s******y 发帖数: 220 | 1 已经用nanodrop check 了, A260/280 是2.11, A260/230 是2.32
查了一下,A260/280对DNA是1.8, RNA是2.0, 是不是表示我的sample是OK呢?
有没有什么别的方法能快速验证一下,下游是要去做RNA seq的,谢谢! |
j****t 发帖数: 1663 | 2 DNAse treatment试了吗?
另外,A260/280 的读数2.11挺正常的。 |
s******y 发帖数: 220 | 3 on column treat 了,
但是我上次把那个DNAse powder 溶解后,忘记放到-20 了,在4度放了近四周,虽然说
明书说可以放到六周,我还是很不放心,用的是purelink的 DNAse set。
主要是tissue sample太宝贵了,错过了要等好久,整个人都变得paranoid了:(
【在 j****t 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : DNAse treatment试了吗? : 另外,A260/280 的读数2.11挺正常的。
|
j****t 发帖数: 1663 | 4 如不放心就买个新的试剂盒,重新做一遍DNAse treatment.
你也可以设计一个跨内含子的引物,用你的cDNA做一个PCR看看是不是有大小两条带。 |
Z******5 发帖数: 435 | 5 用过Qiagen提RNA的kit,其中有一步是在柱子上加DNase处理的,但是后来做RT-验证发
现效果一点都不好。
后来还是做反转之前用invitrogen的DNase1直接处理,RT-验证几乎没有DNA污染了。 |
n*******l 发帖数: 190 | 6 我一直用qiagen的kit.没有发现什么genomic dna的污染。请问你是通过什么发现
genomic dna污染的?
另外,现在qiagen有一种genomic dna elumination column,不需要DNase treatment,
不知道怎么样。
【在 Z******5 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 用过Qiagen提RNA的kit,其中有一步是在柱子上加DNase处理的,但是后来做RT-验证发 : 现效果一点都不好。 : 后来还是做反转之前用invitrogen的DNase1直接处理,RT-验证几乎没有DNA污染了。
|
Z******5 发帖数: 435 | 7 反转录cDNA的时候,做一个对照,就是其它条件都一样,只是不加逆转录酶。 然后PCR
跑胶看条带。或者直接qPCR看曲线。
【在 n*******l 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我一直用qiagen的kit.没有发现什么genomic dna的污染。请问你是通过什么发现 : genomic dna污染的? : 另外,现在qiagen有一种genomic dna elumination column,不需要DNase treatment, : 不知道怎么样。
|