m*****u
发帖数: 15526 | 1 用的Cre YFP reporter mice.想观察YFP+细胞在皮肤分布情况。4%PFA固定后镜下看发
现有自发荧光。也可能YFP有淬灭，很难区分。求哪位大佬给一个好用的protocol。包
子酬谢。 |
s******y
发帖数: 28562 | 2 直接用组织切片看荧光蛋白很难的，因为背景很强。一般都是用荧光蛋白的抗体来
检测，而不是直接看荧光蛋白。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 用的Cre YFP reporter mice.想观察YFP+细胞在皮肤分布情况。4%PFA固定后镜下看发
: 现有自发荧光。也可能YFP有淬灭，很难区分。求哪位大佬给一个好用的protocol。包
: 子酬谢。
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z****u
发帖数: 1007 | 3 推荐JAX的 ZsGreen flox 和 TdTomato flox. Allen Institute的Hongkui Zeng建的。
都是非常好的fluorescent reporter. 能直接看到荧光。 |
m*****u
发帖数: 15526 | 4 已经用了YFP,不想再花时间构建另外品系。不过谢谢建议
【在 z****u 的大作中提到】
: 推荐JAX的 ZsGreen flox 和 TdTomato flox. Allen Institute的Hongkui Zeng建的。
: 都是非常好的fluorescent reporter. 能直接看到荧光。
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m*****u
发帖数: 15526 | 5 是么？我做flow cytometry区别还是很明显的。
【在 s******y 的大作中提到】
: 直接用组织切片看荧光蛋白很难的，因为背景很强。一般都是用荧光蛋白的抗体来
: 检测，而不是直接看荧光蛋白。
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z****u
发帖数: 1007 | 6 flowcytometry敏感得多。
反正到现在为止，除了Hongkui Zeng建的那几个REPORTER,别的没哪个reporter能在我
研究的组织里有足够强的直接荧光。 |
m*****u
发帖数: 15526 | 7 多谢。看来只能染抗体了。
【在 z****u 的大作中提到】
: flowcytometry敏感得多。
: 反正到现在为止，除了Hongkui Zeng建的那几个REPORTER,别的没哪个reporter能在我
: 研究的组织里有足够强的直接荧光。
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s******y
发帖数: 28562 | 8 对，而且flowcytometry 都是把细胞打散了单个单个的跑过去，所以背景非常低
（背景就是缓冲液了，能有多少自发荧光？）。
而组织里面的话，一大堆有自发荧光的东西在那里摆着，别的不说，光是血液里的
红细胞就能让人欲哭无泪，荧光太强了！
【在 z****u 的大作中提到】
: flowcytometry敏感得多。
: 反正到现在为止，除了Hongkui Zeng建的那几个REPORTER,别的没哪个reporter能在我
: 研究的组织里有足够强的直接荧光。
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D*a
发帖数: 6830 | 9 Hongkui Zeng的TdTomato flox. 确实很强，我们建了个全身敲除的positive对照系，
大白天老鼠都是红的，都不用做genotyping。 |
m*****u
发帖数: 15526 | |
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s******y
发帖数: 28562 | 11 Clontech 的不错，就是有点贵，要省着用
【在 m*****u 的大作中提到】
: 求推荐个好用的YFP抗体。谢谢
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h********n
发帖数: 4079 | 12 能给个JAX的链接或者号码吗? 谢谢.
【在 z****u 的大作中提到】
: flowcytometry敏感得多。
: 反正到现在为止，除了Hongkui Zeng建的那几个REPORTER,别的没哪个reporter能在我
: 研究的组织里有足够强的直接荧光。
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m*****u
发帖数: 15526 | 13 查了一下，发现有好多。有的是做western和IP的，老大能不能好人做到底，给个cat
no或具体名字？那个dsred的抗体能用么？clontech给的表上是TBD, 有promotion
【在 s******y 的大作中提到】
: Clontech 的不错，就是有点贵，要省着用
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s******y
发帖数: 28562 | 14 等我一会去看看。。。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 查了一下，发现有好多。有的是做western和IP的，老大能不能好人做到底，给个cat
: no或具体名字？那个dsred的抗体能用么？clontech给的表上是TBD, 有promotion
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s******y
发帖数: 28562 | 15 632381 或者632380 都可以。他们正好在打折，要买赶快买：）
【在 m*****u 的大作中提到】
: 查了一下，发现有好多。有的是做western和IP的，老大能不能好人做到底，给个cat
: no或具体名字？那个dsred的抗体能用么？clontech给的表上是TBD, 有promotion
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l**********1
发帖数: 5204 | 16 Water world 被轰出水来啦 哈
sunny 这身装束
BTW sunny 把人家 岩佐mm PI 收成压寨的如何
搞的都是 激动蛋白类 哈
Janet Iwasa received her Ph.D. from the University of California, San
Francisco working on actin cytoskeleton dynamics with Dyche Mullins.
she joined the faculty at Harvard Medical School in 2008.
http://cellbio.med.harvard.edu/faculty/iwasa/
【在 s******y 的大作中提到】
: 632381 或者632380 都可以。他们正好在打折，要买赶快买：）
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z****u
发帖数: 1007 | 17 tdtomato Jax 007909
zsgreen Jax007906
【在 h********n 的大作中提到】
: 能给个JAX的链接或者号码吗? 谢谢.
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h********n
发帖数: 4079 | 18 thanks
【在 z****u 的大作中提到】
: tdtomato Jax 007909
: zsgreen Jax007906
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h********n
发帖数: 4079 | 19 thanks
【在 s******y 的大作中提到】
: 632381 或者632380 都可以。他们正好在打折，要买赶快买：）
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d****d
发帖数: 214 | 20 PFA处理会减弱荧光蛋白的信号，但不会完全淬灭。其结果就是强的变弱，弱的变成看
不见。当然为了排除自发荧光，可以用GFP的抗体（我们用的是Invitrogen 的rabbit
antibody， 1：300 稀释），而且用不同于绿色的conjugate(比如说红色）。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 用的Cre YFP reporter mice.想观察YFP+细胞在皮肤分布情况。4%PFA固定后镜下看发
: 现有自发荧光。也可能YFP有淬灭，很难区分。求哪位大佬给一个好用的protocol。包
: 子酬谢。
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m*****u
发帖数: 15526 | 21 多谢。我这是自身免疫病老鼠，皮肤可能有autoantibodies deposition。用鼠抗可能
背景会很高。有合适的rabbit或rat抗体么？
【在 s******y 的大作中提到】
: 632381 或者632380 都可以。他们正好在打折，要买赶快买：）
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s******y
发帖数: 28562 | 22 人家是大牛之后，怎么会看得上我们这些旁门左道出来的吊丝。
【在 l**********1 的大作中提到】
: Water world 被轰出水来啦 哈
: sunny 这身装束
: BTW sunny 把人家 岩佐mm PI 收成压寨的如何
: 搞的都是 激动蛋白类 哈
: Janet Iwasa received her Ph.D. from the University of California, San
: Francisco working on actin cytoskeleton dynamics with Dyche Mullins.
: she joined the faculty at Harvard Medical School in 2008.
: http://cellbio.med.harvard.edu/faculty/iwasa/
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s******y
发帖数: 28562 | 23 大部分polyclonal anti-GFP 抗体也能识别 YFP的。
【在 m*****u 的大作中提到】
: 多谢。我这是自身免疫病老鼠，皮肤可能有autoantibodies deposition。用鼠抗可能
: 背景会很高。有合适的rabbit或rat抗体么？
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P****o
发帖数: 172 | 24 We use Chicken (IgY)-anti-GFP (Invitrogen, A10262) to detect YFP on 2% PFA
fixed tisses. It works very well.
【在 m*****u 的大作中提到】
: 多谢。我这是自身免疫病老鼠，皮肤可能有autoantibodies deposition。用鼠抗可能
: 背景会很高。有合适的rabbit或rat抗体么？
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m*****u
发帖数: 15526 | 25 thank you.
【在 d****d 的大作中提到】
: PFA处理会减弱荧光蛋白的信号，但不会完全淬灭。其结果就是强的变弱，弱的变成看
: 不见。当然为了排除自发荧光，可以用GFP的抗体（我们用的是Invitrogen 的rabbit
: antibody， 1：300 稀释），而且用不同于绿色的conjugate(比如说红色）。
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g*********5
发帖数: 2533 | 26 他最近不是在买车吗？
【在 l**********1 的大作中提到】
: Water world 被轰出水来啦 哈
: sunny 这身装束
: BTW sunny 把人家 岩佐mm PI 收成压寨的如何
: 搞的都是 激动蛋白类 哈
: Janet Iwasa received her Ph.D. from the University of California, San
: Francisco working on actin cytoskeleton dynamics with Dyche Mullins.
: she joined the faculty at Harvard Medical School in 2008.
: http://cellbio.med.harvard.edu/faculty/iwasa/
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s******y
发帖数: 28562 | 27 买车的不是我。。。
【在 g*********5 的大作中提到】
: 他最近不是在买车吗？
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g*********5
发帖数: 2533 | 28 哈哈，开个玩笑
【在 s******y 的大作中提到】
: 买车的不是我。。。
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h*****4
发帖数: 36 | 29 4%PFA 会严重削弱YFP的荧光信号 听说用2%的PFA或许会好很多。不知能不能尝试一下
看看。
【在 d****d 的大作中提到】
: PFA处理会减弱荧光蛋白的信号，但不会完全淬灭。其结果就是强的变弱，弱的变成看
: 不见。当然为了排除自发荧光，可以用GFP的抗体（我们用的是Invitrogen 的rabbit
: antibody， 1：300 稀释），而且用不同于绿色的conjugate(比如说红色）。
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