t*******n
发帖数: 446 | 1 我们实验室做表达一般是这样的：头天新鲜转化的平板，第二天早上挖下一堆克隆转到
100-200ml LB的培养基中37度摇到OD1.0，离心后转到新鲜配制过滤的N15标记的1升M9培养基中，37度摇到OD1.0后加IPTG诱导。
一直以来都很顺利，不过这一段时间出了怪事：M9培养基扩增的时候OD值升到0.5-0.6的时候就突然开始猛降，培养基也变得澄清，OD值降到大概0.1。如果接着摇OD值还能再升回来，摇过夜的话还能升到1.5左右。培养基中有很多白色絮状物，闻上去不像大肠杆菌的味。这个时候加IPTG诱导，有时能拿到自己的蛋白，有时候拿不到。
大家帮我看看是什么污染？ |
p****s
发帖数: 3153 | 2 我猜跟抗生素有关，但具体为什么我不知道
M9培养基中，37度摇到OD1.0
后加IPTG诱导。
6的时候就突然开始猛降，培养基
也变得澄清，OD值降到大概0.1。如果接着摇OD值还能再升回来，摇过夜的话还能升到1
.5左右。培养基中有很多白色絮
状物，闻上去不像大肠杆菌的味。这个时候加IPTG诱导，有时能拿到自己的蛋白，有时
候拿不到。
【在 t*******n 的大作中提到】
: 我们实验室做表达一般是这样的：头天新鲜转化的平板，第二天早上挖下一堆克隆转到
: 100-200ml LB的培养基中37度摇到OD1.0，离心后转到新鲜配制过滤的N15标记的1升M9培养基中，37度摇到OD1.0后加IPTG诱导。
: 一直以来都很顺利，不过这一段时间出了怪事：M9培养基扩增的时候OD值升到0.5-0.6的时候就突然开始猛降，培养基也变得澄清，OD值降到大概0.1。如果接着摇OD值还能再升回来，摇过夜的话还能升到1.5左右。培养基中有很多白色絮状物，闻上去不像大肠杆菌的味。这个时候加IPTG诱导，有时能拿到自己的蛋白，有时候拿不到。
: 大家帮我看看是什么污染？
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t****x
发帖数: 1429 | 3 很有可能是 phage contamination. 因为OD会下降，出现白色絮状物。 不过不知道为什么过夜还
能长到1.5， 而且加了IPTG， 有时候还能拿到蛋白。 |
T**********t
发帖数: 1604 | 4 看起来很像phage contamination。
我碰到过类似的情况，不过不是外来的phage contamination，更像是大肠杆菌里自带
的phage进入了lytic cycle。我那次是因为培养箱温度显示出错，实际温度过高造成的
，后来把温度调低了就好了。你检查一下你的培养箱温度看看。 |
t*******n
发帖数: 446 | 5 我们也想过是phage污染，不过因为还能长起来，所以就排除了。大肠杆菌自己带的
phage污染是什么机理呢？如何解决？
我们有两个培养箱，应该不至于都坏掉的。 |
T**********t
发帖数: 1604 | 6 我原来在版上发过帖子问过的：
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31400349.html
你看看和你的culture长得像不像。
实验室表达蛋白用的大肠杆菌菌株都不是野生型的，通过基因改造改良了很多性状。其
中不少是通过噬菌体转染的手段整合到大肠杆菌基因组的。比方说名字含有DE3的菌株
，就是溶源性整合了λ-DE3噬菌体，用于表达T7 RNA polymerase。溶源性噬菌体一般
不会裂解，而是随宿主细胞一起复制。但是极少数情况下会产生自发裂解或者诱发裂解
。我上次碰到的情况是和培养箱温度有关，有可能是培养箱温度过高诱发了噬菌体裂解
，但是其他的一些极端条件也可能会是裂解的诱因。
大部分情况下溶源性噬菌体被诱发裂解是因为宿主细胞遇到了不利的生存条件，我觉得
在你的情况下，会不会有可能是因为minimal培养基营养不够？你试试改改培养基的配
方看？不过我上次在买了新的感受态细胞重新转化之后，对温度也不敏感了，所以也许
换一个新的strain也有用。 |
C*********m
发帖数: 213 | 7 春天来了，虫子多了。你的应该是Phage 污染了。
M9培养基中，37度摇到OD1.0后加IPTG诱导。
6的时候就突然开始猛降，培养基也变得澄清，OD值降到大概0.1。如果接着摇OD值还能
再升回来，摇过夜的话还能升到1.5左右。培养基中有很多白色絮状物，闻上去不像大
肠杆菌的味。这个时候加IPTG诱导，有时能拿到自己的蛋白，有时候拿不到。
【在 t*******n 的大作中提到】
: 我们实验室做表达一般是这样的：头天新鲜转化的平板，第二天早上挖下一堆克隆转到
: 100-200ml LB的培养基中37度摇到OD1.0，离心后转到新鲜配制过滤的N15标记的1升M9培养基中，37度摇到OD1.0后加IPTG诱导。
: 一直以来都很顺利，不过这一段时间出了怪事：M9培养基扩增的时候OD值升到0.5-0.6的时候就突然开始猛降，培养基也变得澄清，OD值降到大概0.1。如果接着摇OD值还能再升回来，摇过夜的话还能升到1.5左右。培养基中有很多白色絮状物，闻上去不像大肠杆菌的味。这个时候加IPTG诱导，有时能拿到自己的蛋白，有时候拿不到。
: 大家帮我看看是什么污染？
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t*******n
发帖数: 446 | 8 多谢回复！我的培养产物先是变得很澄清像你的第一张图，摇过夜后又长回来，像你的
第二张图。倒是没什么泡沫，闻上去像酵母，不过酵母应该不会杀细菌吧？有一次我把
同一瓶LB种子培养基扩增的菌体离心后分到两瓶M9中，结果一瓶正常，一瓶出状况。所
以我不确定是不是是培养箱的问题。我今天看了一篇文章讲可以放缓细菌生长的速度来
抑制噬菌体引起的细菌裂解，文章是建议用20度来扩增细菌，不知道有没有人这样试过
，大概从0.1括增到1.0需要多久？
【在 T**********t 的大作中提到】
: 我原来在版上发过帖子问过的：
: http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31400349.html
: 你看看和你的culture长得像不像。
: 实验室表达蛋白用的大肠杆菌菌株都不是野生型的，通过基因改造改良了很多性状。其
: 中不少是通过噬菌体转染的手段整合到大肠杆菌基因组的。比方说名字含有DE3的菌株
: ，就是溶源性整合了λ-DE3噬菌体，用于表达T7 RNA polymerase。溶源性噬菌体一般
: 不会裂解，而是随宿主细胞一起复制。但是极少数情况下会产生自发裂解或者诱发裂解
: 。我上次碰到的情况是和培养箱温度有关，有可能是培养箱温度过高诱发了噬菌体裂解
: ，但是其他的一些极端条件也可能会是裂解的诱因。
: 大部分情况下溶源性噬菌体被诱发裂解是因为宿主细胞遇到了不利的生存条件，我觉得
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Z******5
发帖数: 435 | |
