f**********r
发帖数: 91 | 1 PH>7. DTT如果浓度在0.5mM，有还原能力吗？这种还原/断裂反应一般需要多长时间
？谢谢了。 |
o****e
发帖数: 1011 | 2
广义说来，浓度再低，DTT也都有还原能力。
浓度主要影响的是反应速率。一般情况是浓度越低，反应速率越慢。
除了反应物(DTT，-S-S-)的浓度，影响这个反应的因素还很多，反应时间几分钟、
几小时都有可能。比如pH对DTT的还原性能影响很大，pH10一般要比pH7要快很多；
另外比如小分子的disulfide bond一般比"包在里面的"、大分子里的要容易反应。
当然，条件许可的话，升温也能加速反应。
【在 f**********r 的大作中提到】
: PH>7. DTT如果浓度在0.5mM，有还原能力吗？这种还原/断裂反应一般需要多长时间
: ？谢谢了。
|
s**********4
发帖数: 82 | 3 加点碱， TEA或者DBU啥的，半小时就够了，只要你DTT量够。 |
f**********r
发帖数: 91 | 4 我看到有些地方讲：浓度<5mM就基本没有还原性，只能做保护-SH基团不被氧化成-S-S-
键的添加剂。但是又看到有些文章用0.6mM的浓度打开-S-S-键，不知道critical的浓度
是多少？谢谢了。
【在 o****e 的大作中提到】
:
: 广义说来，浓度再低，DTT也都有还原能力。
: 浓度主要影响的是反应速率。一般情况是浓度越低，反应速率越慢。
: 除了反应物(DTT，-S-S-)的浓度，影响这个反应的因素还很多，反应时间几分钟、
: 几小时都有可能。比如pH对DTT的还原性能影响很大，pH10一般要比pH7要快很多；
: 另外比如小分子的disulfide bond一般比"包在里面的"、大分子里的要容易反应。
: 当然，条件许可的话，升温也能加速反应。
|
a*****s
发帖数: 681 | |
j***i
发帖数: 61 | 6 看氧化还原电势啊
DTT的如果我没记错是-330mV
蛋白的二硫键很少有低到-300mV的
pH 7.5-8.0室温一小时足够了
不放心就37C
【在 f**********r 的大作中提到】
: 我看到有些地方讲：浓度<5mM就基本没有还原性，只能做保护-SH基团不被氧化成-S-S-
: 键的添加剂。但是又看到有些文章用0.6mM的浓度打开-S-S-键，不知道critical的浓度
: 是多少？谢谢了。
|
