细胞，但清除的干净程度会越来越不尽如人意。结
果就是，人体内的衰老细胞随着年龄增长越积越多，特别是在皮肤脂肪、骨骼肌肉以及
眼部。它们是不是引发人类各种老年病的罪魁祸首呢？科学家们一直心存疑... 阅读全帖 |
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s********n
发帖数: 26222 | 41 1,转基因玉米更有益健康
2,美国人不直接吃转基因食物吗？
3,方舟子：转基因食品对人无害
4,我为什么选择转基因食品
5，方舟子：转基因食品会引起过敏吗？
6，方舟子：别怕，转基因食品不是要转你的基因
7，方舟子：为什么说吃转基因食品是更加安全的
8, 方舟子：转基因食品要不要标记
9, 方舟子：为什么对这么一个基因就那么担心？
10,方舟子：转基因其实很环保
11,方舟子：杂交水稻可能有毒素，转基因大米才靠谱
12,方舟子：我们时代的转基因恐慌
1, 转基因玉米更有益健康
•方舟子•
提起主粮，许多人想起的是水稻和小麦。其实玉米也是非常重要的主粮。
对美国来说尤其如此，全世界的玉米有近一半产自美国。玉米是美国最重要的
作物，不仅总产量在所有作物中排第一（2009年总产量3.34亿吨），总产值也
是第一（2009年总产值486.6亿美元）。
这么高的产量当然不可能都做食品，大部分玉米被用来做成饲料、酒精等，
剩下的才供人食用：主食有用玉米粉做的各种面食以及早餐吃的玉米碎片，蔬
菜有煮玉米粒、... 阅读全帖 |
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f***y
发帖数: 4447 | 43 http://scitech.people.com.cn/n/2015/0917/c1007-27596632.html
“这是一项具有极高原创性的研究工作，揭开了在炎症领域潜伏多年的‘黑匣子’，
是炎症领域研究的重要里程碑，具有‘非凡的重要性’！”
获得国际顶级期刊《自然》杂志四位审稿人如此评价的，是伦敦当地时间9月16日下午6
时（北京时间17日凌晨 1时）在该杂志在线发表的一篇长文，其内容是解析细胞炎性坏
死关键分子机制，通讯作者为北京生命研究所资深研究员邵峰博士。
“这项研究成果可能是我回国十年多来最为重要的工作。”邵峰博士告诉记者，该发现
不仅破解了一个极为重要的科学难题，为治疗败血症、痛风和家族性地中海热等免疫疾
病提供了可能和理论指导，同时也开辟了一个全新的细胞炎性坏死研究领域。
细胞炎性坏死是一把双刃剑
既可激活人体免疫系统消灭病原体，又能导致痛风、败血症等多种免疫性疾病
据邵峰介绍，在成年人的身体里，每天大约有500-700亿个细胞死亡。这些细胞大部分
是通过细胞主动“自杀”实现的。这种细胞“自杀”有助于人类去除机体内已完成正常
生理功能、不再需要的细胞，控制癌细胞繁... 阅读全帖 |
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O*******d
发帖数: 20343 | 44 曾经有一个问题，有没有容器可以存放可以溶解一切物质的溶液。
胃从生物角度看就是这样的容器。 胃里有大量蛋白酶，还有盐酸，可以溶解一切蛋白
质。 而胃本身就是蛋白质构成。
自然进化已经提供了答案。 胃是活的东西，可以不断分泌黏液来保护胃壁不受盐酸和
蛋白酶的侵袭。 |
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q*******n
发帖数: 20306 | 45 嫩肉粉，又称松肉粉，这是一种能使动物性原料软嫩滑润，同时又不损伤肌纤维弹性的
佐助料，呈白色粉末状，为纯天然制品，它的主要成分是从番木瓜中提取的疏松剂木瓜
蛋白酶。
嫩肉粉其主要作用在于利用蛋白酶对肉中的弹性蛋白和胶原蛋白进行部分水解，使肉类
制品口感达到嫩而不韧、味美鲜香的效果。 |
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z*******4
发帖数: 285 | 46 拜托不要半桶水教坏外行人
RNase是蛋白酶，本身是蛋白质，是切割RNA的蛋白酶。
你说的有催化活性的RNA，叫做核酶，英文ribozyme |
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发帖数: 1 | 47 现代研究指出，银的 化学结构决定了银具有较高的催化能力，高氧化态银的还原势极
高，足以使其周围空间产生原子氧。原子氧具有强 氧化性可以灭菌，Ag +可以强烈地
吸引细菌体中 蛋白酶上的 巯基（-SH），迅速与其结合在一起，使蛋白酶丧失活性，
导致细菌死亡。当细菌被Ag +杀后，Ag +又由细菌尸体中游离出来，再与其它菌落接触
，周而复始地进行上述过程，可能是银杀菌持久性的原因。据测定，水中含Ag +为0.
01ppm时，就能完全杀死水中的大杆菌，能保持长达90天内不繁衍出新的菌丛。[1]另外
研究还发现银离子可以通过凝固病毒的 蛋白质分子和束缚其DNA分子上的供电子体导致
病毒死亡。[2]
白银的杀菌作用亦源于此，用银餐具盛放食物不易发酵变酸；银化合物可治疗烧伤包敷
伤口。
：骗人的噱头 你知识青年也信
： |
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发帖数: 1 | 48 这个？
三功能蛋白质缺乏症
是一种脂肪酸氧化代谢病，是由于编码三功能蛋白酶a-亚单位的的基因突变导致长链-3
-羟酰基辅酶A脱氢酶，烯酰CoA水合酶及β-酰酮基辅酶A硫解酶活性缺陷，引起脂
肪酸代谢受阻所致的疾病。
是一种脂肪酸氧化代谢病，是由于编码三功能蛋白酶a-亚单位的的基因突变导致长链-3
-羟酰基辅酶A脱氢酶，烯酰CoA水合酶及β-酰酮基辅酶A硫解酶活性缺陷，引起脂
肪酸代谢受阻所致的疾病。
检测结果
科学依据
动态
卡片展示
我的基因检测结果
三功能蛋白质缺乏症
未携带
：估计不是， 我列的是cpt2， 你这个弄不好我也有， 没有查看过。
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S*******l
发帖数: 4637 | 49 3C protease inhibitor是抑制鼻病毒蛋白酶的。SARS的蛋白酶和3C protease 很像，
3C protease inhibior对SARS 病毒也有效。
上次没赶上试用，这次应该给重症病人使用。 |
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