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- 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记(八)
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r****o
发帖数: 105
1
本文献给YL
(八)”液体DEAE“
绕了这么大一圈,现在再回到第一个模块的实验来。前面提到Dr.Burgess要我们
试Gudn HCl溶解sigma32之后的重折叠,结果很糟糕。我们接着试了用sarkosyl做
变性剂的蛋白重折叠。步骤和前一个类似,只是这一次是突然稀释至25倍体积。效果
好了很多,至少没有浑浊现象了。接着我们用Poros HS 50,一种阳离子交换柱,
来把可溶的sigma 分离了出来。为什么这一次用Poros HS 50 而不是前面用的阴离
子交换柱呢?因为sarkosyl带负电,会与阴离子交换柱结合得很好。再加上sigma32
很奇怪,既有负电的表面,又有带正电的表面,所以可以用阳离子交换柱。值得一提
的是绝大部分蛋白质都是偏酸性,所以阴离子交换柱用的比阳离子交换柱频繁得多。
好了,聊完离子交换柱,现在回到Dr Burgess要我们作的另一个很重要的实验。
Sigma32在大肠杆菌过表达的时候,绝大部分都是inclusion body,但是也有一部分
是可溶的。这些可溶的sigma 32可以和细菌体内的Core RNA polymerase结合形
成复
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