n****3
发帖数: 543 | 1 想利用polyA trap 做基因打靶：long arm-PGK-neo-ires-EGFPFlpe-SD-short arm ，
target 细胞以前整合有Frt-stop-Frt RFP表达盒，平时不表达RFP. 如果转染FLPE表达
质粒，可以切掉stop片段而表达红色萤光。现在想利用polyA trap打靶方法将PGK-neo-
ires-EGFPFlpe－SD片段knockin到目的基因的内含子内. 如果打靶成功，该细胞将可以
表达双荧光，我想尽量减少我筛选打靶事件的工作
转入的片段尽管没有polyA,但启动子和融合蛋白的编码区是完整的，
questions: 那随机整合或瞬时转染会不会也能转录出mRNA(缺少polyA)？如能转录
，这个缺失polyA的mRNA会不会翻译出有功能的EGFPFlpe融合蛋白，并有可能激活红色
荧光蛋白的表达呢？ |
l***y
发帖数: 4671 | 2 听说过 histone mRNA 靠 stem-loop 而不是 poly-A tail。
neo-
【在 n****3 的大作中提到】
: 想利用polyA trap 做基因打靶：long arm-PGK-neo-ires-EGFPFlpe-SD-short arm ，
: target 细胞以前整合有Frt-stop-Frt RFP表达盒，平时不表达RFP. 如果转染FLPE表达
: 质粒，可以切掉stop片段而表达红色萤光。现在想利用polyA trap打靶方法将PGK-neo-
: ires-EGFPFlpe－SD片段knockin到目的基因的内含子内. 如果打靶成功，该细胞将可以
: 表达双荧光，我想尽量减少我筛选打靶事件的工作
: 转入的片段尽管没有polyA,但启动子和融合蛋白的编码区是完整的，
: questions: 那随机整合或瞬时转染会不会也能转录出mRNA(缺少polyA)？如能转录
: ，这个缺失polyA的mRNA会不会翻译出有功能的EGFPFlpe融合蛋白，并有可能激活红色
: 荧光蛋白的表达呢？
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C**S
发帖数: 522 | 3 能转录和翻译。只不过mRNA半衰期会很短，蛋白表达的水平会很低。 |
n****3
发帖数: 543 | |
m******5
发帖数: 1383 | 5 有reference么？
【在 C**S 的大作中提到】
: 能转录和翻译。只不过mRNA半衰期会很短，蛋白表达的水平会很低。
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C**S
发帖数: 522 | 6 我有一次装载体的时候polyA没加上，就导致表达很低。
【在 m******5 的大作中提到】
: 有reference么？
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n****3
发帖数: 543 | 7 是mRNA还是蛋白水平。我就是希望蛋白水平低到不足以切割
【在 C**S 的大作中提到】
: 我有一次装载体的时候polyA没加上，就导致表达很低。
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C**S
发帖数: 522 | 8 蛋白
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8
【在 n****3 的大作中提到】
: 是mRNA还是蛋白水平。我就是希望蛋白水平低到不足以切割
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