s******y
发帖数: 220 | 1 已经用nanodrop check 了， A260/280 是2.11， A260/230 是2.32
查了一下，A260/280对DNA是1.8， RNA是2.0， 是不是表示我的sample是OK呢？
有没有什么别的方法能快速验证一下，下游是要去做RNA seq的，谢谢！ |
j****t
发帖数: 1663 | 2 DNAse treatment试了吗？
另外，A260/280 的读数2.11挺正常的。 |
s******y
发帖数: 220 | 3 on column treat 了，
但是我上次把那个DNAse powder 溶解后，忘记放到-20 了，在4度放了近四周，虽然说
明书说可以放到六周，我还是很不放心，用的是purelink的 DNAse set。
主要是tissue sample太宝贵了，错过了要等好久，整个人都变得paranoid了：（
【在 j****t 的大作中提到】
: DNAse treatment试了吗？
: 另外，A260/280 的读数2.11挺正常的。
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j****t
发帖数: 1663 | 4 如不放心就买个新的试剂盒，重新做一遍DNAse treatment.
你也可以设计一个跨内含子的引物，用你的cDNA做一个PCR看看是不是有大小两条带。 |
Z******5
发帖数: 435 | 5 用过Qiagen提RNA的kit，其中有一步是在柱子上加DNase处理的，但是后来做RT-验证发
现效果一点都不好。
后来还是做反转之前用invitrogen的DNase1直接处理，RT-验证几乎没有DNA污染了。 |
n*******l
发帖数: 190 | 6 我一直用qiagen的kit.没有发现什么genomic dna的污染。请问你是通过什么发现
genomic dna污染的？
另外，现在qiagen有一种genomic dna elumination column,不需要DNase treatment,
不知道怎么样。
【在 Z******5 的大作中提到】
: 用过Qiagen提RNA的kit，其中有一步是在柱子上加DNase处理的，但是后来做RT-验证发
: 现效果一点都不好。
: 后来还是做反转之前用invitrogen的DNase1直接处理，RT-验证几乎没有DNA污染了。
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Z******5
发帖数: 435 | 7 反转录cDNA的时候，做一个对照，就是其它条件都一样，只是不加逆转录酶。 然后PCR
跑胶看条带。或者直接qPCR看曲线。
【在 n*******l 的大作中提到】
: 我一直用qiagen的kit.没有发现什么genomic dna的污染。请问你是通过什么发现
: genomic dna污染的？
: 另外，现在qiagen有一种genomic dna elumination column,不需要DNase treatment,
: 不知道怎么样。
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