s******e 发帖数: 1073 | 1 4 度情况下,
大肠杆菌表达的蛋白,可能形成了蛋白间二硫键, 以至于在柱层析时表现不好,我想
得到均一的蛋白,不想让蛋白变性,求教如果加入DTT的话,可以打开已形成的二硫键
吗? |
O******e 发帖数: 4845 | 2 从理论上来说,表面的二硫键应该可以被打开,但如果你的蛋白形成了complex,那内
部的还是很难被打开。
【在 s******e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 4 度情况下, : 大肠杆菌表达的蛋白,可能形成了蛋白间二硫键, 以至于在柱层析时表现不好,我想 : 得到均一的蛋白,不想让蛋白变性,求教如果加入DTT的话,可以打开已形成的二硫键 : 吗?
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s******e 发帖数: 1073 | 3 跑SDS-PAGE时看到了一条大约于蛋白分子量的带,说明是二聚体吗?二聚体是不是会比
较容易打开?DTT的浓度多大为好呢?
谢谢! |
O******e 发帖数: 4845 | 4 SDS-PAGE不会看到二聚体
【在 s******e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 跑SDS-PAGE时看到了一条大约于蛋白分子量的带,说明是二聚体吗?二聚体是不是会比 : 较容易打开?DTT的浓度多大为好呢? : 谢谢!
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h*****t 发帖数: 1226 | 5 redcuing gel? if so, you will not see dimer, maybe it is just a contaminant
【在 s******e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 跑SDS-PAGE时看到了一条大约于蛋白分子量的带,说明是二聚体吗?二聚体是不是会比 : 较容易打开?DTT的浓度多大为好呢? : 谢谢!
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v***a 发帖数: 1242 | 6 大约于?是约大于的typo吗?
有时也可能是不同组织细胞中蛋白会有不同的modification,或者isoform,分子量就
会有上下浮动的。
【在 s******e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 跑SDS-PAGE时看到了一条大约于蛋白分子量的带,说明是二聚体吗?二聚体是不是会比 : 较容易打开?DTT的浓度多大为好呢? : 谢谢!
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g*****p 发帖数: 451 | 7 这个基本上不太可能是蛋白表达时生成的(如果你真的发现蛋白间有二硫键的话)
E.coli在细胞胞质里有thioredoxin,glutathione等还原系统
除非你的蛋白是membrane protein或者secret 到periplasm才会有DsbG等系统把二硫键
形成
如果是因为aging形成的缘故,加0.1-0.5mM TCEP/1 mM DTT/5-10mM belta
mercaptoethanol
(价格由高到低)就可以了
【在 s******e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 4 度情况下, : 大肠杆菌表达的蛋白,可能形成了蛋白间二硫键, 以至于在柱层析时表现不好,我想 : 得到均一的蛋白,不想让蛋白变性,求教如果加入DTT的话,可以打开已形成的二硫键 : 吗?
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g*********5 发帖数: 2533 | 8 if you don't add dtt in loading buffer,
you could see dimer.
I AM doing this experiment now...
【在 O******e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : SDS-PAGE不会看到二聚体
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O******e 发帖数: 4845 | 9 You are right. But I'm more comfortable of using native gels to study
oligomers.
【在 g*********5 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : if you don't add dtt in loading buffer, : you could see dimer. : I AM doing this experiment now...
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