w********r 发帖数: 1431 | 1 小弟最近在做skeletal muscle切片,
肌肉PFA固定/15%蔗糖/30%蔗糖后OCT包埋做冰冻切片,切6-8uM,
切完之后心拔凉拔凉滴,片子支离破碎,
求各位高手指点~~
多谢多谢! |
h*******o 发帖数: 4884 | 2 我们实验室有一段时间也不知道怎么回事,brain section出来的也有好多洞;
同样的方法2个月前一点问题都没有
最后把OCT包埋后立刻冷冻这一步改成液氮了就好了 |
D*a 发帖数: 6830 | 3 PFA固定了为啥还要冷冻阿,直接parafin不就行了? |
m*p 发帖数: 226 | 4 OCT quality is another consideration. |
m*p 发帖数: 226 | 5 however, frozen section, 6um/section is hard. I am not surprised. |
M*****n 发帖数: 16729 | 6 Frozen section 6um is doable, but difficult.
i guess it may still that the temperature is not low enough when freezing
the block. |
w********r 发帖数: 1431 | 7 用的SAKURA Tissue-Tek OCT compound
那家的比较好?
【在 m*p 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : OCT quality is another consideration.
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l*****4 发帖数: 267 | 8 SAKURA Tissue-Tek OCT compound 这个应该没问题吧
也许调整一下切片时的温度会有帮助 |
h****g 发帖数: 439 | 9 PFA固定后,冷冻的时候别用液氮。用干冰会好很多。
当然,这也和组织类型有关系,没切过肌肉 |
i****f 发帖数: 979 | 10 好薄啊,能不能切厚一点?
另外确实要OCT包埋后迅速冷冻 |
h****g 发帖数: 439 | 11 我的经验是,PFA固定的组织,不能速冻,要干冰慢慢冻
我们都切5um,好好的
【在 i****f 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 好薄啊,能不能切厚一点? : 另外确实要OCT包埋后迅速冷冻
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r*********s 发帖数: 1027 | 12 muscle还是很好切的。首先换把刀片,即使同一批刀片,锋利程度也不一样。调整角度
,刀片和block尽量平行。切片的时候,试试把温度提高1-2度,稍微软化一点,看看会
不会比较完整。或者转90度不同的方向切,可能顺着纹理好切。组织里不要有脂肪。
【在 w********r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 小弟最近在做skeletal muscle切片, : 肌肉PFA固定/15%蔗糖/30%蔗糖后OCT包埋做冰冻切片,切6-8uM, : 切完之后心拔凉拔凉滴,片子支离破碎, : 求各位高手指点~~ : 多谢多谢!
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