z**b 发帖数: 192 | 1 与蛋白质结合的DNA用酶处理后需提纯。难点在于结合的蛋白质不能去除,蛋白不能变
性,这样就不能用phenol/chloroform或spin column的方法了。请教各位有没有简单可
行的方法,在下先行谢过了。 |
m*********D 发帖数: 1727 | 2 你是要纯化总个DNA-protein complex还是拆开complex就纯化DNA?一般DNA-protein结
合,需要一定的盐浓度,高KCl浓度,象300mM就可以了。这是许多纯化DNA/RNA
binding protein,从affinity column上把蛋白里洗脱下来的条件。 |
z**b 发帖数: 192 | 3 感谢回帖。我要的是纯化总的DNA-protein complex(上面crosslink的蛋白不能去除,
不能变性), 需要将酶和反应buffer里的成分都去除干净,还要求recovery的百分比较
高,方法简单易行。望不吝赐教。
【在 m*********D 的大作中提到】 : 你是要纯化总个DNA-protein complex还是拆开complex就纯化DNA?一般DNA-protein结 : 合,需要一定的盐浓度,高KCl浓度,象300mM就可以了。这是许多纯化DNA/RNA : binding protein,从affinity column上把蛋白里洗脱下来的条件。
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s******y 发帖数: 28562 | 4 能不能用 agarose-conjugated DNaseI把DNA消化掉?然后过一下一次性的柱子,就把
DNaseI和小片断的DNA 都同时去掉了。
【在 z**b 的大作中提到】 : 与蛋白质结合的DNA用酶处理后需提纯。难点在于结合的蛋白质不能去除,蛋白不能变 : 性,这样就不能用phenol/chloroform或spin column的方法了。请教各位有没有简单可 : 行的方法,在下先行谢过了。
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z**b 发帖数: 192 | 5 感谢回复。可惜我是要蛋白质和DNA都保留。
【在 s******y 的大作中提到】 : 能不能用 agarose-conjugated DNaseI把DNA消化掉?然后过一下一次性的柱子,就把 : DNaseI和小片断的DNA 都同时去掉了。
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d****i 发帖数: 2346 | 6 你这个蛋白是已知的吗?如果是已知的,那么用这个蛋白的抗体(conjugated to
beads)和你的complex孵育一下,然后挂在磁性柱子上,杂蛋白洗掉。。。。。 |
s******y 发帖数: 28562 | 7 这样的啊,我还以为你是想把蛋白质和DNA分开呢。
那些经常做ChiP 的人应该有比较好的办法吧。
比方说你应该可以用DEAE resin (positively charged) 来收集DNA啊。
比方说QIAGEN Anion-Exchange Resin。
相应的蛋白也会被留下来的。
【在 z**b 的大作中提到】 : 感谢回复。可惜我是要蛋白质和DNA都保留。
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f*****r 发帖数: 84 | 8 不能平行做两个sample 么, 一个留蛋白, 一个留 DNA, 这样简单很多。 否则就看升
高盐浓度行不行了。 |
R******0 发帖数: 6158 | |
m********e 发帖数: 349 | 10 对阿,不能过一个size exclusion的柱子么, 把小于10kd的都留在柱子里。
【在 R******0 的大作中提到】 : 不能一起过个gel filtration柱子?
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