遇到一个奇怪的overexpression结果，大家有没有经验？ - Biology版

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Biology版 - 遇到一个奇怪的overexpression结果，大家有没有经验？

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K****a
发帖数: 161

我在目的基因CDS 3'端加了一个Flag-tag，然后转化Arabidopsis野生型，用的是35S
promoter。转化植株的第一代RNA水平高的株系挑选出来传代，第二代出现表型分离，
而且符合3：1的比率。用Northern检测第二代植株的RNA水平，发现出现特殊表型的植
株中RNA水平很高，但是用western检测不到蛋白表达。所以我设计了三段探针，分别用
目的基因CDS的前，中，后三部分，Northern结果发现前段和中段探针能检测到高表达
，但是最后一段却没有信号。
现在我想的是高表达的RNA不是全长，所以用Anti-Flag抗体检测不到蛋白表达。但是我
不知道为什么会出现这种情况。构建的用的是CDS，不含任何intron，按理说不会出现
alternative splicing。我现在想的是在5'端再加上一个HA-tag，转化得到过表达植株
，看看会不会出现相同表型，如果有的话，RNA是不是truncated，如果是的话，用Anti
-HA抗体检测看看有没有truncated protein存在。
遇到过这种现象的同学能不能指导一下，我想破脑袋也没想通。多谢！

K****a
发帖数: 161

自己顶一下。大家都没有遇到过类似的情况吗？

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