w********r
发帖数: 1431 | 1 小弟最近在做skeletal muscle切片，
肌肉PFA固定/15%蔗糖/30%蔗糖后OCT包埋做冰冻切片，切6-8uM，
切完之后心拔凉拔凉滴，片子支离破碎，
求各位高手指点~~
多谢多谢！ |
h*******o
发帖数: 4884 | 2 我们实验室有一段时间也不知道怎么回事，brain section出来的也有好多洞;
同样的方法２个月前一点问题都没有
最后把ＯＣＴ包埋后立刻冷冻这一步改成液氮了就好了 |
D*a
发帖数: 6830 | 3 PFA固定了为啥还要冷冻阿，直接parafin不就行了？ |
m*p
发帖数: 226 | 4 OCT quality is another consideration. |
m*p
发帖数: 226 | 5 however, frozen section, 6um/section is hard. I am not surprised. |
M*****n
发帖数: 16729 | 6 Frozen section 6um is doable, but difficult.
i guess it may still that the temperature is not low enough when freezing
the block. |
w********r
发帖数: 1431 | 7 用的SAKURA Tissue-Tek OCT compound
那家的比较好？
【在 m*p 的大作中提到】
: OCT quality is another consideration.
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l*****4
发帖数: 267 | 8 SAKURA Tissue-Tek OCT compound 这个应该没问题吧
也许调整一下切片时的温度会有帮助 |
h****g
发帖数: 439 | 9 PFA固定后，冷冻的时候别用液氮。用干冰会好很多。
当然，这也和组织类型有关系，没切过肌肉 |
i****f
发帖数: 979 | 10 好薄啊，能不能切厚一点？
另外确实要OCT包埋后迅速冷冻 |
h****g
发帖数: 439 | 11 我的经验是，PFA固定的组织，不能速冻，要干冰慢慢冻
我们都切5um，好好的
【在 i****f 的大作中提到】
: 好薄啊，能不能切厚一点？
: 另外确实要OCT包埋后迅速冷冻
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r*********s
发帖数: 1027 | 12 muscle还是很好切的。首先换把刀片，即使同一批刀片，锋利程度也不一样。调整角度
，刀片和block尽量平行。切片的时候，试试把温度提高1-2度，稍微软化一点，看看会
不会比较完整。或者转90度不同的方向切，可能顺着纹理好切。组织里不要有脂肪。
【在 w********r 的大作中提到】
: 小弟最近在做skeletal muscle切片，
: 肌肉PFA固定/15%蔗糖/30%蔗糖后OCT包埋做冰冻切片，切6-8uM，
: 切完之后心拔凉拔凉滴，片子支离破碎，
: 求各位高手指点~~
: 多谢多谢！
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