d********m
发帖数: 3662 | 1 一位朋友最近在和韩老师交流，他只上国内虎扑不上MITBBS，所以我征得他同意发到这
里，希望对正在重复这个实验的各位有所帮助。
for 24 well plate, 300ng NgAgo expression plasmid, 30-40ng GFP-N1, 200-500ng
5'P ssDNA guide----co-transfection. after 24 hours, detect GFP expression
under fluorescnet microscopy. do not use electric trasnfection. NgAgo can
remove 24bp from target, we suggest you do silver stain PAGE to observ T7E1
results; the "Protocol of NgAgo/gDNA-mediated genome editing and examination
(T7E1 assay) and a representative experiment" in ONLINE METHODS is very
helpful! good luck! |
S**********e
发帖数: 620 | |
l******r
发帖数: 18699 | 3 国内哪上的了mitbbs呀？不要笑话韩老师啦
【在 S**********e 的大作中提到】
: 虎扑？也交流这个
|
t***l
发帖数: 335 | 4 真的做实验的人。看到这段话。。trick很多的吧。。
我是觉得需要一点技巧的。。 |
d********m
发帖数: 3662 | 5 内行看个门道。你们做crispr的人看一下就知道这是敷衍还是真心想帮人重复出来了是吧
【在 t***l 的大作中提到】
: 真的做实验的人。看到这段话。。trick很多的吧。。
: 我是觉得需要一点技巧的。。
|
S**********e
发帖数: 620 | 6 技巧不是关键，多多少少都有，关键是刻意不跟人说技巧是什么。我要是发了nat bio
以后，我不太介意跟人介绍所谓的技巧，除非我走私假货。
【在 t***l 的大作中提到】
: 真的做实验的人。看到这段话。。trick很多的吧。。
: 我是觉得需要一点技巧的。。
|
D********d
发帖数: 2154 | 7 转染的时候，要默念三次“原力与我同在”，
就可以使用原力敲除基因。
凡是没有原力感应的衰人，是不可能做成功的。 |
c********6
发帖数: 693 | 8 这个哪里是建议啊？这个明显是耍人啊，说你们都是白痴就他牛 |
t***l
发帖数: 335 | 9 就这么一段话感觉有两种情况啊。
没有highlight的点可能是就没有什么特别的。直白的做就好了。不然就是藏私了。。
良心的protocol是 比如说我现在待的地儿，有个产品（非基因编辑的）在网上卖的。
我昨儿上网看到了眼网上的protocol，把我们实验室内部讨论和test过的所有注意点全
部写在里面了。。。而且是一有能增强效率的方法立刻更新protocol。。生怕别人做不
出来。。
不过当然了。。商业化的和学术界交流估计会有差。。。 |
