s*********t
发帖数: 600 | 1 用E coli表达的GST蛋白，自身约50KD，免疫兔子。是切掉GST好，还是不切好？
还有，最后纯化下来的蛋白里面有一些20多K的杂蛋白，量比较大。怎么把我的蛋白和其他蛋白分开，进一步纯化？
多谢指点！ |
s********n
发帖数: 2939 | |
S******e
发帖数: 393 | 3 等回答
(理论上不切应没问题，但我想应是切了更好) |
y******8
发帖数: 1764 | 4 Doesn't matter. Use pure GST to deplete anti-GST antibody, or use protein
with another tag to purify specific antibody.
20kd protein could be GST only, typical with purified GST-fusion protein. |
f********n
发帖数: 6465 | |
m******5
发帖数: 1383 | 6 还是切吧，我以前同事不切干过，结果大多数都是GST抗体，GST抗原性实在太强了 |
s****9
发帖数: 932 | 7 For an 50KD protein, there is no reason to keep GST. For some peptide
antigen (e.g. 50 peptides), you might consider keep GST in order to amply
the antibody responses.
For removing 20KD protein from 50KD proteins, the first portion I would
consider is 25KD-30KD dialysis.
和其他蛋白分开，进一步纯化？
【在 s*********t 的大作中提到】
: 用E coli表达的GST蛋白，自身约50KD，免疫兔子。是切掉GST好，还是不切好？
: 还有，最后纯化下来的蛋白里面有一些20多K的杂蛋白，量比较大。怎么把我的蛋白和其他蛋白分开，进一步纯化？
: 多谢指点！
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g*********5
发帖数: 2533 | 8 你的蛋白50kd+26kdgst，
用millipore的小柱子，50kda cut的离心，小于50kda的蛋白就分开了。
和其他蛋白分开，进一步纯化？
【在 s*********t 的大作中提到】
: 用E coli表达的GST蛋白，自身约50KD，免疫兔子。是切掉GST好，还是不切好？
: 还有，最后纯化下来的蛋白里面有一些20多K的杂蛋白，量比较大。怎么把我的蛋白和其他蛋白分开，进一步纯化？
: 多谢指点！
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