e********r
发帖数: 147 | 1 大家都知道，现在的genomic annotation对细胞内蛋白的翻译起始位点是“猜”的。对
于细菌基因组来说，ATG, GTG, CTG和TTG都有可能是起始位点。一般的分析倒也没必要
把这个事搞得很清楚。
但现在我们的项目需要先确定一个具体蛋白究竟是从哪儿开始翻译的。目前我们利用的
方法是用抗体去拽这个蛋白，希望富集到足够的量以后，通过N-terminal测序来确定。
然而这个蛋白的表达量很低，搞了多次还是拿不到足够的蛋白用于测序。那么现在问题
来了：大家还有更好的策略不？谢谢！ |
m******u
发帖数: 12400 | 2 搞清楚之后的目的是什么？
有些蛋白有多个其实翻译位点。
几乎所有的蛋白都会切除翻译起始位点（或）及其后的若干氨基酸，若不说分泌蛋白要
切除整个引导序列的话。 |
e********r
发帖数: 147 | 3 因为需要做对比实验分析，另一个ortholog理论上比它长30aa左右，但没有实验上的证
据，担心这30aa也是有功能的。如果到时候做结果来，功能差异来自预测差异，咱岂不
就虾米了吗？呵呵。
【在 m******u 的大作中提到】
: 搞清楚之后的目的是什么？
: 有些蛋白有多个其实翻译位点。
: 几乎所有的蛋白都会切除翻译起始位点（或）及其后的若干氨基酸，若不说分泌蛋白要
: 切除整个引导序列的话。
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j****x
发帖数: 1704 | 4 1. 内源蛋白表达量不够的话，那就尝试overexpress全长mRNA。
2. 根据理论上可能多出来的这30个aa合成多肽制备抗体。 |
