l***g
发帖数: 19 | 1 很奇怪啊，H460好像是肺癌细胞吧。我原来用过不同浓度（0-30uM）的cisplatin处理
过A549细胞36小时，细胞凋亡可以检测到cleaved PARP，beta-actin的条带不会受到影
响的，我可以检测出来。我是用的SDS sample buffer直接裂解的细胞。 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 2 http://en.wikipedia.org/wiki/Cisplatin
Cisplatin, cisplatinum, or cis-diamminedichloroplatinum(II)[1] (CDDP) (trade
name Cisplatin,brand name Platin marketed by Cadila Healthcare according to
FDA Orange Book) is a chemotherapy drug. It was the first member of a class
of platinum-containing anti-cancer drugs, which now also includes
carboplatin and oxaliplatin. These platinum complexes react in vivo, binding
to and causing crosslinking of DNA, which ultimately triggers apoptosis (
programmed cell... 阅读全帖 |
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c******d
发帖数: 647 | 3 second this,cisplatin就是起交联作用，重要的作用对象就是DNA
这种药物作用很强，12uM,48小时，到底细胞死了多少呀，
我觉得恐怕没多少剩下了，用过2uM处理48小时，细胞没剩多少，但actin作为loading
control没啥变化
trade
to
class
binding |
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s*******2
发帖数: 598 | 4 We just got new 2nd anti-mouse IgG from cell signaling 2-3 months ago, and
even I used 1/1000 as 1st antobody, 1/2000 as 2nd antibody on 1/16/13
experiement, too strong for actin, but no band for drug tretament group.
，http://www.nature.com/cdd/journal/v5/n7/abs/4400392a.html |
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i*****o
发帖数: 480 | 6 用western确认immunostaining的结果，看是不是表达量有差别。现在用的是tubulin，
但结果不consistent，而且看了相关的文献用的是actin比较多，所以想知道这里有没
有什么说法。 |
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m******5
发帖数: 1383 | 7 其实我觉得非特异带才是最靠谱的
大多数时候上样量差一点beta actin也是平的，反而非特异带如实反映了趋势差别 |
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v***a
发帖数: 1242 | 8 用这个染actin千万不能用methanol一类的，推荐PFA
triton |
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l*****e
发帖数: 3500 | 9 一起共染的抗体没问题，试了几次，共染的和单独染的都没看到actin，哎哎。其它部
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。 |
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c*********r
发帖数: 1312 | 10 Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
用methonal fix。 |
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v***a
发帖数: 1242 | 11 用这个染actin千万不能用methanol一类的，推荐PFA
triton |
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l*****e
发帖数: 3500 | 12 一起共染的抗体没问题，试了几次，共染的和单独染的都没看到actin，哎哎。其它部
分都没问题。
至于PFA和methanol好像各个protocol都有推荐。。。。。。。。 |
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c*********r
发帖数: 1312 | 13 Methonal好像会破坏F-actin吧。我们的sea urchin embryo要用Phalloidin的话就不能
用methonal fix。 |
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u****t
发帖数: 795 | 14 人正常细胞，有几个copy的Beta Actin？谢谢 |
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m****g
发帖数: 530 | 15 阿片戒断后形成的负性情绪记忆对强迫性用药和戒毒后复吸具有重要作用。然而目前对
阿片类毒品戒断形成负性情绪学
习、记忆的分子机理知之甚少。
近日，中科院上海药物研究所刘景根研究组发现，吗啡戒断负性记忆形成过程中作为突
触结构可塑性基础的突触主要结构
蛋白(actin)发生重排（突触骨架重构），表现为聚合态突触骨架蛋白F-actin显著增加
。Actin重排仅发生在与戒断记忆形
成密切相关的杏仁核区域和海马区域，而在与戒断记忆形成无关的伏隔核区域并未检测
到Actin重排。Actin重排对吗啡戒
断负性记忆的形成至关重要：在杏仁核和海马局部注射Actin重排抑制剂可以阻止戒断
负性记忆形成。研究工作进一步发现
杏仁核调控海马神经元突触Actin重排，损毁杏仁核能抑制背侧海马Actin重排。
研究工作还发现杏仁核调控海马突触骨架重构是通过β-肾上腺素能神经元通路实现的
。在杏仁核注射肾上腺素阻断剂可以
抑制海马Actin重排，反之注射激动剂可以诱发海马Actin重排。研究结果不仅揭示了吗
啡戒断负性情绪记忆形成的分子基
础，而且还阐明负性情绪记忆形成中不同脑区的相互调节，研究工作为了解阿片成 |
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t******y
发帖数: 716 | 16 不同蛋白因为侧链的酸碱性，疏水性，电荷性等差异，往往在电泳中跑出来的图形会有
差异，也就是相同的蛋白起条带往往比较类似。这里的图形是指，条带的形状，边缘是
否圆润，像我前面举的例子fig6b，actin的条带表现为底部宽，顶部为圆弧形，而这与
曹文章中其他actin的条带形状相反，其他的actin条带是底部为圆弧形，顶部为宽的直
线。根据蛋白电泳的方向，actin从上往下跑，电泳前沿形成圆弧形似乎更加有道理，
所以，我觉得fig6b的actin图形应该以平行纸面为轴，作180度旋转。 |
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a******m
发帖数: 3422 | 17
把地铁比喻成血管很有味道。记得好像是地下3层？第一次去是很震撼。
很多年前还是做学生的时候，和一帮毕业实习的外国朋友，驾着公车去巴黎，由一位土
生土张的法国小伙领路，伴着他美丽的法国女友去巴黎市郊的家。一路听着艾薇儿的
complicated, 横穿德国，也第一次领略了导航仪的神奇。
http://www.youtube.com/watch?v=5NPBIwQyPWE
那一个星期发生和很多难以忘怀的故事：
一路上大家跟着那个法国女孩学入门法语。。。
同行的带了婚戒的俄罗斯美女搭上新的德国帅哥。。。
在圣心堂的台阶上，我们俯瞰巴黎的夜景，听着台阶下的吉他演唱，
在Metro的阴暗巷道里我们应吭高歌，
土生土张的法国小伙带着我们，在同性恋聚集的餐厅晚餐，夜色里穿越小巷光顾各色酒
吧，半夜意犹未尽的一帮人，只有到加油站买酒，回来在阁楼烛光夜宵。。
早晨去面包店，看着美丽的面包姑娘，用刚学的法语，买baguette, etc...
原来巴黎人的咖啡是用碗喝的？
原来巴黎人打招呼是说傻女，不是跛脚的。。。
那正是个“放荡不羁”的年轻时代！现在看着大家在枫丹白露的照片，那对年轻的法国
恋人早就分... 阅读全帖 |
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b****r
发帖数: 17995 | 18 呵呵难得碰到你不了解的玩意。这种基因挺多啊
segmental duplication里面的基因们基本上就是这种了
当然不见得每个氨基酸都完全一样。就连一个人的两个allele之间都不一定一模一样嘛
回到楼主的问题，我不知道有人留意到过没，最常用的house keeping基因之一，beta
actin，除了自己，在基因组里还有起码超过10个没有外显子的假基因，我估计是因为
beta actin的mRNA浓度太高，碰巧被逆转录病毒给搞回基因组了。这样的话，如果你企
图用常用的跨内含子的引物来排除cDNA里genomic DNA的干扰，对于beta actin来说可
能造成很大的误差。只有5‘UTR的位置比较容易设计这种跨外显子的beta actin特异引
物。我看过很多人的文章，包括一些CNS牛文，都没有注意这一点 |
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p*****c
发帖数: 20445 | 19 Christopher D. Lima, Ph.D.
Memorial Sloan-Kettering Cancer Center
Christopher Lima doesn’t pick easy problems. A structural biologist, he is
investigating how cells attach small proteins—like ubiquitin and the
related molecule SUMO—to other proteins to modify their function or fate.
Alongside those studies, he is exploring the molecular mechanisms that
underlie RNA processing and degradation—modifications to an RNA copy of a
gene that influence its stability and ability to be used as a template ... 阅读全帖 |
|
p*******r
发帖数: 156 | 20 Postdoctoral positions available
A postdoctoral position is available in the Laboratory of Cellular and
Molecular Biology at the National Cancer Institute. A focus of current
studies is understanding the contribution of integrin adhesion complexes,
including focal adhesions and invadopodia, to the control of cancer cell
proliferation and survival. A class of proteins called the Arf GTPase-
activating proteins (Arf GAPs), which regulate the Ras-superfamily proteins
Arfs and integrin adhesions, ... 阅读全帖 |
|
A********e
发帖数: 354 | 21 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: albertsmwk (.)(.), 信区: Biology
标 题: 第一批“青年千人计划”生物类@publication列表@
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Aug 18 15:04:16 2011, 美东)
花了一个小时，深深的鄙视一下自己的无聊行径！！
125 蔡亮 男 1980年11月 复旦大学 生命
科学 2007年12月毕业于[美国]北卡大学 [美国]加州大学旧金山分校 博士后
Cai L, Mostov K. Polarity is destiny. Cell. 2009 Nov 13;139(4):660-2. PubMed
PMID: 19914162; PubMed Central PMCID: PMC2900917.
Cai L, Makhov AM, Schafer DA, Bear JE. Coronin 1B antagonizes cortactin and
remodels Arp2/3-containing actin branche... 阅读全帖 |
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p*******r
发帖数: 156 | 22 Postdoctoral positions available
A postdoctoral position is available in the Laboratory of Cellular and
Molecular Biology at the National Cancer Institute. A focus of current
studies is understanding the contribution of integrin adhesion complexes,
including focal adhesions and invadopodia, to the control of cancer cell
proliferation and survival. A class of proteins called the Arf GTPase-
activating proteins (Arf GAPs), which regulate the Ras-superfamily proteins
Arfs and integrin adhesions, ... 阅读全帖 |
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p*******r
发帖数: 156 | 23 Postdoctoral positions available
A postdoctoral position is available in the Laboratory of Cellular and
Molecular Biology at the National Cancer Institute. A focus of current
studies is understanding the contribution of integrin adhesion complexes,
including focal adhesions and invadopodia, to the control of cancer cell
proliferation and survival. A class of proteins called the Arf GTPase-
activating proteins (Arf GAPs), which regulate the Ras-superfamily proteins
Arfs and integrin adhesions, ... 阅读全帖 |
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p*******g
发帖数: 2976 | 24 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: albertsmwk (.)(.), 信区: Biology
标 题: 第一批“青年千人计划”生物类@publication列表@
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科学 2007年12月毕业于[美国]北卡大学 [美国]加州大学旧金山分校 博士后
Cai L, Mostov K. Polarity is destiny. Cell. 2009 Nov 13;139(4):660-2. PubMed
PMID: 19914162; PubMed Central PMCID: PMC2900917.
Cai L, Makhov AM, Schafer DA, Bear JE. Coronin 1B antagonizes cortactin and
remodels Arp2/3-containing actin branche... 阅读全帖 |
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O***n
发帖数: 13127 | 25 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: albertsmwk (.)(.), 信区: Biology
标 题: 第一批“青年千人计划”生物类@publication列表@
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Aug 18 15:04:16 2011, 美东)
花了一个小时，深深的鄙视一下自己的无聊行径！！
125 蔡亮 男 1980年11月 复旦大学 生命
科学 2007年12月毕业于[美国]北卡大学 [美国]加州大学旧金山分校 博士后
Cai L, Mostov K. Polarity is destiny. Cell. 2009 Nov 13;139(4):660-2. PubMed
PMID: 19914162; PubMed Central PMCID: PMC2900917.
Cai L, Makhov AM, Schafer DA, Bear JE. Coronin 1B antagonizes cortactin and
remodels Arp2/3-containing actin branche... 阅读全帖 |
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h********n
发帖数: 4079 | 26 我的做法是: 直接用这个基因是actin的倍数来做图, x轴是不同细胞或者同意细胞里不同基因.
2^(Ct of actin - Ct of gene x), 用raw data做图. 我们用这个方法投稿发表, 没啥问题.
另外, 我建议actin可能比gapdh更好, 在cancer里面, gapdh变化也不小. |
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h****n
发帖数: 2552 | 27 Actin in living and fixed characean internodal cells: identification of a
cortical array of fine actin strands and chloroplast actin rings
Journal Protoplasma
Publisher Springer Wien
ISSN 0033-183X (Print) 1615-6102 (Online)
Issue Volume 190, Numbers 1-2 / March, 1996
Observations with Hoechst Staining of Amitosis in Acanthamoeba castellanii
Journal of Eukaryotic Microbiology
Volume 38 Issue 3, Pages 221 - 224 |
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a********k
发帖数: 2273 | 28 花了一个小时，深深的鄙视一下自己的无聊行径！！
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科学 2007年12月毕业于[美国]北卡大学 [美国]加州大学旧金山分校 博士后
Cai L, Mostov K. Polarity is destiny. Cell. 2009 Nov 13;139(4):660-2. PubMed
PMID: 19914162; PubMed Central PMCID: PMC2900917.
Cai L, Makhov AM, Schafer DA, Bear JE. Coronin 1B antagonizes cortactin and
remodels Arp2/3-containing actin branches in lamellipodia. Cell. 2008 Sep
5;134(5):828-42. PubMed PMID: 18775315; PubMed Central PMCID: PMC2570342.
Cai L, Makhov AM, Bear JE. F-actin... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 29 Did you try test the level of leakiness with no isotope label actin?
i mean whether your target even abundantly but still holded entirely intra- cellular tyrosine-
containing protein, such as actin or tubulin:
then your negative control with 35S labeled that also became Immunoprecipitation positively
Details please go to
Protocol full text link:
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPCB.ch07.Protein%
20Labeling.pdf
cited :
>For many applications, an important control for surface-l... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 30 Did you try test the level of leakiness with no isotope label actin?
i mean whether your target even abundantly but still holded entirely intra- cellular tyrosine-
containing protein, such as actin or tubulin:
then your negative control with 35S labeled that also became Immunoprecipitation positively
Details please go to
Protocol full text link:
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPCB.ch07.Protein%
20Labeling.pdf
cited :
>For many applications, an important control for surface-l... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 31 同意 买买提 actin No. one faculty sunny day's 回复
BTW sunnyday 对
SMARCA2 相关的up and down stream realrive control transcription factors 熟
悉不?
SWI/SNF related, matrix associated, actin dependent regulator of chromatin,
subfamily a, member 2
----
Re:
发信人: sunnyday (飞鱼. 发胖中.飞不动了), 信区: Biology
标 题: Re: 什么是membrane ruffle?
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 3 11:46:03 2012, 美东)
就是细胞膜底下堆着高高一堆actin 把膜都拱起来了。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 32 呵呵，我不知道的东西多了。我上这个网站的一个动力就是听你们讲一些我不知道的东
西。
你说的那个actin 假基因，有没有人留心看过他们的5'-UTR and 3'-UTR? 因为假如是
体内自身的actin mRNA 不小心搭了病毒的车被转回去的话，应该在UTR 区域也和那个
真的actin类似吧？
beta |
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i*********0
发帖数: 915 | 33 最近我们这边的cre也是又问题，以前都是结合着actin （作为内参），cre和actin的
带都很sharp，现在不管怎么还条件都是smear。隐约能看到cre的带，但是actin基本上
看不到。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 34 版上火药味好浓啊，大家看看文章散散心吧。
新出的文章认为actin 的总体动态以及相关的serum response factor 是一个生理时钟。
Cell. 2013 Jan 31;152(3):492-503. doi: 10.1016/j.cell.2012.12.027.
Blood-borne circadian signal stimulates daily oscillations in actin dynamics
and SRF activity.
Gerber A, Esnault C, Aubert G, Treisman R, Pralong F, Schibler U.
Source
Department of Molecular Biology, Sciences III, University of Geneva, and
National Centre of Competence in Research Frontiers in Genetics, 1211 Geneva
, Switzerland.
Abstract
In peripheral ti... 阅读全帖 |
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s***e
发帖数: 911 | 35 其实我觉得如果把focal adhesion定义放宽点就没有什么特别大的debate了。Focal
adhesion的形貌和intracelluar actin network的3D组织有关，而actin network的形
成又和ECM的力学和几何形貌有关。比如在表面上，fibrinectin coated surface的大
小，形状都影响actin network形貌和细胞形状。从二维到三维, 拓扑上的改变更为剧
烈。所以看不见通常在二维成像上定义的focal adhesion斑块也属正常。
可能更重要的问题应该是调控二维表面focal adhesion形成和稳定性的蛋白们是否也调
控三维cell-ECM相互作用和cell migration. 在三维, 过去已经知道会形成
pseudopodia. 这个结构调控细胞migration, 而这个结构的形成又被focal adhesion
proteins调控。如果宽泛地把通常的二维focal adhesion和三维pseudopodia看作同一
套调控cell-
ECM相互作用的蛋白在不同topology下的表现形式，那么就没有那... 阅读全帖 |
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s***e
发帖数: 911 | 36 你说的这种是特定的重要生物过程信号通路里的Mechanoisensing. YAP/TAZ的
subcellular localization肯定受力调控，这个是已经实验确定的。Notch pathway
notch receptor cleavage也已经知道是受力调控的。刚才我顺手google, 发现也有很
多文献报道wnt pathway也直接受力调控。这些实验表明力可以是调控重要生物过程的
重要因素，不代表是必要因素。所以你的结果其实和Hippo mechanosensing没有显著茅
盾。对了，能分享一下你怎么通过knockout模型来讨论hippo和mechanosensing的联系
的？还想请教一下YAP在细胞质内是和那些蛋白相互作用？我对hippo mechanosensing
很感兴趣，但是对hippo相关的生物基本不了解。正在自学。
除了这些有名字的信号通路，mechanosensing在cell-ECM连接，cell-cell连接, cell
migration, tissue maintenance, 离子通道, actin stabilization, mus... 阅读全帖 |
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B***v
发帖数: 113 | 37 1. clathrin knockdown ---> clathrin dependent endocytosis
2. caveolin knockdown ---> Caveolae-dependent Endocytosis
3. actin polymerization inhibition ---> macropinocytosis
是这个逻辑吧？
actin polymerization inhibition不会影响1和2吗？
actin
knockdown |
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p*******g
发帖数: 2976 | 38 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: albertsmwk (.)(.), 信区: Biology
标 题: 第一批“青年千人计划”生物类@publication列表@
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Aug 18 15:04:16 2011, 美东)
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125 蔡亮 男 1980年11月 复旦大学 生命
科学 2007年12月毕业于[美国]北卡大学 [美国]加州大学旧金山分校 博士后
Cai L, Mostov K. Polarity is destiny. Cell. 2009 Nov 13;139(4):660-2. PubMed
PMID: 19914162; PubMed Central PMCID: PMC2900917.
Cai L, Makhov AM, Schafer DA, Bear JE. Coronin 1B antagonizes cortactin and
remodels Arp2/3-containing actin branche... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 2876 | 39 能不能用drug抑制actin filaments?
谢谢，但是这些策略对我们没有用，因为我们的蛋白是在细胞骨架里面的，
如果用温和裂解液的话，超过一半的蛋白就和actin filaments 一起在低速离心
下沉到pellet里了。要把所有蛋白都分出来的话我现在是用8M urea, 但是这样
就成了一个gel-like structure, 我也试过pre-clear step with beads，
但是发现根本没有用，因为整个溶液（就是一个胶体结构）都粘在resin bead上，
用普通的desktop centrifuge根本分不开。
release
down |
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S******9
发帖数: 2837 | 40 你这个beta-actin Cre是non inducible的？
我们组研究的target基因就是在胚胎11.5～12.5天的时候死掉。即使是Tie2 Cre内皮特
异性的也是的。所以我们研究的成鼠是用的beta-actin Cre是inducible的，可惜我们
的flox做的不是特别好，有leaky现象，部分老鼠实际出生的时候已经有很大的ko了，
当然用药物诱导以后可以ko掉90%。
叫你老板把我招去吧，我喜欢做老鼠model的活。做atherosclerosis，vasoactivity，
原代血管内皮培养，各种组织切片染色。 |
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h*********e
发帖数: 6997 | 41 目前用的是Bio-rad Trans-Blot Transfer Medium Pure Nitrocellulose membrane，
本来一张膜可以blot三四种不同蛋白，用三四次，最近不知什么原因不行了，有时blot
第二种蛋白，即使是b-actin都看不到条带了。而有些查看的蛋白和actin位置比较接近
，不好把膜剪了，这样的话想检测internal and loading control都不好办。
大家有没有其它膜可以推荐的？ |
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r**a
发帖数: 121 | 42 请问做果蝇的人
知道这个driver有在第二个染色体上的吗？
我的那个基因，可能是每个细胞都必须要的基因，在第三个染色体上面
我用actin-gal4来rescue，发现还是不行
查了之后，发现这个actin-gal4在embryo不是在所有细胞表达（scattered expression）
所以想用tub-Gal4，可是这个基因在第三个染色体上，这样不能用来做rescue
请问，有人知道有在第二个染色体上的tub-Gal4吗？
或者有其他什么办法（难不成把tub-Gal4重组到我的突变体上）？
谢谢了！ |
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M*****1
发帖数: 371 | 43 我最近用mouse monoclonal的smooth muscle actin抗体做western和immuno研究小鼠组
织，western只有一条带，在40几50处，不知道这是smooth muscle actin呢还是IgG.
因为以前用小鼠抗体研究小鼠组织的其他蛋白时，在50的地方一直都有一条很强的带，
被告之是IgG.另外immuno背景特强，即便是negative control也有较强的背景，估计也
跟IgG有关。请问我应该注意什么？是不是应该用其他host的抗体？ |
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s**c
发帖数: 34339 | 44 ctin in living and fixed characean internodal cells: identification of a
cortical array of fine actin strands and chloroplast actin rings
http://www.sendspace.com/file/llhx98 |
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G******O
发帖数: 189 | 46 I didn't question that 180 degree rotation. What I said is that if the blot
is rotated, you will find the actin bands in Fig6b is too similar to the
last two actin bands in Fig6a. Does this happen commonly? |
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Z******5
发帖数: 435 | 47 应该不是上样量的问题，我striping后（或者跑的久一点，从45kD处剪开），用beta-
actin杂交，内参的信号已经非常强了，而内源性的c-myc还是很弱。
我用过的两家c-myc的抗体都能杂处很多条带，其中在48-65kD之间有三条条带，转入质
粒过表达显示最上面的条带才是c-myc的（有抗体公司说是表观分子量68kD，有文章说
是64kD，不过所指的是同一条带）。你可以参考这篇文章Nucleolar localization of
hepatic c-Myc: a potential mechanism for c-Myc regulation
关于内源性c-myc杂交很弱的问题，我查过很多文章，多数都是杂带很多，64kD处很弱
。有个别条带很专一，信号很强的，我很怀疑，因为我知道有人拿其它抗体，比如
actin抗体做了个figure，然后说是c-myc杂交的，还发了不错的文章。 |
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f*********r
发帖数: 1233 | 48 actin，我的理解是表达极强的蛋白。基本可以看作是housekeeping，做loading
control。所以应该是极强，至少也是很强。在默认设置下，应该是强信号，甚至是过
饱和。这种背景还算低，但actin信号几乎没有的情况，说明western本身有问题。
如果其他步骤没有出差错的话，最大问题就是二抗-milk组合出了问题。
odyssey是不推荐使用奶粉的。就是因为它太灵敏，牛奶甚至普通bsa的背景太高。
因为很多公司这么做，所以我怀疑licor也可能会这样。licor一向推荐自己出的二抗和
blocking buffer。尤其是后者，比牛奶和bsa都贵很多，是他们公司主打消耗品之一。
他们非常不愿意见到客户用廉价的奶粉。别家出的二抗他管不了，但是自家的二抗，很
可能有什么技术，保证它与奶粉和普通bsa不兼容。
下面有两个选项可以尝试一下。
1）改用licor专用blocking buffer试一下。
2）改用别家二抗试一下。（rockland, invitrogen等公司都有比较成熟的红外荧光二
抗）。
2个选项交叉试一下，一共4种条件（含原先二抗-奶粉组合）。有了这四种对... 阅读全帖 |
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s******r
发帖数: 2876 | 49 这个sample本身就比较稀，第一条lane已经是1:5稀释，后面是1:25, 1:125稀释。
所以western 本身的问题应该不大，主要是想看看在我手里ECL和Odyssey哪个好使，
可能二抗和blocking buffer都不够好，所以我这个看起来Odyssey比普通ECL要弱上
几倍。
actin，我的理解是表达极强的蛋白。基本可以看作是housekeeping，做loading
control。所以应该是极强，至少也是很强。在默认设置下，应该是强信号，甚至是过
饱和。这种背景还算低，但actin信号几乎没有的情况，说明western本身有问题。
如果其他步骤没有出差错的话，最大问题就是二抗-milk组合出了问题。
odyssey是不推荐使用奶粉的。就是因为它太灵敏，牛奶甚至普通bsa的背景太高。
因为很多公司这么做，所以我怀疑licor也可能会这样。licor一向推荐自己出的二抗和
blocking buffer。尤其是后者，比牛奶和bsa都贵很多，是他们公司主打消耗品之一。
他们非常不愿意见到客户用廉价的奶粉。别家出的二抗他管不了，但是自家的二抗，很
可能有什么技术，... 阅读全帖 |
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