s*********y
发帖数: 387 | 1 Biotin-ABCDEFG（Biotin在N末端偶联的一个15短肽）。
做的是这个短肽的浓度梯度包被，从50微克每毫升开始，4倍梯度稀释，共10个梯度，
明胶封闭，Streptavidin-HRP二抗显色。结果如附件所示
浓度稀释的越低，反应反而越高，Streptavidin-HRP二抗对不包被抗原的孔是阴性的。
但是值得一提的是，我们的阳性对照，Biotin-IgG，来包被的时候，也发现最高的反应
浓度是在包被的一个中间位置，而不是包被浓度最高或者最低的浓度。
请大家帮忙分析下。 |
e****s
发帖数: 1125 | 2 感觉要从多肽的性质来分析了。
比如，多肽的溶解性怎么样？是不是需要高浓度的DMSO之类的来溶解，特别是高浓度的
多肽。这溶液中的有机溶剂是不是对多肽和抗原的作用有影响。如果是的化，你这更可
能是溶剂的dose dependent 影响。 |
T*****u
发帖数: 3257 | 3 我以前做过一个，也是这样的，不太懂
【在 s*********y 的大作中提到】
: Biotin-ABCDEFG（Biotin在N末端偶联的一个15短肽）。
: 做的是这个短肽的浓度梯度包被，从50微克每毫升开始，4倍梯度稀释，共10个梯度，
: 明胶封闭，Streptavidin-HRP二抗显色。结果如附件所示
: 浓度稀释的越低，反应反而越高，Streptavidin-HRP二抗对不包被抗原的孔是阴性的。
: 但是值得一提的是，我们的阳性对照，Biotin-IgG，来包被的时候，也发现最高的反应
: 浓度是在包被的一个中间位置，而不是包被浓度最高或者最低的浓度。
: 请大家帮忙分析下。
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s*********y
发帖数: 387 | 4 thanks. no DMSO is used in our system.
All in PBS or water buffer. the solubility of the peptide is very good.
Also, the Biotin-conjugated IgG has the same phenotype, but we can see an
obvious bell shaped curve, for the peptide it is a exponential growth curve,
making the interpretion intriguing...
【在 e****s 的大作中提到】
: 感觉要从多肽的性质来分析了。
: 比如，多肽的溶解性怎么样？是不是需要高浓度的DMSO之类的来溶解，特别是高浓度的
: 多肽。这溶液中的有机溶剂是不是对多肽和抗原的作用有影响。如果是的化，你这更可
: 能是溶剂的dose dependent 影响。
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d********n
发帖数: 15 | 5 I guess:
1. Parital Biotinylation. Non-Biotinylated peptides is coated preferentially
.
2. Reduced exposure of epitopes when coated at high concentration.
【在 s*********y 的大作中提到】
: Biotin-ABCDEFG（Biotin在N末端偶联的一个15短肽）。
: 做的是这个短肽的浓度梯度包被，从50微克每毫升开始，4倍梯度稀释，共10个梯度，
: 明胶封闭，Streptavidin-HRP二抗显色。结果如附件所示
: 浓度稀释的越低，反应反而越高，Streptavidin-HRP二抗对不包被抗原的孔是阴性的。
: 但是值得一提的是，我们的阳性对照，Biotin-IgG，来包被的时候，也发现最高的反应
: 浓度是在包被的一个中间位置，而不是包被浓度最高或者最低的浓度。
: 请大家帮忙分析下。
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s*********y
发帖数: 387 | 6 Thanks.
I agree your 2nd guess makes every senes, but the question is possible?
And The biotin-conjugation shall be good. So, 1st point shall be not
possible.
BTW, do you think it is some observation signficant and interesting?
preferentially
【在 d********n 的大作中提到】
: I guess:
: 1. Parital Biotinylation. Non-Biotinylated peptides is coated preferentially
: .
: 2. Reduced exposure of epitopes when coated at high concentration.
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e****s
发帖数: 1125 | 7 Just a guess,
Is it possible:
These peptides are dimers or oligomers at high concentration, which can't
bind the targeted protein. At low concentration, the oligomers dissociate to
monomer, which can bind. |
l******a
发帖数: 3339 | 8 正常，板上coat的太多了，量远远大于二抗的量，如果不好好洗，残留的没有coat的或
者losely coat的，在后面洗的过程中会把二抗大部分带走。一般根据一抗coat的浓度
会有一个先上再下的curve。
【在 s*********y 的大作中提到】
: Biotin-ABCDEFG（Biotin在N末端偶联的一个15短肽）。
: 做的是这个短肽的浓度梯度包被，从50微克每毫升开始，4倍梯度稀释，共10个梯度，
: 明胶封闭，Streptavidin-HRP二抗显色。结果如附件所示
: 浓度稀释的越低，反应反而越高，Streptavidin-HRP二抗对不包被抗原的孔是阴性的。
: 但是值得一提的是，我们的阳性对照，Biotin-IgG，来包被的时候，也发现最高的反应
: 浓度是在包被的一个中间位置，而不是包被浓度最高或者最低的浓度。
: 请大家帮忙分析下。
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