l**********1
发帖数: 5204 | 1 merci!
plus
PMID 22622569
Nature. 485: 459-64.
by Edgar RS et al.
Peroxiredoxins are conserved markers of circadian rhythms.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22622569
it seems that ancient eubacterail if actin/tubulin/myosin 的总体动态以及相关
的body liquid response factor if hold 生理时钟 then it orgin birth age was
around 2.5 Billion Ys ago when O2/N2 ratio suddendly increaced within the
earth atmosphere...
Should we try testify it by In Vitro method/s? Sunnyday
钟。
dynamics
Geneva |
|
C*********m
发帖数: 213 | 2 如果是actin 这样的polymer 就基本无解了。 |
|
C*******e
发帖数: 4348 | 3 应该不是
不过研究actin的都是用什么样的手段呢？ |
|
t******k
发帖数: 599 | 4
actin。理论上ct应该无穷大。不过实际操作的时候大约33.34的样子。 |
|
w***a
发帖数: 1053 | 5 Actin remodeling,cell adhesion
太多基因了
让sunnyday来说说 |
|
t**********8
发帖数: 223 | 6 最近做了几十个q-pcr，是用actin做内参。今天老板email给我说，他朋友说必须要用
ERCC spike-in做internal control才准确。现在大家做q-pcr都用ERCC spike-in了吗
？ |
|
|
s******s
发帖数: 1584 | 8 挺正常的，我都是按BCA 走一遍ACTIN 或者GAPDH 再按loading control 再RUN 一遍 |
|
j******9
发帖数: 128 | 9 First you detect you sample using BCA.
Then you need adjust your samples accoring to the concentration and run gel
for hybridizing actin.
Finally you adjust your samples again according the different density of
action.
That is all |
|
s***e
发帖数: 911 | 10 其实试验上最近突破挺大的。最近有两篇文章几乎同时出来(PNAS; Naure
Communication), 关于in vitro formin如何感应力并调控actin生长速度。不知道你看
到没有。in vivo 也有很大进展。Sheetz组现在能够直接in vivo 测量 focal
adhesion protein的end-to-end distance. 其中talin的工作去年已经发表在PLoS
Biology上。 今年会有一系列别的蛋白的结果出来。会非常有趣。
in vitro adhesion protein如何感受机械力，如何unfold, 如何因此和别的signaling
protein相互作用把机械力信息转化成生化反应信号传递，今年会有一系列工作出来，
包括talin-vinculin, alpha-actenin - vinculin, 等。
上面这些全部都是直接单分子测量，和模拟无关。 我觉得你说得挺对的。这个方向似
乎很快就会有很大突破。 |
|
|
i***l
发帖数: 1656 | 12 1. normalized mRNA or protein levels in different species:
qpcr for mRNA (easier &faster)
WB for protein
using actin for normalization
2. in vitro expression of target homologs from species and campare the
binding efficiency side by side |
|
e*******r
发帖数: 275 | 13 请问版上哪位可不可以refer我一些审稿机会，最近心力交瘁，急需申请绿卡。先谢过
了。
方向大致是dendritic spines, dendritic spine morphology,actin, cytoskeleton,
receptor tyrosine kinase, opioid receptors, GPCR, functional selectivity,
arrestin recruitment. etc.
a**********[email protected] |
|
T**7
发帖数: 264 | 14 Nature Reviews Immunology 11, 642-643 (October 2011)
B cells: WASP stings autoreactive B cells
Maria Papatriantafyllou
Abstract
Patients with Wiskott–Aldrich syndrome (WAS) — who carry a mutation in the
gene encoding the WAS protein (WASP) — are immunodeficient and have a high
risk of developing autoimmunity. WASP is expressed by immune cells,
including B and T cells, and is a regulator of the actin cytoskeleton.
谢谢！
20个包子酬谢
E-mail m******[email protected] |
|
C****c
发帖数: 1964 | 15 现在用的是actin，经常很脏，而且loading variation很大，大家都用什么loading
control呢？有用tubulin的吗？求推荐一个干净的tubulin antibody？谢谢！ |
|
|
o**4
发帖数: 35028 | 17 你是说测 b-actin 之类的作为loading control？ |
|
|
m*********r
发帖数: 49 | 19 多谢大家的帮忙，shakuras和ajwook推荐的换成actin 5c启动子的确是最直观值得一试
的解决办法。roca说直接用果蝇表达，这样的好处是目标蛋白的翻译后修饰确定性更高
。 |
|
T****i
发帖数: 15191 | 20 我本来想买一个，但听说得一个抗体一个抗体地试条件。就做罢了。常用的如actin,
Tubulin应该没问题。 |
|
l*****e
发帖数: 3500 | 21 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。 |
|
|
|
q******g
发帖数: 3858 | 24 methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了 |
|
s**2
发帖数: 1287 | 25 YES!
Nor can use ethanol to dehydrate. |
|
l*****e
发帖数: 3500 | 26 好吧，因为问过别人，他们用的是methanol。
我下次试试PFA |
|
c*****u
发帖数: 357 | 27 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题， |
|
l*****e
发帖数: 3500 | 28 我重新订了一管，应该是试了两管。。。。。。。。。。。 |
|
n***w
发帖数: 2405 | 29 我也觉得20分钟methanol有点长。我一般都是1-5分钟。 |
|
b**********8
发帖数: 349 | 30 而且染Phalloidin之前不能用triton打孔，否则非特异染色会很重， |
|
l*****e
发帖数: 3500 | 31 我用methanol 在低温固定20分钟，然后PBS洗了，然后用10%goat serum，0.3% triton
的PBS block半小时，然后用phalloidin染的，咋什么都没有，奇怪死了，试了好几次
，按理说这个应该很好染。 |
|
|
|
q******g
发帖数: 3858 | 34 methanol几分钟就成了。20分钟太长了。4%PFA应该就成了 |
|
s**2
发帖数: 1287 | 35 YES!
Nor can use ethanol to dehydrate. |
|
l*****e
发帖数: 3500 | 36 好吧，因为问过别人，他们用的是methanol。
我下次试试PFA |
|
c*****u
发帖数: 357 | 37 去别人实验室借一管Phalloidin， 看是不是你的试剂除了问题， |
|
l*****e
发帖数: 3500 | 38 我重新订了一管，应该是试了两管。。。。。。。。。。。 |
|
n***w
发帖数: 2405 | 39 我也觉得20分钟methanol有点长。我一般都是1-5分钟。 |
|
b**********8
发帖数: 349 | 40 而且染Phalloidin之前不能用triton打孔，否则非特异染色会很重， |
|
l*****e
发帖数: 3500 | 41 问题出在了用blocking buffer稀释phalloidin。
triton |
|
w*******s
发帖数: 10 | 42 4% PFA +0.25%triton 37degree 12min, 然后pbs洗3次，如果有background，用NaBh4
quench 个7-10分钟 室温，然后pbs在洗3次。加上phalloidin overnight，搞定。 |
|
s*****i
发帖数: 315 | 43 RE
NaBh4
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6 |
|
f**l
发帖数: 22 | 44 一定不能用 methanol
PFA 5min RT is long enough although longer fixation does not hurt
triton |
|
b*********2
发帖数: 35 | 45 1. 大家平时都用BCA来检测蛋白浓度吗？有什么准确的方法？
2。 除了beta-actin， GAPDH，还有什么house-keeping marker吗？
3。 对于ECM 蛋白检测，用什么内参呢？
谢谢了。 |
|
i*********0
发帖数: 915 | 46 这个问题可能问的比较的挫：我从同事们拿来几个cDNA的样品（不同gene 的KO HSC的
样品），想看看一个target gene的表达，在不知道同事们做1st strand synthesis 起
始RNA 样品量的情况下，仅靠reference gene （比如beta-actin）和target gene 的
相对ct数值的差异能确定不同样品中target gene 的表达么？样品浓度差异会不会对结
果造成影响？ |
|
d********0
发帖数: 534 | 47 晕，GAPDH应该比belta-actin还稳定吧，怎么可能这么少，我们老板说过，大于30的
gene要么是不表达，要么是有问题，因为就是一点样品都不加，也可能跑出30，大于30
就与机器误差很难鉴别了 |
|
s*****g
发帖数: 7857 | 48 要不
1。固定，打孔，直接免疫荧光染色，照相？（你会需要一个cytospin的机器把悬浮细
胞离心到玻片上）
2。或 IP-Western
3。 或针对此蛋白做细胞的免疫荧光染色， 再做Flow cytometry
4。灵敏的 ECL 液体也是关键。反正GE 的ECL不行。 我平时都是用GE的加少量
MILLIPORE的。MILLIPORE的太强了，有杂带，还需要更好的分子量marker. （GE的我们
是专门用
来显GAPDH，ACTIN等常规大量蛋白的） |
|
f**n
发帖数: 2 | 49 最近看到这篇cell migration的文章。图没几张，video没几个，居然上Cell. 一大堆
quantification， Figure S5的染色完全都是background，居然说cell migration是
actin independent. 做细胞骨架的大家以后吃西北风去吧，没你们什么事了，哈哈...
..
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24726433
Water permeation drives tumor cell migration in confined microenvironments.
Stroka KM, Jiang H, Chen SH, Tong Z, Wirtz D, Sun SX, Konstantopoulos K.
Cell. 2014 Apr 24;157(3):611-23. doi: 10.1016/j.cell.2014.02.052. Epub 2014
Apr 10. |
|
s*****i
发帖数: 315 | 50 肌肉组织用actin不好么
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7 |
|
