o*****p
发帖数: 2977 | 1 【 以下文字转载自 Medicine 讨论区 】
发信人: seeoff (greymouse), 信区: Medicine
标 题: 目前SARS实验室诊断技术简介
发信站: BBS 水木清华站 (Wed Apr 23 23:40:32 2003), 转信
目前的SARS检测方法介绍
1． IFA（间接免疫荧光）方法；
荧光标记的抗IgG抗体 为二抗
病人血清为一抗
培养病毒的细胞裂解液做包被抗原
抗体产生通常需要10－14天时间，此方法可以检测发病10天之后的患者标本。
2.PCR方法：
收集病人样本（血清或者含漱液）
超速离心，浓缩病毒(标本采集对医务人员非常危险，超速离心对实验人员也很危险并且
收集的样本可能未必能捕捉到病毒存在或者标本处理不好造成RNA降解，所以此步骤为此
方法的难点，至今未克服)
用常规方法提取病毒RNA
RT-PCR，扩增相应条带（引物一般使用国际通用的7对引物）
凝胶电泳观察，或者引物用标记探针做实时PCR
3.抗原检测
这是最有希望早期诊断的方法
ELISA方法，
底板用病毒蛋白包被（可用细胞裂解液、基因工程方法得到的重组蛋白，或者合成肽）
用鼠或其 |
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s******y
发帖数: 28562 | 2 我们需要homogenize 一批量很小的放射标志过的cultured cells,
并把chromosome DNA 打碎（好来做pulldown).
但是用sonicator 或者针头都不是很好的选择，因为sonicator 容易把样品
溅出来，而针头会有很多残留，不是很适合做quantitative analysis.
我知道有一些cell shredder的小管子是用来制备RNA sample的，可以把
细胞完全裂解。不知道有没有类似的东西可以用来裂解细胞制备总蛋白的？
有没有人知道？ 谢谢了！ |
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q******g
发帖数: 3858 | 3 RIPA buffer是比较强的裂解液，容易使细胞核裂解，染色体DNA出来。超声后，DNA断
裂，就看不到那些沉淀了。 |
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C*********d
发帖数: 12 | 4 是这样的：左边那些道的样品是不是某高盐洗脱，上样体积比较大，而右边是细胞浓度
高的裂解液，粘稠。
建议将细胞稀释在大一点的同种缓冲液，裂解完全，上相同大小体积。 |
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C******r
发帖数: 790 | 5 我也是约来越不会做western了
在以前实验室，从没做过的三四个内源蛋白CoIP，一次就能做出来
现在实验室，这次有的信号（doublet磷酸化band）下次就没有了（只有脏背景，没有
条带），搞得我每次去显影都提心吊胆
即使cell line相同，抗体相同，稀释倍数相同，一个人western跟另一个人western不
一样的可能原因太多了，试着列举一下：
1、cell lysis buffer的离子强度和去污剂强度不同，裂解时间长短不同，导致你们
lysate里的蛋白种量有差异；至于要看磷酸化band的话，裂解液是否加phosphotate
inhibitor, 加的种类，也超级影响结果。我不加phosphotase inhibitor的话，有时候
可以看到band shift，但更多时候看不到。
2、SDS胶的浓度，Tris的浓度和pH；这个有人说有影响，我还没有比较过。
3、转膜的电流、时间、温度，以及转膜液里的离子强度（Tris和Glycine的量）,以及
是否加有SDS，都会影响转膜效果。个别抗体对转膜有没有SDS会很敏感，没有哪个配方
是绝对的好。
4、一抗和二抗的稀释倍... 阅读全帖 |
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y***o
发帖数: 246 | 6 什么样的试剂可以抑止TX-100浮解细胞
有一个实验的最后一步需要用低浓度的TX-100裂解或浮起细胞。其实纯水也可以达到这
个目的的，不过加了一点点的TX-100效果更好更快些。最近很多本以为瓮中捉鳖的实验
都不顺利，包括用这低浓度的TX-100裂解或浮起细胞也不顺利。和实验室的技术员兼主
管讨论后，怀疑有可能collagen coating时，collagen加多了，导致细胞贴的太紧了。
第二次的时候，特意少加了collagen，可最后细胞还紧紧的贴在细胞板上，最后还是只
有靠用枪头死劲的来回吹吸来达到目的。从来没有怀疑过这TX-100溶液，因为这溶液以
前用过很多次，没出过什么问题。
今天那位技术员的TX-100溶液不够了，借了我的溶液用。结果发现我的TX-100溶液就是
奇怪，细胞躺在底部纹丝不动。现在原因很明显，我的TX-100溶液出了问题。可这问题
在那里呢？现在我这TX-100溶液浮解细胞时居然连纯水都不如。
现在回忆起来了，这溶液在出问题前借给实验室的阿三用过一次。说起这阿三，鬼的很
。他的抗体和试剂什么的都放没有任何标记的试剂盒里，然后塞在那些已经走了的人留
下来的盒... 阅读全帖 |
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C******8
发帖数: 602 | 7 可不可以用5x promega passive lysis dilute到1x以后的lysis buffer裂解细胞然后
做western blot或者IP呀？
那个lysis buffer本来是用来测luciferase assay的，我看裂解细胞效果蛮好。不知道
应用在其它地方是不是可以
谢谢 |
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s******y
发帖数: 28562 | 8 哦，这样的啊。
如果是培养的细胞的话，一般需要洗一洗来去掉培养基免得在分析样品的时候带进污染。
如果是在小虫里收集的胃。。。会不会有体液或者食物污染？如果有还是
要洗洗的。如果没有这个顾虑那就别洗了，听你讲起来好像样品很小的样子，
弄不好一洗就找不回来了。
如果裂解液里面的detergent过多，会干扰TCA沉淀的效果的。不过如果detergent
在１％以下还是可以用TCA的。TCA沉淀的时候蛋白都变性了，不会有phosphatase 作用。但是在裂解的时候，如果是用detergent而不是Urea or guanidinium 的话，phosphatase 会是一个大顾虑。可以用Sodium Orthovanadate (Vanadate, Na 3 VO 4)来抑制phosphatase.
如果用8M Urea，一般都是8M Urea in PBS, pH 大致调一下不要超过９就好了。
1 mg 组织? 这么少？一般而言20倍体积8M Urea就够了，所以20ul 就够了，
短暂的超声一下(15~30sec)，然后vortex 一分钟应该就好了，最后再加1/4 的 5X SDS... 阅读全帖 |
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W*********n
发帖数: 775 | 9 且那么多条带，每个条带都要100多刀，这么说我的四个样品，12泳道，120条带，要最
少12000刀？是不是太贵了点？老板觉得4000刀已经很多了。
这样的话，因为我想获取信息的蛋白不太可能在膜上，能不能裂解细胞，只获取细胞内
的蛋白来做分析，而不去裂解细胞膜上的蛋白？
您所谓的ＤＹＮＡＭＩＣ ＲＡＮＧＥ是啥意思啊，我菜鸟水平，你就科普一些来给建
议，呵呵，谢谢啦！ |
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h*1
发帖数: 64 | 10 首頁 > 期刊首頁 > 江蘇大學學報(醫學版) > 2002年5期 > 表皮葡萄球菌污染對質粒
轉化和抽提影響的實驗研究
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m***o
发帖数: 272 | 11 加TRIreagent时，发现分化的细胞，因为lipid比较多，就离心了一下，然后发现离心
后，我做的这个gene RT-PCR 比不离心要多出来很多。但是这个离心对没分化的细胞变
化就不大。这样我比较分化和没分化时的gene 表达就会因为这个离心而不同。
离心后，分化的细胞有些pellet，估计是没有裂解的细胞核。这样离心后cytosol的RNA
就会多很多。但是没分化的细胞因为细胞量少，所以裂解的充分些。
请问该怎么做才能最客观检测变化呢？ |
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g***s
发帖数: 30 | 12 我们的方法是：裂解buffer：RIPA ，裂解方法：磁珠快速震荡，破碎larva。然后离心
，加入SDS loading buffer.
结果western结果很奇怪，经常出现一部分样品western没有任何信号，另外一部分完全
正常的情况。跟抗体肯定没关系，因为我们用一些非常好用的如tubulin actin都试过
了。
各位有遇到过类似的问题吗？ 能给支支招吗 |
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V********n
发帖数: 305 | 13 仅供参考。
可能出的状况
1）不理解为什么要用DSS？交联后抗体是否还有活性需要检测。
2）elution buffer是否能洗脱目标蛋白？建议直接加上样buffer。
3）细胞裂解条件是否合适，IP时的buffer条件是否合适？做IP的细胞裂解条件是否和
之前WB检测时的一致。膜蛋白可能需要比较强烈的buffer条件。但同时，IP的buffer条
件可能不能太极端，需要摸条件。 |
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M*******C
发帖数: 183 | 14 我看了一下网站，兼容的试剂名单里没有SDS，你用它来做SDS的样品好用吗？
你说的蛋白沉淀下来再测是什么意思？就是裂解-离心-取上清？
比如我的细胞，我加了含SDS的去裂解，为了核蛋白，这样lysate很粘，我就去超声，
等离心后经常看不见沉淀，直接就拿去用了。
The RC DC protein assay is compatible with the following reagents and
buffers in addition to those compatible with the DC protein assay:
CHAPS 2% ReadyPrep sequential extraction reagents 2 and 3
DTT, 350 mM Sodium hydroxide, 2.5 M
EDTA, 0.1 M TBP, 2 mM
Imidazole, 0.5 M Tris, pH 8.4, 0.5 M
Laemmli buffer with 5% β-mercaptoethanol ... 阅读全帖 |
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y********g
发帖数: 782 | 15 全细胞裂解液有条带，western 也是work了~~ 主要还是2个问题，最主要的一个还是背
景太高。 我用抗mouse的pull down，用抗兔的蛋白检测，还是很多的背景杂带~~~
大家beads是怎么clear的？
我看protocol 通常有3种
1）先加Beads到样品中，然后把上清移到另一个管子里，然后再加beads和抗体过夜。
2）先将Beads和裂解液（不是样品）混合，rotate 1h，然后再离心，把preclear的
Beads+抗体+样品液 混在一起4度过夜。
3）将抗体和样品4度过夜，然后把Beads加进去，4度转4h左右。
3种方法，哪种背景更少啊，还是说差不多？谢谢大家了 |
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s******y
发帖数: 28562 | 16 分情况。
有的是古代的时候大家就是用那个溶液来裂解细胞的，后来有了其他方法大家也懒得去
换溶液。
有的则是因为某些酶需要在裂解细胞的时候用某些盐来抑制
有的则是因为某些蛋白是聚合体，需要先用比较高的盐来让他们分开。 |
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m*******n
发帖数: 387 | 17 做内源IP，裂解细胞的时候。可以用超声波裂解吗？
细胞核的蛋白，感觉这样不用加核酸酶了 |
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s**********a
发帖数: 92 | 18 我的实验很简单，GST-A （200KD）, His -B （100KD），验证它们结合。
1，首先，分子量这么大的蛋白，来做 pull down 实验，靠谱么？还是用片段，而不是
全长，会好些？
2，现在裂解完菌液后，特别粘稠 （也加了DNase I），有什么好办法么？我发现裂解
完再超声一下，不再粘稠，但western后发现，超声后蛋白变没了。
3，western 后发现，His-B 高表达，但过完柱子纯化后（pierce kit），反而没有了
，奇怪！
请问大家上面这些问题遇到过么？谢谢！ |
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s*****g
发帖数: 731 | 19 国内不是有肿瘤裂解病毒么 上海三维生物，看临床数据并不理想，但可能可以试试。
我们组也有肿瘤裂解病毒，现在在美国上临床一期，但治的不是这种已经转移的癌症。 |
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x********e
发帖数: 35261 | 20 1.你克隆promoter的目的是啥？如果是看有没有转录因子调控的话，需要看看ChIP-Seq
等数据，确定enhancer包含在里面了。单纯minimal promoter只要几百bp就够了。
2.克隆模版有两种。一个是自己提纯genomic DNA。1500bp基本上不需要kit，裂解然后
土法提纯一下就p得出。运气好的话直接拿裂解液p都能成功。更好的方式是用BAC做
template。B以前基因组测序的时候别人就把genomic DNA切成小片段放到载体里做成了
library。去blast一下就能得到包含你目标序列的BAC clone。买回来摇菌提质粒，然
后用质粒做模版p，效果比用genomic DNA高很多。
3. 设计引物。一般是取upstream promoter sequence到第一个exon。如果第一个exon
有TSS，引物设计在TSS之前。
4. vector。不知道你做reporter construct的目的是什么，不过luciferase好像多用
于in vitro assay。GFP， lacZ，luciferase等reporter vector中选... 阅读全帖 |
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l*******y
发帖数: 3987 | 21 没有太做过细菌方面的实验，现在有大约１０UL的体液，想检测里面的细菌DNA，而且
量太小也没有办法纯化。用什么LYSIS方法比较好？ 如果用碱裂解的话，是不是一定要
纯化？用LYSOZYME呢？如果不裂解，直接PCR的话，高温可以直接BREAK CELL WALL吗？
多谢！ |
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H****n
发帖数: 26 | 22 最近做一个Transcription Factor（120KD）的ChIP， 很奇怪的事情，--
前面标准的1% formaldyhe RT 10min，0.125M Glycine RT 5 min, PBS wash,
裂解完细胞后，温和的sonication完后，input用western看发现原来条带的位置没有（
或者变的很淡），在下面有两条小的蛋白带。 做了一下RNA pol-II的WB (>150kD <
200kD)也是类似的情况，原来条带的位置淡了很多，在底下出现了两三条size小的条带。
先后试了RIPA (0.1%SDS)和nuclear lysate(1%SDS)裂解，效果一样。只要有
sonication,即使是很温和的5个cycle 30s/30s (该条件下DNA shear都不完全200-
3000bp), 原来蛋白条带就会消失，取而代之的是底下出现的size小的条带。
请问这是sonication 导致大分子量的蛋白容易降解吗？要如何解决？ |
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l********8
发帖数: 197 | 23 我和楼主遇到过类似问题，谈谈的当时查到和询问到的方法
1.确认是否是噬菌体污染
其实有时候，如果加入的抗生素或者IPTG等，本身有毒性，就会使细胞裂解死亡。比如
我使用了当时来我们实验室推销的新牌子的抗生素，当我换回原来的抗生素后，就没有
任何裂解的现象的。还有噬菌斑的实验可以帮你确认，是否真的有噬菌体污染。
2.如果真的污染了你重要的菌株，简单的去除噬菌体的方法是，把细菌划线到平板上，
挑取单克隆，然后再划线，如此重复多次。得到的单克隆基本是没有噬菌体的。你可以
多挑几个，看看是否还有污染。
3.清洁确实很重要，你可能需要看看那些菌也污染了。 |
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l********8
发帖数: 197 | 24 我和楼主遇到过类似问题，谈谈的当时查到和询问到的方法
1.确认是否是噬菌体污染
其实有时候，如果加入的抗生素或者IPTG等，本身有毒性，就会使细胞裂解死亡。比如
我使用了当时来我们实验室推销的新牌子的抗生素，当我换回原来的抗生素后，就没有
任何裂解的现象的。还有噬菌斑的实验可以帮你确认，是否真的有噬菌体污染。
2.如果真的污染了你重要的菌株，简单的去除噬菌体的方法是，把细菌划线到平板上，
挑取单克隆，然后再划线，如此重复多次。得到的单克隆基本是没有噬菌体的。你可以
多挑几个，看看是否还有污染。
3.清洁确实很重要，你可能需要看看那些菌也污染了。 |
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L****e
发帖数: 499 | 25 我现在要研究一种蛋白质的酶活性，这个蛋白家族的另外一个同源蛋白有一种水解酶活
性，我现在想要研究我这种蛋白是否也有这种酶活性。开始我是直接用转染了蛋白的细
胞 homogenate 加上底物体外反应后做质谱，检测到水解产物，但是因为cell
homogenate 里有太多的各种蛋白了，所以结果没有直接的说服力。现在我想用his tag
来纯化我这种蛋白。
我的问题是我在裂解转染的细胞的时候肯定是不能加蛋白酶抑制剂的，否则纯化的蛋白
就没有活性了，可是纯化有这么多的步骤，经过很长的时间，我如何保证我的蛋白在纯
化过程中不被细胞中的各种蛋白酶降解呢。另外，我用His60 Ni resin 来纯化蛋白，
这个beads 是在ethanol 里，有没有必要在将bead加到细胞裂解液中之前洗掉bead中的
ethanol? washing buffer 中的imidazol 对蛋白活性有影响吗？
还请有蛋白纯化经验的前辈指教一二。多谢了 |
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h****6
发帖数: 229 | 26 能不能先固定，再裂解？
：就是从杀老鼠分离tissue到酶解，再到FACS获得细胞，最后能裂解细胞，动作快也需
要3-4h。
：你说的RNA保存试剂是什么？ |
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f*******9
发帖数: 74 | 27 我们用Orbitrap XL和Elite，一个代谢质谱的样本(MS1/2)，通常可以有5000 +/- 2000
的二级质谱MS2，然后对MS1 precursor ion进行peak identification之后，MS1 + MS2
+ RT的特征通常有>1000 个。
而和标品库对比之后，一般只能找到<50个化合物——这个数量取决于你的标品质量怎
样，覆盖度有多广。50是很高的数值了，我们与Thermo的msCloud标品库比较通常只能
找到个位数的化合物，和MassBank比较，发现的也很少，但我们自己的库，对植物比较
有针对性，就能找到很多。
如果做很多样本，那么能发现的特征就会增加，一倍以上吧。
然后还有很多没有MS2的离子，很多的峰非常明显，离子强度也高，不知道为什么没有
被裂解。实际上我分析过裂解的离子的强度，有相当数量的强度很低，在full scan里
面也不明显，有的甚至看上去是噪音。
不知道各大药厂是怎么利用LC-MS的，特别关心天然产物里面的应用，有谁来讲一讲？ |
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c******7
发帖数: 408 | 28 我们老板说让我bio fuels方面的研究
现在主要做他安排的试验,我觉得很奇怪,为什么让我做很多加氢试验呢,比如,limonene
(C10H16)加氢变成C10H22, 还有Myrcene（C10H14）加氢变成(C10H22),
更为奇怪的是现在让我做cuparene(C15H22)裂解试验，高温和一定的催化剂下，可以将
cuparene裂解得到主要是甲苯之内的产物，不知道有什么意义？
难道这些也是和bio fuels相关？ |
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A***N
发帖数: 219 | 29 手头有一篇文章待投。主要偏工程和实验：设计加工组装了连续进料装置和热裂解装置
，将废塑料热裂解，并通过预混合燃烧释放热能，最后带动一个迷你的蒸气锅炉做功供
电。全部是实验室规模。现在正在发愁往哪投文章。
由于内容太过于工程，没有什么科学贡献，个人感觉投的文章的档次肯定要低于Energy
& Fuels。特地来请各位大牛评价一下几个杂志哪些更合适一些（或者其他相关的杂志
），以及有哪些杂志审稿的速度正常（2~4周之内给回复）？
包子答谢
Journal of Applied Polymer Science;
Resources, Conservation and Recycling;
Journal of Petroleum Science and Engineering;
Polymer Degradation and Stability;
Chemical Engineering Research and Design;
Journal of AIChE;
Energy Sources, Part A: Recovery, Utilization, and Environmental... 阅读全帖 |
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A***N
发帖数: 219 | 30 手头有一篇文章待投。主要偏工程和实验：设计加工组装了连续进料装置和热裂解装置
，将废塑料热裂解，并通过预混合燃烧释放热能，最后带动一个迷你的蒸气锅炉做功供
电。全部是实验室规模。现在正在发愁往哪投文章。
由于内容太过于工程，没有什么科学贡献，个人感觉投的文章的档次肯定要低于Energy
& Fuels。特地来请各位大牛评价一下几个杂志哪些更合适一些（或者其他相关的杂志
），以及有哪些杂志审稿的速度正常（2~4周之内给回复）？
包子答谢
Journal of Applied Polymer Science;
Resources, Conservation and Recycling;
Journal of Petroleum Science and Engineering;
Polymer Degradation and Stability;
Chemical Engineering Research and Design;
Journal of AIChE;
Energy Sources, Part A: Recovery, Utilization, and Environmental... 阅读全帖 |
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a*********f
发帖数: 101 | 31 非常谢谢你的回复。
但是kaplan note microbiology page 150：
naked virus enveloped virus
immune response prominently Ab Ab and prominent cell-mediated immunity
是否可以这么理解： naked virus会裂解细胞，血液里产生游离病毒，所以主要诱导体
液免疫。而大部分enveloped virus不裂解细胞，长期寄生与胞内，所以主要诱导细胞
免疫。
谢谢。 |
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a********e
发帖数: 3771 | 32 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: andyzzdlee (麦地之一看二慢三通过), 信区: Biology
标 题: western提蛋白的困惑：多次离心vortex会不会降解蛋白
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jan 20 23:38:17 2010, 美东)
最近一次做western，用NEPER kit提取胞浆里的ERK和p38蛋白。因为用划伤组织做刺激
，脱落不少细胞，我就把medium离心得到这些脱落的细胞。同时在培养皿里加冰PBS，
在冰PBS里刮下剩余的细胞放进脱落的细胞里再次离心。然后用kit里CER lysis buffer
裂解（已加入inhibitor cocktail）。
裂解的时候我vortex两次，每次15sec。NEPER protocol要求vortext一次，15sec即可。
结果照片洗出来什么都没有，连EGF刺激的positive control都没出来。
以前只用过一次NEPER，erk出来band，而且结果可信。不同点在于没有收集脱落的细胞。
所以我考虑是不是多次离心、vortex是蛋白降解，也可能是收集脱落细 |
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g*********n
发帖数: 808 | 33 激进的核反应堆：积极推进中的新一代核电方案:
[导读] 数十年来，在核反应堆设计领域似乎只有一种设计方案占主导地位，未来，敏
捷、灵巧的新反应堆将更具吸引力。
积极推进中的新一代核电方案
数十年来，在核反应堆设计领域似乎只有一种设计方案占主导地位，而一些潜在的更好
选择则被束之高阁。现在，某些可替代性选择再次赢得青睐。
柯克·索伦森是美国一家备受推崇的核技术初创企业——Flibe Energy的创始人，该公
司成立于2011年。将时光追溯到2000年，索伦森当时是NASA的一名工程师，其职责就是
探究人类未来在月球殖民地的核能选择方案。偶然的机会，他遇到了一本阐述熔盐反应
堆的书——一种可以利用液态核燃料的能源来源。
索伦森说，这一想法听起来很荒诞。他之前所听说的所有核反应堆都是采用固态铀燃料
——起始于目前在核能工业中占主导地位的轻水反应堆。但该书指出，早在30年前美国
橡树岭国家实验室已经演示了熔盐技术——液态铀或者液态含铀燃料具有一些主要优点
。熔盐反应堆将不会受到灾难性关闭的影响，如熔盐反应堆不产生掺有钚和其他半衰期
较长的放射性同位素的核废料，而是几乎能将这些放射性同位素完全... 阅读全帖 |
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m*******u
发帖数: 30 | 34 这是300万字拙作《道德经新论》第一篇第四章的第二节。有些内容需要结合该篇另外
章节理解（网友如果快速阅读，不清楚之处可以跳过。另外此节的“象”就是“道”）
论坛排版不便，有兴趣者可下载全书或去博客阅读，链接见文末。
二 老子宇宙论与宇宙观测事实和科学宇宙模型
1，各向同性及“象”的分布
2，膨胀、空间与时间
2.1 膨胀
2.2 空间与时间
3，大爆炸
4，引力与电磁力
4.1 引力
4.2 电磁力
5，电磁波、双缝干涉、光子与光波
6，微波背景辐射、元素丰度、暗物质、暗能量
7，相对论、熵增原理
8，星际物质、星际分子、星云、星体形成
9，宇宙归宿和循环、宇宙边际
10，地外文明
1，各向同性及“象”的分布
各向同性是指在不同方向测量的物理量都相同。实际上是说物理性质与测量取向无关，
具有均质性。与此相应，各项异性是指在不同方向测量的物理量不同，具有非均质性。
各向同性与各向异性在不同的学科中所指有别。从宇宙学来说，目前的宇宙观测表明，
宇宙大尺度空间的物质分布是各向同性的，物质分布也是基本均匀的（时间、空间、宇
宙射线等也具有各向同性的特征）。正是在这些观测事实基础上，... 阅读全帖 |
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j**********i
发帖数: 3758 | 35 我的父亲在抢救室里尚未脱离危险，医生就催促转院。原因是几个月前
同样的病发还没治疗好，医生催促出院产生的矛盾。这次，为了不担待责任，
医生就干脆找借口不让住院。在中国不但行贿必须事必躬亲，个人必须的事务
也要牢牢看紧。天朝的元帅们正在谋划一个又一个的爱国主义的情感高潮，
他天朝的天兵天将们也发誓要在技术上赶超“帝国主义者”，学习标兵们
以封锁消息和主导舆论导向为奋斗目标。这一切都掩盖不了道德堕落的苍凉。
一位清华的国际关系"学者"以中国没有宗教传统为由拒绝信仰自由,这其实表明
一大批"学者"的立场:只认准谁是当权者和当权者的意图.但是这些一致对外的
天朝的主宰者都没有意识到一个更严重的问题:他们最大的敌人是他们自己,
他们自己可以空喊口号,却无法拒绝权力的诱惑. 我的一个亲戚都对于我父亲
感到不耐烦,劝我说人都是会死的.可见,天朝的内部的裂解是多么的可怕.
中国的"银行家"和中国的技术人员学到了新的技术以后,是最喜欢向上面打欢喜报告的.
然而,中国还需在人道主义的路上进行长期的苦难急行军,不然的话,他们永远
也看不到天朝的"伟大复兴".如果中国完不成这个漫长的行军的话,天朝很可能在还没... 阅读全帖 |
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p*******n
发帖数: 4824 | 36 响应斑竹号召...
1949.10 开国大典, 毛太祖登基, 恩来封相
1950-1953 朝鲜战争
1957- 老毛阳谋昭示天下, 反右开始, 共产政权正式走向集权独裁
1958-1960 大跃进, 庐山会议, YY正式开始
1964 中国试爆原子弹, 加入核俱乐部
1966-1976 文化大革命
1972-1978 中苏裂解, 尼克松访华, 西方世界逐渐承认土共的中国政府并逐步抛弃老蒋
的民国政府
1978 邓小平三次上台, 开始推动对外开放和经济改革, 成为影响现代中国的最重要的
历史人物
1989 六四事件
1997 香港回归
感觉六四以后, 中国还是比较无聊和稳定的, 尽管有SARS, 川震这样的大事情, 但是对
国家总体似乎没有太大影响... |
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w*****e
发帖数: 74 | 37 作者：张禄庆
2009年4月1日，互联网上登出了一篇题为《再探球床式反应堆（PBR）安全性》的文章
『1』。作者摩曼 （Rainer Moormann）先生长期在德国于利希研究中心工作，是一位
具有丰富球床高温气冷堆研发经验的专家。该文语出惊人，开篇第一句话就概 括说：
“PBR的安全性能并不象人们较早时想象的那样美好”。于利希研究中心2008年6月发表
的一项新的关于20多年前关闭的德国球床堆AVR运行经验 的研究指出，未来的PBR要增
加安全措施，还需要投入相当大的研发努力。该文的观点在核电界内不胫而走，引起广
泛的重视。有消息灵通人士透露，摩曼先生是 个高温气冷堆的坚决反对派。笔者不知
就里，不予置评，但坚信，赞成或反对的观点都只能建立在科学依据上。因此，本文想
就其中涉及到而又普遍关注的PBR的 共性安全问题从技术上进行探讨。
1 高温气冷堆发展概况
从20世纪 60年代开始，英国、美国和德国开始研发高温气冷 堆。 1964年，英国与欧
共体合作建造的世界第一座高温气冷堆龙（Dragon，20MWth）堆建成临界。其后，德国
建成了15MWe的高温气冷试验 堆 AVR和300M... 阅读全帖 |
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D***i
发帖数: 79 | 38
民主党派第三势力，哪个的民主共和旗号不比共产党打的高打的响，有屁用啊?
，因为gcd打土豪分田地。斗大的字不识一箩筐的农民在乎什么民主共和？人家只在乎
三十亩地一头牛！
是那东西当时流行而已。gcd也不傻，总的弄点对知识份子口味的。治国不能靠农民啊。
那是因为当时只有共产党有实力挑战国民党的政权。
中国农民的意识几千年来都是那样子，这些传统观念有好有坏。关键在于怎么组织。辛
亥革命看似代价很低是因为中国上层社会的统治阶层，尤其是汉人官僚与满清贵族之间
对中国未来政治体制的走向意见发生分裂，因此活生生的裂解了大清帝国。
国共内战事因为中国的中层知识份子对如何重建中国的看法发生分裂，支持国民党的认
为必须发扬传统中国价值，支持共产党的认为只有走向社会主义才能打造新中国。中共
成功的包装了「民主」，忽悠了中层知识份子才得以落实并强化共产党先天就比较强势
的组织能力来动员农民。
中国历史上农民造反的多了去。但是农民普遍缺乏的上层论述及组织能力。没有论述及
组织能力的农民造反都逃不过外部社会反扑及内在自我崩的结局。太平天国也有能力鼓
动农民，但是缺乏上层论述，完全丧失中层知识份子的心。曾国藩从... 阅读全帖 |
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c*****3
发帖数: 1141 | 39 从错估“7‧23”事态严重的状况外，到隐忍媒体狂轰滥炸一周后，北京当局终于
等不及温家宝悲情现身的余温犹存，在中宣部急转直下的三道禁令，终结陆媒昙花一现
的大鸣大放，并对脱稿演出的媒体人佐以迅雷不及掩耳的秋后算帐。
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陈思敏
“和谐号”列车温州撞车事件
在“7‧24史上最混乱”的铁道部新闻发布会，厉声质问的记者，不再对官方行礼
如仪，而“我反正信了”的“奇迹说”，激起众怒最高点，让火大记者追打落跑官员，
造成连线一度中断。而长期窒息缺氧的陆媒良知，挟民怨反弹力道，也得以深深呼吸一
口气。
就在媒体一度以为当局开放言论，北京却于“温”情喊话后，由中宣部立即补上一刀，
让此起彼落的同声谴责嘎然而止。虽有少数违命抗旨者以偷步、抢拍、擦边球，或开天
窗等方式续追真相，但终不敌“百家报纸撤版，千位记者被毙稿”的哀鸿遍野。
除事发第一天惯例的听命行事，外界大感惊讶却也不吝美言，长期... 阅读全帖 |
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W*****2
发帖数: 1043 | 40 http://bbs.wenxuecity.com/military/819620.html
中国不能忽视尚武精神
来源: JustAsked 于 2012-02-24 10:04:14[档案] [博客] 旧帖] [转至博客] [给我悄
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急功近利的世风，正在让中国人变得懦弱。尚武精神的泯灭，正导致今天中国陷入战略
重围。发展是硬道理，但经济发展不能以湮灭尚武精神做代价。否则，一切的发展成果
最后不过是成为别人的晚餐。
戴旭_博客
自然界是适者生存，人类社会是强者生存。中国热爱和平，中国追求和平世界，中国实
行韬光养晦的国策----这一切的背后，离开尚武精神的支撑，都是一厢情愿的梦想。我
们需要警惕军国主义思想滋生和政策选择的风险，但不能因此就有意排斥正常的自卫权
利，忽视尚武精神的培育。
一、尚武精神曾经是中国传统文化中最闪光的部分
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F*D
发帖数: 361 | 41 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: Physmolecule (斐丝~), 信区: Military
标 题: 北京新闻：中国颁发全球首个甲流疫苗生产批号 (zz)
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 3 08:53:58 2009, 美东)
发信人: Physmolecule (斐丝~), 信区: WorldNews
标 题: 北京新闻：中国颁发全球首个甲流疫苗生产批号 (zz)
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 3 08:53:04 2009, 美东)
北京新闻：中国颁发全球首个甲流疫苗生产批号
本报讯（记者代丽丽）今天上午，国家药监局宣布，由北京科兴生物制品有限公司生产
的甲型H1N1流感病毒裂解疫苗“盼尔来福。1”的注册申请已获审批通过，并颁发药品
注册批件，批准疫苗投入使用。这是我国乃至全球首支获得药品批准文号的甲型H1N1流
感疫苗。
名定为“盼尔来福.1”，一是为表明该疫苗系用于预防由甲流病毒引起的流感大流行，
与针对人感染高致病性禽流感的疫苗“盼尔来福”相区别，另一方面是为了纪念这支首
个完成临床研究并率先获准正 |
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y*****6
发帖数: 9545 | 42 【 以下文字转载自 Mathematics 讨论区 】
发信人: xian (海底核爆掀巨浪, 倒海翻江找扶桑), 信区: Mathematics
标 题: 哈哈，也说田刚
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 15 02:20:45 2009, 美东)
田刚是个宝贝，要不为了引进田刚，当初中央领导同志亲自关心并经由中组部协调财政
部、发改委、科技部和公安部等相关部门才把it引进到北大。这在中国历史上估计比当
时钱学森回国还要有震撼性吧？
然而，钱学森回来了就为中国弄了导弹，而且人也一帆风顺，因为名字好。田刚回来了
却听说到处赚钱，八卦去一直不断，至于为北大以至于中国做了啥贡献，估计只有他自
己知道了。不过，田刚的到来，北大数学系、中国的数学界，以至于国际华人数学世界
的是非却没完没了的“洪湖水浪打浪”。究其原因，看来是田刚太过裂解之气。
你没看这田刚，还真是一口一个十字，一刀一叉一个冈，八字硬得不得不令人胆战心惊
，这就难免不凶多吉利少了。
哈哈，田刚是数学名人，不管那事是真是假，反正那一杆子以田刚为荣的南北大学都曾
经或者感觉因为田刚而曾经牛过和依然感到牛着的，接下来就 |
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i***s
发帖数: 39120 | 43 一辈子种田种菜，自认为自己发现的野蘑菇，就是可以吃、营养多的好蘑菇。在被菜场协管员制止出售后，就拿回家烧了给孙子补补营养。结果却没料到，自己所采摘的蘑菇确实是毒蘑菇，让心爱的孙子命丧黄泉。日前，这悲伤的一幕就发生苏州常熟虞山，令人叹息。
毒蘑菇酿悲剧
据苏州大学附属儿童医院有关工作人员介绍，7月5日，他们接诊一位来自常熟食用自采蘑菇引起中毒的小朋友成成（化名）。当时，孩子病情已经很严重，考虑到成成已食用蘑菇三天，丧失了洗胃、血透的最佳救治时间，专家遂予以保肝、护心、抗感染等治疗，但病情仍不断恶化，肝损呈进行性加重，7月6日，再进行血透+灌流治疗后，转上海治疗，但成成仍在10天后，在上海治疗期间死亡。
说起事情的起因，该院的工作人员唏嘘不已。原来，成成的爷爷陈老伯（化名）是苏州常熟虞山人，一辈子以耕田种菜为生，自以为对田里地头的事情非常了解。
7月2日，闲不住的他又上田间地头转悠，不经意间，发现了一堆野蘑菇。
陈老伯根据自己多年的务农经验，断定该蘑菇是可以吃、营养多的好蘑菇。随即，便将该蘑菇采摘一空，并准备拿到菜场上出售，赚点零花钱，补贴一下家用。
菜场卖菇被制止，回家自己吃毒死7岁孙儿... 阅读全帖 |
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c***s
发帖数: 70028 | 44 关于徐明的发家史，他本人有一套固定的说法，包括他广为宣称的“钻熟对虾政策漏洞起家说”和“移山填海说”。徐明自称，他早年曾灵机一动，将在大连胜利广场基础工程挖出的60多万立方米泥土，搬到星海湾依山填海，建成了星海广场。光这个工程他就赚了3000多万，得了第一桶金。
这两个故事后来都遭到了媒体质疑。第一个故事是熟对虾的政策漏洞大连基本人人都钻；第二个故事则是胜利广场是14万平方米，而星海广场有160万平方米，根本无法填满;而且胜利广场的工程在做到一半时，实德因技术不济被踢出局。
而据本报记者调查，徐明早年的崛起，其实与一宗塑钢门窗生意有关。
鲜为人知的塑钢窗神话
1994年时，大连市领导对推广塑钢材料很感兴趣，给市建委布置了任务，让他们召开推广会。徐明从中嗅到商机。他开始到欧洲考察，决定引进当时国内还很少人知道的塑钢门窗。
1995年8月，徐明成立大连实德塑胶工业有限公司，贷款投资1.2亿元引进12条当时世界最先进的高速塑料异型材挤出生产线和门窗组装生产线，当年形成1.2万吨的产能。
工商资料显示，同年12月31日，徐明又从大连宇华实业总公司引资3000万，注册了大连实德塑钢门窗厂，专门生... 阅读全帖 |
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c***s
发帖数: 70028 | 45 今天上午，国家卫生和计划生育委员会及世界卫生组织举行联合新闻发布会，通报人感染H7N9禽流感的防控情况。专家表示，H7N9的8个基因片断中没有人类的基因片断，专家判断目前还没有看到有明显的人传人的证据。引起此次疫情的H7N9禽流感病毒是一个重配的新病毒，属禽源性。目前病例处于散发状态，未发现人传人的证据。
H7N9禽流感病毒是不是在人群中适应性变异是目前专家们最关心的问题，专家表示，流感病毒肯定会变异，但究竟往哪个方面变不能猜测，国家将依靠400多个实验室组成的监测网络，密切监视变异情况。
国家卫计委人感染H7N9禽流感疫情防控工作领导小组办公室主任梁万年表示，综合判断，目前还没有看到有明显的人传人的证据。从治疗上，就是达菲类的抗病毒药，即神经氨酸酶抑制剂是敏感、有效的。
目前发生的所有病例都集中在华东地区，在这个地区和禽类接触可能增加人感染风险，还不知道这个病毒在其他地方有没有发生病例的可能性，但是卫生部门会密切关注这个病毒和疾病发生的情况。公众预防最基本的就是要做好个人卫生，就是尽量减少和禽类的直接接触，和禽类接触之后要尽快及时地洗手。如果发生发热和呼吸道症状之后要及时就诊，同时把... 阅读全帖 |
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e****n
发帖数: 4054 | 46 转载：
今天的新闻中的热点之一莫过于医院活活 把孩子“烤死”，但是从专业的角度来分析
，这是十分可笑而荒谬的，但是普通的民 众碍于没有专业知识，很容易被媒体所误 导
，那么关于此次事件中我们只需要搞清 楚几个问题，很多事情都会有答案了！
一、什么样的孩子需要用保温箱？什么是 中性温度？
什么样的孩子需要使用保温箱？
一般进保温箱的宝宝都是早产儿。因为早 产儿体质虚弱，不能适应外界的环境，所 以
需要在保温箱生活一段时间才可以。
或者有一些疾病因素需要进行温度调整的 婴儿
进保温箱的目的是什么？
这就牵扯到一个概念叫做——中性温度
何谓中性温度？
中性温度（neutral temperature）又名适 中温度适中的环境温度,是指一个范围值,在
此温度中婴儿的代谢率和耗氧量最低。极 低体重早产儿因先天发育不足,体温调节中
枢极不稳定,受不良因素的影响,易发生低体 温或体温不升。
简单的说，人都有一个最适合环境温度， 医学上称为中性温度，在这个环境温度中 ，
人们 皮肤的蒸发、散热量是最低的，整 个新陈代谢率也是处于最低状态。这时人 体
有消耗最少，自己也感到最舒适。适合 于成人中性温度为... 阅读全帖 |
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c***s
发帖数: 70028 | 47 两个孩子就是在这幢楼的楼顶往楼下扔东西。
砸中新婚女子的砖块。
2014年6月8日下午5点钟左右，江阴市璜土镇桃花源小区的一幢24层的高楼前，一名22岁的女子被从顶楼扔下的砖块击中头部，当场死亡。让人意想不到的是，闯下如此弥天大祸的竟然是两名8岁的贪玩男孩。悲痛的死者家属将两个小孩及其监护人，还有小区物业公司一起告上法庭，索赔相关费用70余万元。昨日记者获悉，江阴法院临港开发区法庭日前对此案进行了公开审理，并将于近期宣判。扬子晚报全媒体记者丁波 文/摄
重返现场
小区监控拍到女子被砸过程
当时她坐同事电动车路过该小区
昨天下午，扬子晚报记者赶往事发地江阴璜土镇桃花源小区，小区前面基本上都是高层建筑，后面是一大排别墅区。事发高层住宅位于小区刚进大门的第一排高层中。记者经过几番询问，找到了位于别墅区里的小区物业管理公司，一位工作人员在联系了经理之后告诉记者，经理在外有事，无法接受采访，一切按照律师说法为准。附近的居民还记得几个月前发生在这里的悲剧，一位女士告诉记者，太可惜了，那么年轻的女孩，刚办过喜酒，就遭此横祸。
不幸身亡的女子王芳是安徽人，在江阴一家纺织厂务工，事发前两个月，刚刚办过喜... 阅读全帖 |
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a***s
发帖数: 12296 | 48 王永在从1933年跟随哥哥、台湾“经营之神”王永庆创业，一跟70多年，挣下700亿元新台币身家，兄弟俩缔造了著名的台塑集团。在台塑，王永在一生安于“老二”之位，做王永庆的忠实执行者，并把成就和荣耀都归给王永庆。他的哲学被台湾媒体称为“老二哲学”，备受称道。
“我都是听哥哥的”
当被问及成功秘诀时，王永在一直重复一句话，如果没有跟着哥哥创业，自己说不定在打工。
1921年，王永在出生于台北县一个茶农家庭，由于家里穷，比他大四岁的哥哥、华商韬略报道企业家王永庆15岁就到嘉义打工，在一家米店做学徒。王永庆学徒一年后羽翼丰满，决定自立门户，他从老家借了200元钱，并把王永在带去帮忙。
兄弟俩的分工是哥哥主外，弟弟主内，哥哥决策，弟弟执行，哥哥要弟弟做什么，弟弟就拼了命地去做。王永在说自己就是哥哥的“青瞑牛”（台语：瞎眼牛）。在这种配合下，米店的生意很快红火起来，远近闻名。后来，兄弟俩先后转战木材、石化行业，最终建立台塑集团。
台塑做大后，王永在没有像许多家族企业的老二那样挑战老大的地位，或者分家单干，而是始终维护王永庆的权威和领导。
王永在对王永庆的维护在台面上和台面下始终如一，即便王永庆做错... 阅读全帖 |
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l*******g
发帖数: 27064 | 49 sb 器 人
美拉德反应说成反响
其通常在约140至165℃（280至330°F）进行。 在较高的温度下，焦糖化和随后的裂解
变得更加明显。
所以煮是不可能发生这种反应的
鸡蛋变黑并不是因为这个反应，而是被染色了
另外咖啡，巧克力，各种烤制的坚果，各种烧烤，烤面包……这些都别吃了 |
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m******r
发帖数: 4351 | 50 看这个：
1. 我国台湾海峡约在1.5万年后变为陆地。
2. 全世界的几个大国家都是一个板块上的,比如俄罗斯,美国,巴西,澳洲,印度,
唯独中国是几个小板块拼接而成的
http://210.77.218.4:8080/Resource/GZ/GZDL/DLBL/XDQGPY/6003b010zw_0043.htm
未来5000万年全球板块景观与2.5亿年前，也是最近一次的海陆布局有关。那时全球只
有一块大陆，即联合大陆Pangaea Ⅳ①和一个大洋，即泛大洋Panthalassa Ⅳ。联合大
陆 Pangaea Ⅳ（图7．1）的形成也是其间的许多洋盆多次俯冲和陆—陆碰撞的结果，
因此，周围散布着一些陆块（岛屿）。我国的塔里木、华北及扬子陆块都是当时
Pangaea Ⅳ所属特提斯海（古地中海）中分散的古陆块（图7．2），直到中生代晚白
垩世以后古地磁重建的中国大陆才与现代的中国大陆基本一致（图7．3）。Pangaea Ⅳ
从统一到形成到裂解成现在的海陆布局，大约延续了1.8～2.0亿年②，这是一个由聚合
到开裂的过程，今天的各大陆就是昨天Pangaea Ⅳ的不同碎块。然而发展到今天，从 |
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