s******3 发帖数: 28 | 1 蛋白本身不长,才50个不到aa,但是有8个cysteine!之前做表达用大肠融合表达,切了
之后就沉淀啦,估计是二硫键氧化后聚集啦,后来先在空气中把溶菌液搅拌加过氧化氢
氧化,再切,发现切不掉啦,没办法,老板让做真菌和植物,觉得不怎么靠谱呀,因为
蛋白本身就是抗真菌的。哪位前辈给点提示吧,这个做包涵体然后复性有戏吗?或者其
他什么比较高效点的表达系统?有人做过类似的东西么?谢谢呀 |
p****s 发帖数: 3153 | 2 我觉得这老板胡出主意,要是真菌植物那么好做大家都还用大肠杆菌干嘛?关键你没说
清楚,蛋白是可溶的还是在包涵体里?如果是可溶的为什么能用包涵体复性?“切”是
什么意思?cysteine这种东西不能用过氧化氢吧,很容易氧化成磺酸。以前没人做过这
个蛋白么?找找类似的文章。
【在 s******3 的大作中提到】 : 蛋白本身不长,才50个不到aa,但是有8个cysteine!之前做表达用大肠融合表达,切了 : 之后就沉淀啦,估计是二硫键氧化后聚集啦,后来先在空气中把溶菌液搅拌加过氧化氢 : 氧化,再切,发现切不掉啦,没办法,老板让做真菌和植物,觉得不怎么靠谱呀,因为 : 蛋白本身就是抗真菌的。哪位前辈给点提示吧,这个做包涵体然后复性有戏吗?或者其 : 他什么比较高效点的表达系统?有人做过类似的东西么?谢谢呀
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C*********m 发帖数: 213 | 3 查granulin 的NMR 结构文章在protein science上,是用变性复性,HPLC纯化的。
【在 s******3 的大作中提到】 : 蛋白本身不长,才50个不到aa,但是有8个cysteine!之前做表达用大肠融合表达,切了 : 之后就沉淀啦,估计是二硫键氧化后聚集啦,后来先在空气中把溶菌液搅拌加过氧化氢 : 氧化,再切,发现切不掉啦,没办法,老板让做真菌和植物,觉得不怎么靠谱呀,因为 : 蛋白本身就是抗真菌的。哪位前辈给点提示吧,这个做包涵体然后复性有戏吗?或者其 : 他什么比较高效点的表达系统?有人做过类似的东西么?谢谢呀
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C*********m 发帖数: 213 | 4 还有,可以用thioredoxin-tag试试,纯化的时候不加还原剂。
【在 C*********m 的大作中提到】 : 查granulin 的NMR 结构文章在protein science上,是用变性复性,HPLC纯化的。
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W*****o 发帖数: 1780 | 5 Vector pET22b is good at expression of soluble proteins with disulfide bonds
in E.coli without any tag. |
C*********4 发帖数: 40 | 6 是不是还要看表达蛋白的e.coli,可以试试rosetta-gami,这种细菌表达含有二硫键的蛋
白好像不错 |
m**a 发帖数: 1228 | 7 先试试这个
我们以前一个类似的蛋白就是用pET22b在
periplasmic表达的
纯化的时候freeze/thaw,不用破菌
bonds
【在 W*****o 的大作中提到】 : Vector pET22b is good at expression of soluble proteins with disulfide bonds : in E.coli without any tag.
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