s******e
发帖数: 1073 | 1 4 度情况下，
大肠杆菌表达的蛋白，可能形成了蛋白间二硫键， 以至于在柱层析时表现不好，我想
得到均一的蛋白，不想让蛋白变性，求教如果加入DTT的话，可以打开已形成的二硫键
吗？ |
O******e
发帖数: 4845 | 2 从理论上来说，表面的二硫键应该可以被打开，但如果你的蛋白形成了complex，那内
部的还是很难被打开。
【在 s******e 的大作中提到】
: 4 度情况下，
: 大肠杆菌表达的蛋白，可能形成了蛋白间二硫键， 以至于在柱层析时表现不好，我想
: 得到均一的蛋白，不想让蛋白变性，求教如果加入DTT的话，可以打开已形成的二硫键
: 吗？
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s******e
发帖数: 1073 | 3 跑SDS-PAGE时看到了一条大约于蛋白分子量的带，说明是二聚体吗？二聚体是不是会比
较容易打开？DTT的浓度多大为好呢？
谢谢！ |
O******e
发帖数: 4845 | 4 SDS-PAGE不会看到二聚体
【在 s******e 的大作中提到】
: 跑SDS-PAGE时看到了一条大约于蛋白分子量的带，说明是二聚体吗？二聚体是不是会比
: 较容易打开？DTT的浓度多大为好呢？
: 谢谢！
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h*****t
发帖数: 1226 | 5 redcuing gel? if so, you will not see dimer, maybe it is just a contaminant
【在 s******e 的大作中提到】
: 跑SDS-PAGE时看到了一条大约于蛋白分子量的带，说明是二聚体吗？二聚体是不是会比
: 较容易打开？DTT的浓度多大为好呢？
: 谢谢！
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v***a
发帖数: 1242 | 6 大约于？是约大于的typo吗？
有时也可能是不同组织细胞中蛋白会有不同的modification，或者isoform，分子量就
会有上下浮动的。
【在 s******e 的大作中提到】
: 跑SDS-PAGE时看到了一条大约于蛋白分子量的带，说明是二聚体吗？二聚体是不是会比
: 较容易打开？DTT的浓度多大为好呢？
: 谢谢！
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g*****p
发帖数: 451 | 7 这个基本上不太可能是蛋白表达时生成的(如果你真的发现蛋白间有二硫键的话）
E.coli在细胞胞质里有thioredoxin,glutathione等还原系统
除非你的蛋白是membrane protein或者secret 到periplasm才会有DsbG等系统把二硫键
形成
如果是因为aging形成的缘故，加0.1-0.5mM TCEP/1 mM DTT/5-10mM belta
mercaptoethanol
(价格由高到低）就可以了
【在 s******e 的大作中提到】
: 4 度情况下，
: 大肠杆菌表达的蛋白，可能形成了蛋白间二硫键， 以至于在柱层析时表现不好，我想
: 得到均一的蛋白，不想让蛋白变性，求教如果加入DTT的话，可以打开已形成的二硫键
: 吗？
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g*********5
发帖数: 2533 | 8 if you don't add dtt in loading buffer,
you could see dimer.
I AM doing this experiment now...
【在 O******e 的大作中提到】
: SDS-PAGE不会看到二聚体
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O******e
发帖数: 4845 | 9 You are right. But I'm more comfortable of using native gels to study
oligomers.
【在 g*********5 的大作中提到】
: if you don't add dtt in loading buffer,
: you could see dimer.
: I AM doing this experiment now...
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